【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于假尿苷化的核酸分子相关申请的交叉引用本申请要求于2018年3月27日提交的美国临时专利申请第62/648,648号的优先权和权益；通过引用将其全部内容并入本文。序列表本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式以电子方式提交，并且在此通过引用以其整体并入。所述ASCII副本创建于2019年3月21日，名为PQR_021WO_SL25.txt，大小为32,768字节。
本专利技术涉及医学领域。更具体地，本专利技术涉及假尿苷化的领域，其中细胞中的RNA分子被核酸分子例如寡核苷酸靶向以募集假尿苷合酶以将RNA序列中存在的特定尿苷转化为假尿苷。更具体地，本专利技术涉及促进靶RNA中的尿苷的假尿苷化的寡核苷酸和嵌入内含子的snoRNA及其使用方法。
技术介绍
假尿苷(ψ)是稳定RNA(包括tRNA、rRNA、snRNA和mRNA)中最丰富的转录后修饰核苷酸，约占总核糖核苷酸的5％。尿苷向ψ的转化(假尿苷化)需要两个不同的化学反应：C1′-N1糖基键的断裂和新的碳(C1′-C5)键的建立，该键将碱基重新连接到糖上。假尿苷化是真正的异构化反应，会产生额外的氢键供体，从而影响基于携带ψ的RNA类型和RNA序列中位置的多种功能方面，例如蛋白质合成、增加的终止密码子通读和移码(Yu和Meier，2014，RNABiology11：1483-1494)。图1显示了尿苷和ψ的结构。许多mRNAψ位于编码区，并且其大多数对环境胁迫作出反应，表明其功能重要性(Carlile等人，2014，Nature515...
【技术保护点】
1.一种用于在哺乳动物细胞中的靶RNA中的靶尿苷的假尿苷化的核酸分子，其中所述核酸分子包含能够与包含所述靶尿苷的所述靶RNA形成部分双链核酸复合体的向导区，其中所述部分双链核酸复合体能够结合哺乳动物假尿苷化酶，其中所述向导区有助于将所述靶尿苷定位在所述部分双链核酸复合体中，以使其被所述哺乳动物假尿苷化酶转化为假尿苷。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180327 US 62/648,6481.一种用于在哺乳动物细胞中的靶RNA中的靶尿苷的假尿苷化的核酸分子，其中所述核酸分子包含能够与包含所述靶尿苷的所述靶RNA形成部分双链核酸复合体的向导区，其中所述部分双链核酸复合体能够结合哺乳动物假尿苷化酶，其中所述向导区有助于将所述靶尿苷定位在所述部分双链核酸复合体中，以使其被所述哺乳动物假尿苷化酶转化为假尿苷。
2.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述假尿苷化酶是能够作用于H/ACA-snoRNA的核糖核蛋白(RNP)复合体的一部分。
3.根据权利要求1或2所述的核酸分子，其中所述核酸分子比野生型H/ACAsnoRNA短，并且包含相对于所述野生型H/ACAsnoRNA是非天然修饰的一个或多个核苷和/或核苷间键。
4.根据权利要求3所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含对应于所述野生型H/ACAsnoRNA的两个发卡结构之一的单个向导区，优选为在所述野生型H/ACAsnoRNA的3′末端部分的发卡结构，更优选为其中5′末端核苷酸对应于所述野生型H/ACAsnoRNA的两个发卡结构之间区域的核苷酸。
5.根据权利要求3或4所述的核酸分子，其由50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个核苷酸组成。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的核酸分子，其中所述非天然修饰包括核糖部分中的修饰，优选其中糖部分的2′-OH被取代。
7.根据权利要求6所述的核酸分子，其中所述取代基是2′-OMe或2′-MOE。
8.根据权利要求3至7中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个非天然核苷间键，例如硫代磷酸酯键。
9.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述核酸分子位于从其表达的内含子序列中，并且其中所述内含子序列位于上游外显子A序列和下游外显子B序列之间。
10.根据权利要求9所述的核酸分子，其中所述外显子A/内含子/外显子B序列存在于载体、优选质粒或病毒载体中。
11.根据权利要求9或10所述的核酸分子，其中所述外显子A序列是人β-球蛋白基因的外显子1，所述外显子B序列是人β-球蛋白基因的外显子2。
12.根据权利要求9至11中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子是基本上全长的pugU2-34/44snoRNA。
13.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述核酸分子存在于诸如质粒的载体中，并且其中所述核酸分子是从CMV或pol-III启动子、优选U6或H1启动子转录而来的。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的核酸分子，其中所述向导区能够与所述靶RNA形成部分双链复合体，所述靶RNA包含与遗传疾病相关的突变。
15.根据权利要求14所述的核酸分子，其中所述突变导致提前终止密码子(PTC)，其中所述PTC是遗传疾病的原因，并且其中所述靶尿苷存在于所述PTC中。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的核酸分子，其用于治疗、预防、延迟或改善囊性纤维化、赫尔勒综合征、α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)缺乏症、帕金森病、阿尔茨海默病、白化病、肌萎缩性侧索硬化症、哮喘、β地中海贫血、Cadasil综合征、腓骨肌萎缩症、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、远端脊髓性肌萎缩症(DSMA)、杜兴/贝克尔肌营养不良症、营养不良型表皮松解症、大疱性表皮松解症、法布瑞氏症、V因子莱顿相关疾病、家族性腺瘤、息肉病、半乳糖血症、高雪氏病、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、血友病、遗传性血色素沉着症、亨特综合征、亨廷顿氏病、炎症性肠病(IBD)、遗传性多凝集素综合征、莱伯氏先天性黑蒙症、莱施-奈恩综合征、林奇综合征、马凡综合征、黏多糖贮积症、肌肉营养不良、I型和II型肌强直性营养不良症、神经纤维瘤病、A、B和C型尼曼-匹克病、NY-esol相关癌症、Peutz-Jeg...
【专利技术属性】
技术研发人员：B·克莱恩，J·J·图鲁宁，L·范辛特菲特，P·D·M·F·A·达席尔瓦，J·A·G·布代，虞一涛，足立大典，M·D·索伊萨，
申请(专利权)人：罗切斯特大学，ProQR治疗上市公司Ⅱ，
类型：发明
国别省市：美国;US
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