一种CHO细胞无血清无蛋白培养基及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种CHO细胞无血清无蛋白培养基及其用途，包括氨基酸组分、维生素组分、无机盐组分、微量元素组分及碳水化合物和其他分子化合物组分。本发明专利技术的无血清培养基，化学成分明确，成本低廉，不需要血清的同时，也避免了因使用血清带来的生物安全风险，为生物制品，特别是蛋白类药物的规模化生产提供方便。且CHO细胞在本发明专利技术培养基中生长良好，无血清的使用，有利于提高生物制品生产工艺和成品质量的稳定性，特别是有利于细胞灌流培养的应用。细胞灌流培养技术作为生物医药细胞培养未来的发展趋势，本培养基很好的填补了市场上无专用细胞灌流培养基的空白，为利用CHO细胞生物医药流水线生产提供了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种CHO细胞无血清无蛋白培养基及其用途
本专利技术属于生物医药领域，具体为一种细胞无血清无蛋白培养基。
技术介绍
中国仓鼠卵巢(Chinesehamsterovary，CH0)细胞广泛应用于重组蛋白药物及抗体药物的生产，其不仅能够提供稳定而准确的糖基化修饰，使表达产物最接近于天然蛋白质分子，而且具有安全性高的特点，是目前少数FDA及各国药监部门认可的合法合规的产业化工程细胞株。一般CHO细胞的培养是在商品化的培养基，如DMEM/F12基础培养基中添加5～10％的胎牛血清来完成的，血清除了供给细胞的营养成分外，还提供了体外培养细胞增殖所必需的生长因子。但血清的使用存在批次间差异大、生物危害性风险高、易被支原体和病毒等污染、成本高、不利于产物分离纯化等很多弊端，以及影响细胞的生长及最终产物的质量，不适于大规模工业化生产。连续灌注培养是近年用于动物细胞培养生产分泌型重组治疗性药物和嵌合抗体及人源化抗体等基因工程抗体较为推崇的一种方式。应用连续灌流工艺的公司有Genzyme,GeneticInstitute,Bayer公司等。该培养方式的主要优点有：①细胞截流系统可使细胞或酶保留在反应器内，维持较高的细胞密度，从而较大的提高了产品的产量；②连续灌流系统，使细胞稳定的处在较好的的营养环境中，有害代谢废物浓度积累较低；③反应速率容易控制，培养周期较长，可提高生产率，目标产品回收率高；④产品在罐内停留时间短，可及时回收到低温下保存，有利于保持产品的活性；⑤获得相同产能的前提下，可大幅度精简生物制品生产工艺流程，降低前期生产设备等硬件投入；目前，灌流细胞培养方式越来越流行，因为生物制药的生产工艺开发对产品质量和产量要求更高，灌流性细胞工艺能满足质量和产量要求，特别是对不稳定性生物蛋白药，灌流细胞培养工艺为最佳选择，绝大多数生物制品企业已经启动或者准备启动该生产方式的生产线，但是与之对应的“专用培养基”的研发或生产进程出现脱节。虽然国内和国外已经有数量众多的，应用于传统批次培养或者批次补料培养基的，化学成分明确的无血清无蛋白培养基，但是专门应用于CHO细胞灌流培养基的产品寥寥无几。已经上市的少数几款灌流培养基也是被Life、Thermo、Lonza等国外知名的培养基大公司垄断，成分秘而不宣，而国内用灌流的培养工艺来开发培养基，尚无报道，因为灌流细胞培养方法技术难度高，培养基用量大，设备复杂，而影响灌流培养工艺的发展。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利公开了一种适用于CHO细胞高密度悬浮灌流培养的CD无血清无蛋白培养基，化学成分明确，能够显著提高CHO细胞的培养或者生产持续时间，为生物制品的规模化生产提供方便。(二)技术方案为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，包括氨基酸组分、维生素组分、无机盐组分、微量元素组分及碳水化合物和其他分子化合物组分，具体包括氨基酸的组成为：L-精氨酸150-800mg/LL-天冬氨酸100-550mg/LL-天冬酰胺145-500mg/LL-半胱氨酸105-350mg/LL-甘氨酸20-110mg/LL-谷氨酸50-180mg/LL-组氨酸145-435mg/LL-异亮氨酸225-550mg/LL-亮氨酸160-480mg/LL-赖氨酸270-700mg/LL-蛋氨酸65-145mg/LL-苯丙氨酸130-460m/LL-脯氨酸135-470mg/LL-丝氨酸200-500mg/LL-苏氨酸50-300mg/LL-色氨酸160-420mg/LL-酪氨酸180-540mg/LL-缬氨酸160-520mg/L维生素的组成为：生物素0.09-3.62mg/LE-泛酸钙1-10.5mg/L叶酸4.45-24.5mg/L烟酰胺1.25-13mg/L维生素B61-10mg/L盐酸硫胺素1.25-13mg/L维生素B120.1-15mg/L核黄素0.1-3.5mg/L氯化胆碱8-180mg/L肌醇10-75mg/L无机盐的组成：氯化镁10-200mg/L硫酸镁30-200mg/L氯化钙56-232mg/L氯化钾212-936mg/L碳酸氢钠1200-3600mg/L氯化钠200-2000mg/L磷酸钠70-600mg/L微量元素的组成为：七水硫酸锌0.5-5mg/L五水硫酸铜0.0001-0.01mg/L九水硝酸铁0.05-0.45mg/L七水硫酸亚铁0.4-15.5mg/L亚硒酸纳0.01-0.8mg/L氯化镍0.00005-0.0005mg/L氯化亚锡0.00005-0.0005mg/L氯化钴0.0005-0.008mg/L氯化铝0.0001-0.001mg/L醋酸钡0.0005-0.003mg/L硫酸铬0.001-0.006mg/L氟化钠0.0005-0.006mg/L偏硅酸钠0.005-0.09mg/L碳水化合物和其他分子化合物的组成为：葡萄糖2000-9000mg/L乙醇胺5-30mg/L腐胺0.1-15mg/L硫辛酸0.2-3mg/L亚油酸0.01-0.9mg/L丙酮酸钠105-600mg/L硫酸葡聚糖10-100mg/LPluronicF-68100-3000mg/L。优选的，所述的一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，包括：氨基酸的组成为：L-精氨酸500mg/L，L-天冬氨酸300mg/L，L-天冬酰胺280mg/L，L-半胱氨酸180mg/L，L-甘氨酸55mg/L，L-谷氨酸150mg/L，L-组氨酸305mg/L，L-异亮氨酸325mg/L，L-亮氨酸160mg/L，L-赖氨酸550mg/L，L-蛋氨酸65mg/L，L-苯丙氨酸230m/L，L-脯氨酸370mg/L，L-丝氨酸400mg/L，L-苏氨酸98mg/L，L-色氨酸210mg/L，L-酪氨酸180mg/L，L-缬氨酸280mg/L。维生素的组成为：生物素1.8mg/L，泛酸钙5.5mg/L，叶酸14.45mg/L，烟酰胺1.25mg/L，维生素B61.9mg/L，盐酸硫胺素3.25mg/L，维生素B1212mg/L，核黄素0.5mg/L，氯化胆碱80mg/L，肌醇15mg/L。无机盐的组成：氯化镁130mg/L，硫酸镁35mg/L，氯化钙200mg/L，氯化钾512mg/L，碳酸氢钠2400mg/L，氯化钠1333mg/L，磷酸钠210mg/L。微量元素的组成为：七水硫酸锌1.5mg/L，五水硫酸铜0.005mg/L，九水硝酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，包括氨基酸组分、维生素组分、无机盐组分、微量元素组分及碳水化合物和其他分子化合物组分，其特征在于，/n氨基酸的组成为：/nL-精氨酸150-800mg/L/nL-天冬氨酸100-550mg/L/nL-天冬酰胺145-500mg/L/nL-半胱氨酸105-350mg/L/nL-甘氨酸20-110mg/L/nL-谷氨酸50-180mg/L/nL-组氨酸145-435mg/L/nL-异亮氨酸225-550mg/L/nL-亮氨酸160-480mg/L/nL-赖氨酸270-700mg/L/nL-蛋氨酸65-145mg/L/nL-苯丙氨酸130-460m/L/nL-脯氨酸135-470mg/L/nL-丝氨酸200-500mg/L/nL-苏氨酸50-300mg/L/nL-色氨酸160-420mg/L/nL-酪氨酸180-540mg/L/nL-缬氨酸160-520mg/L/n维生素的组成为：/n生物素0.09-3.62mg/L/nD-泛酸钙1-10.5mg/L/n叶酸4.45-24.5mg/L/n烟酰胺1.25-13mg/L/n维生素B6 1-10mg/L/n盐酸硫胺素1.25-13mg/L/n维生素B12 0.1-15mg/L/n核黄素0.1-3.5mg/L/n氯化胆碱8-180mg/L/n肌醇10-75mg/L/n无机盐的组成：/n氯化镁10-200mg/L/n硫酸镁30-200mg/L/n氯化钙56-232mg/L/n氯化钾212-936mg/L/n碳酸氢钠1200-3600mg/L/n氯化钠200-2000mg/L/n磷酸钠70-600mg/L/n微量元素的组成为：/n七水硫酸锌0.5-5mg/L/n五水硫酸铜0.0001-0.01mg/L/n九水硝酸铁0.05-0.45mg/L/n七水硫酸亚铁0.4-15.5mg/L/n亚硒酸纳0.01-0.8mg/L/n氯化镍0.00005-0.0005mg/L/n氯化亚锡0.00005-0.0005mg/L/n氯化钴0.0005-0.008mg/L/n氯化铝0.0001-0.001mg/L/n醋酸钡0.0005-0.003mg/L/n硫酸铬0.001-0.006mg/L/n氟化钠0.0005-0.006mg/L/n偏硅酸钠0.005-0.09mg/L/n碳水化合物和其他分子化合物的组成为：/n葡萄糖2000-9000mg/L/n乙醇胺5-30mg/L/n腐胺0.1-15mg/L/n硫辛酸0.2-3mg/L/n亚油酸0.01-0.9mg/L/n丙酮酸钠105-600mg/L/n硫酸葡聚糖10-100mg/L/nPluronic F-68 100-3000mg/L。/n...

