一种新冠病毒羊驼抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种新冠病毒羊驼抗体及其制备方法和应用。本发明专利技术的新冠病毒羊驼抗体的制备方法，包括：A)从免疫羊驼的外周血淋巴细胞中提取总RNA，并反转录扩增cDNA；B)以cDNA为模板扩增羊驼抗体VHH基因，将其与载体连接构建噬菌体文库；C)从噬菌体文库中筛选阳性克隆；D)利用阳性克隆构建羊驼抗体表达载体，经诱导表达和纯化，获得新冠病毒羊驼抗体。目前本发明专利技术的新冠病毒羊驼抗体正在应用于新冠病毒蛋白的检测试剂盒的研发，新冠病毒羊驼抗体大大提高了检测诊断的特异性和准确性；同时，该抗体具有中和新冠病毒的中和活性，在作为新冠病毒肺炎治疗的纳米抗体药物上具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种新冠病毒羊驼抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及抗体制备
，尤其是涉及一种新冠病毒羊驼抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
在检测新冠病毒蛋白的试剂盒中需要应用到相关的抗体，然而现有
尚无应用新冠病毒羊驼抗体的试剂盒面世。新型冠状病毒蛋白分为刺突糖蛋白(S蛋白，spikeprotein)、包膜糖蛋白(E蛋白)、膜糖蛋白(M蛋白)和核衣壳蛋白(N蛋白)。在冠状病毒中起关键作用的S蛋白包含2个亚单位，即S1和S2。S1蛋白能够促进病毒与宿主细胞受体的结合，其含有一个重要的C端RBD结构域，正是这个区域负责和受体结合。目前，市场上的新冠检测试剂盒只有新冠病毒核酸检测试剂盒和新冠病毒抗体检测试剂盒两大类，既没有应用于该领域的新冠病毒羊驼抗体，也没有应用新冠病毒羊驼抗体检测新冠病毒蛋白的检测试剂盒，更没有极具临床应用价值、可开发为治疗新冠病毒肺炎临床药物的具有中和病毒能力的羊驼纳米抗体。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新冠病毒羊驼抗体及其制备方法和应用，该新本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新冠病毒羊驼抗体的制备方法，其特征在于，包括：/nA)从免疫羊驼的外周血淋巴细胞中提取总RNA，并反转录扩增cDNA；/nB)以cDNA为模板扩增羊驼抗体VHH基因，将其与载体连接构建噬菌体文库；/nC)从噬菌体文库中筛选阳性克隆；/nD)利用阳性克隆构建羊驼抗体表达载体，经诱导表达和纯化，获得新冠病毒羊驼抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种新冠病毒羊驼抗体的制备方法，其特征在于，包括：
A)从免疫羊驼的外周血淋巴细胞中提取总RNA，并反转录扩增cDNA；
B)以cDNA为模板扩增羊驼抗体VHH基因，将其与载体连接构建噬菌体文库；
C)从噬菌体文库中筛选阳性克隆；
D)利用阳性克隆构建羊驼抗体表达载体，经诱导表达和纯化，获得新冠病毒羊驼抗体。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述免疫羊驼是经重组新冠病毒S1蛋白免疫的羊驼；
优选地，免疫时重组新冠病毒S1蛋白的剂量为0.8-1.2mg/只，更优选为1mg/只；
优选地，每隔2周进行一次免疫，在第6次免疫2周后获得免疫羊驼。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，反转录扩增cDNA包括：
向RNasefree离心管中加入5×gDNAdigesterMix3μL和总RNA1μg，加RNasefree超纯水至总体积为15μL，混匀，于42℃孵育2分钟，得到反应液；
向所述反应液中加入ⅢSuperMixplus5μL，混匀后进行反转录，反转录程序为：25℃5分钟，55℃15分钟，85℃5分钟。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用巢式PCR扩增羊驼抗体VHH基因，包括：
以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增，得到第一轮扩增产物；第一轮PCR扩增体系为：2×phantamix25μL，PrimerF0.5μL，PrimerR0.5μL，模板cDNA2μL，ddH2O至总体积50μL；第一轮PCR扩增程序为：95℃5min，95℃20s，65℃20s，72℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡克平，陈兴，钱朝晖，郑磊，马光，刘炎，李彩虹，陈斌，张娜，王啟禄，闫旭南，张伟，付中雪，赵瑞鑫，
申请(专利权)人：安第斯抗体生物技术衡水有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13