一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用制造技术

一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用，该单克隆抗体与新冠病毒棘突糖蛋白RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；本发明专利技术的针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，效价高、特异性强，可以高效表达，能与新冠病毒SARS‑CoV‑2表面的棘突蛋白RBD区以外的区域特异性结合，用于新冠病毒的定性或定量检测，并且能够中和一定的新冠病毒毒性，减弱病毒毒性，起到预防或/和治疗新冠病毒肺炎的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及生物工程
，具体说是细胞免疫学和分子生物学
，更具体说是一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
新冠病毒的膜蛋白主要有表面的棘突蛋白(Spikeprotein，S蛋白)和膜蛋白(Membraneprotein，M蛋白)，S蛋白是一种糖蛋白，主要作用于细胞粘附和细胞膜融合，在许多哺乳动物体内，S蛋白被弗林蛋白酶或其他酶分解为S1和S2，其中S1上有受体附着位点，S2主要体现融合活性。新型冠状病毒可以结合多种细胞受体，其中血管紧张素转换酶2(ACE2)作为一种肽酶是细胞表面冠状病毒的受体之一。S1内有一部分区域与ACE2紧密结合，我们称之为受体结合域(RBD)，是病毒和受体相互作用的关键因素。研究表明RBD只需更改几个氨基酸，就可能出现跨物种感染，且RBD包含重要的病毒中和表位，对提高免疫应答十分关键。棘突蛋白承担病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合功能，是宿主中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。SARS-CoV-2(2019-nCoV)的棘突蛋白与人ACE2相互作用来感染人的呼吸道上皮细胞。抗体是哺乳动物免疫系统中的一个重要糖蛋白分子。抗体分子由两条重链(Heavychain)和两条轻链(Lightchain)组成，其中重链又分为可变区(Variableregionofheavychain，VH)和三个恒定区(Constantregionofheavychain；CH1，CH2，CH3)，轻链则由一个可变区(VL)和一个恒定区(CL)组成。可变区具有跟抗原结合的功能，因抗体个体不同而不同，而抗体的恒定区则因抗体的种属及亚型不同而不同。抗体重链可变区包含三个互补决定区(Complementarity-determiningregions；CDRH1，CDRH2，CDRH3)，轻链可变区也包含三个互补决定区，即CDRL1，CDRL2，和CDRL3，互补决定区又称为高变区，直接与抗原的表位结合。目前在新冠肺炎的治疗中并没有有效的药物，采用常规抗生素药物治疗效果并不明显，有些还存在严重的毒副作用。另一方面，由于抗体药物在传染病、自身免疫疾病的治疗上发挥着重要作用，针对性更强，因此开发针对新冠病毒的单克隆抗体具有非常重要的意义。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体及其应用。本专利技术为实现上述目的，通过以下技术方案实现：本专利技术公开了一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，该单克隆抗体与新冠病毒SARS-CoV-2棘突糖蛋白非RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列依次为SEQIDNO：2、SEQIDNO：3和SEQIDNO：4；轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列依次为SEQIDNO：6、SEQIDNO：7和SEQIDNO：8。优选的，一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，命名为A4，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：1，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：5。本专利技术还包括一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码上述任一项所述的单克隆抗体。本专利技术还包括一种包括上述的核酸分子的表达载体，除了前面所述的核酸分子之外，表达载体还包括与所述核酸分子序列操作性相连的表达调控序列。表达载体是指可将编码A4抗体的多聚核苷酸插入其中并使A4抗体得到表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内得以表达。载体的种类包括本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。原则上，只要能在宿主体内复制和稳定，任何载体都可以用。在表达载体中，除了含有复制起点外，还可含有标记基因和其他翻译控制元件。本专利技术还包括一种包含上述的核酸分子或上述的表达载体的宿主细胞。表达A4抗体的宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞：真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO，COS，293细胞或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。本专利技术还包括一种非诊断目的的检测新冠病毒SARS-CoV-2水平的方法，包括以下步骤：①提取含有新冠病毒SARS-CoV-2的样品；②将步骤①得到的样品与上述的单克隆抗体A4接触；③检测样品与单克隆抗体的免疫反应。本专利技术还包括上述任一项所述的针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体在制备新冠病毒SARS-CoV-2检测产品中的应用。所述检测产品包括但不限于检测试剂、试剂盒、芯片或试纸。凡是包括前面所述结合分子的能够检测出SARS-CoV-2的检测产品均包括在本专利技术的范围之内。本专利技术还包括上述任一项所述的针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体在制备抑制新冠病毒SARS-CoV-2药物中的应用。本专利技术还包括上述任一项所述的针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体在制备预防或治疗由新冠病毒SARS-CoV-2引起的肺炎药物制剂中的应用。本专利技术所用的术语“新冠病毒SARS-CoV-2”与“SARS-CoV-2病毒”、“新冠病毒”“SARS-CoV-2”“新型冠状病毒SARS-CoV-2”可以互换使用。本专利技术相比现有技术具有以下优点：本专利技术的针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，效价高、特异性强，可以高效表达，能与新冠病毒SARS-CoV-2表面的棘突蛋白RBD区以外的区域特异性结合，用于新冠病毒的定性或定量检测，并且能够中和一定的新冠病毒毒性，减弱病毒毒性，起到预防或/和治疗新冠病毒的目的。本专利技术的噬菌体展示技术把外源DNA插入噬菌体编码外壳蛋白的基因中，使外源DNA片断对应的表达产物融合在噬菌体的外壳蛋白中形成融合蛋白，呈现在噬菌体表面。具有如下显著的优点：建立了基因型和表型之间直接的物理联系，从而使筛选简便高效。本专利技术从TomlinsonI+J噬菌体展示合成抗体库中筛选到了能够跟新冠病毒SARS-CoV-2的S蛋白结合的抗体，这些抗体在新冠病毒的检测及降低病毒毒性方面具有重要的应用价值。附图说明图1为淘筛抗体库所得噬菌体的抗原结合性能的酶联免疫分析结果；图2为单克隆抗体A4抗原特异性的酶联免疫试验结果；图3为单克隆抗体A2抗原特异性的酶联免疫试验结果；图4为单克隆抗体C3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，其特征在于：该单克隆抗体与新冠病毒棘突糖蛋白非RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4；轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。/n

【技术特征摘要】
20200515 CN 20201041486811.一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，其特征在于：该单克隆抗体与新冠病毒棘突糖蛋白非RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列依次为SEQIDNO：2、SEQIDNO：3和SEQIDNO：4；轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列依次为SEQIDNO：6、SEQIDNO：7和SEQIDNO：8。


2.根据权利要求1所述的一种针对新冠病毒棘突蛋白非RBD区的单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：1，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：5。


3.一种分离的核酸分子，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：董金华，陈丽梅，李海梅，
申请(专利权)人：潍坊医学院，
类型：发明
国别省市：山东;37