【技术特征摘要】
1.一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，包括氨基酸组分、维生素组分、无机盐组分、微量元素组分及碳水化合物和其他分子化合物组分，其特征在于，
氨基酸的组成为：
L-精氨酸150-800mg/L
L-天冬氨酸100-550mg/L
L-天冬酰胺145-500mg/L
L-半胱氨酸105-350mg/L
L-甘氨酸20-110mg/L
L-谷氨酸50-180mg/L
L-组氨酸145-435mg/L
L-异亮氨酸225-550mg/L
L-亮氨酸160-480mg/L
L-赖氨酸270-700mg/L
L-蛋氨酸65-145mg/L
L-苯丙氨酸130-460m/L
L-脯氨酸135-470mg/L
L-丝氨酸200-500mg/L
L-苏氨酸50-300mg/L
L-色氨酸160-420mg/L
L-酪氨酸180-540mg/L
L-缬氨酸160-520mg/L
维生素的组成为：
生物素0.09-3.62mg/L
D-泛酸钙1-10.5mg/L
叶酸4.45-24.5mg/L
烟酰胺1.25-13mg/L
维生素B61-10mg/L
盐酸硫胺素1.25-13mg/L
维生素B120.1-15mg/L
核黄素0.1-3.5mg/L
氯化胆碱8-180mg/L
肌醇10-75mg/L
无机盐的组成：
氯化镁10-200mg/L
硫酸镁30-200mg/L
氯化钙56-232mg/L
氯化钾212-936mg/L
碳酸氢钠1200-3600mg/L
氯化钠200-2000mg/L
磷酸钠70-600mg/L
微量元素的组成为：
七水硫酸锌0.5-5mg/L
五水硫酸铜0.0001-0.01mg/L
九水硝酸铁0.05-0.45mg/L
七水硫酸亚铁0.4-15.5mg/L
亚硒酸纳0.01-0.8mg/L
氯化镍0.00005-0.0005mg/L
氯化亚锡0.00005-0.0005mg/L
氯化钴0.0005-0.008mg/L
氯化铝0.0001-0.001mg/L
醋酸钡0.0005-0.003mg/L
硫酸铬0.001-0.006mg/L
氟化钠0.0005-0.006mg/L
偏硅酸钠0.005-0.09mg/L
碳水化合物和其他分子化合物的组成为：
葡萄糖2000-9000mg/L
乙醇胺5-30mg/L
腐胺0.1-15mg/L
硫辛酸0.2-3mg/L
亚油酸0.01-0.9mg/L
丙酮酸钠105-600mg/L
硫酸葡聚糖10-100mg/L
PluronicF-68100-3000mg/L。


2.根据权利要求1所述的一种CHO细胞无血清无蛋白培养基，其特征在于，包括：
氨基酸的组成为：L-精氨酸500mg/L，L-天冬氨酸300mg/L，L-天冬酰胺280mg/L，L-半胱氨酸180mg/L，L-甘氨酸55mg/L，L-谷氨酸150mg/L，L-组氨酸305mg/L，L-异亮氨酸325mg/L，L-亮氨酸160mg/L，L-赖氨酸550mg/L，L-蛋氨酸65mg/L，L-苯丙氨酸230m/L，L-脯氨酸370mg/L，L-丝氨酸400mg/L，L-苏氨酸98mg/L，L-色氨酸210mg/L，L-酪氨酸180mg/L，L-缬氨酸280mg/L。
维生素的组成为：生物素1.8mg/L，泛酸钙5.5mg/L，叶酸14.45mg/L，烟酰胺1.25mg/L，维生素B61.9mg/L，盐酸硫胺素3.25mg/L，维生素B1212mg/L，核黄素0.5mg/L，氯化胆碱80mg/L，肌醇15mg/L。
无机盐的组成：氯化镁130mg/L，硫酸镁35mg/L，氯化钙200mg/L，氯化钾512mg/L，碳酸氢钠2400mg/L，氯化钠1333mg/L，磷酸钠210mg/L。
微量元素的组成为：七水硫酸锌1.5mg/L，五水硫酸铜0.005mg/L，九水硝酸铁0.15mg/L，七水硫酸亚铁5.0mg/L，亚硒酸纳0.21mg/L，氯化镍0.0001mg/L，氯化亚锡0.0001mg/L，氯化钴0.0005mg/L，氯化铝0.001mg/L，醋酸钡0.0015mg/L，硫酸铬0.001mg/L，氟化钠0.00056mg/L，偏硅酸钠0.01mg/L。
碳水化合物和其他分子化合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐亮亮，陈旭，陈刚，杨建国，俞锦锋，赵亚，辛丽丽，王涛，董晓惠，
申请(专利权)人：依科赛生物科技太仓有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32