一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种针对新冠病毒SARS‑CoV‑2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体及其应用，属于细胞免疫学等领域。该单克隆抗体与新冠病毒SARS‑CoV‑2棘突糖蛋白RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；本发明专利技术的针对新冠病毒SARS‑CoV‑2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体，效价高、特异性强，可以高效表达，能与新冠病毒SARS‑CoV‑2表面的棘突蛋白RBD区特异性结合，可用于新冠病毒SARS‑CoV‑2的检测，并且能够中和并减弱一定的新冠病毒毒性，起到预防或/和治疗新冠病毒肺炎的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及细胞免疫学、分子生物学
，具体说是一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
新冠病毒SARS-CoV-2，属于冠状病毒科(Coronaviridae)、正冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)的β冠状病毒属(Coronavirus)，与严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERS-CoV)近缘，都会导致严重肺炎症状。该病毒经飞沫、接触等途径传播，潜伏期患者即具备传播性。且研究发现，新冠肺炎患者在病程早期、症状轻微时即有极强的传染性。SARS-CoV-2病毒直径为75-160纳米，其基因组为连续线性单链RNA，依次编码核蛋白(Nucleoprotein)、包膜蛋白(Envelopeprotein)、膜蛋白(Membraneprotein)及棘突蛋白(Spikeprotein，又称S-protein或S蛋白)，其中棘突蛋白是其表面最重要的蛋白，主要功能为决定病毒的宿主范围和特异性，与宿主细胞细胞膜受体结合并融合，实现对细胞的侵染。棘突蛋白包括S1和S2两个亚基，S1中的受体结合区(Receptorbindingdomain，RBD)，与人类SARS-CoV受体血管紧张素转化酶II(ACE2)分子互作，而S2则含有膜融合过程所需要的基本元件，实现病毒与细胞的融合。因此，S蛋白的人源单克隆抗体可以阻断病毒跟细胞的结合，具有减弱病毒传染的能力，可以作为抗体药物前体用于治疗新冠病毒肺炎患者。抗体是哺乳动物免疫系统中的一个重要糖蛋白分子。分子结构由两条重链(Heavychain)和两条轻链(Lightchain)组成，其中重链又分为可变区(Variableregionofheavychain，VH)和三个恒定区(Constantregionofheavychain；CH1、CH2、CH3)，轻链则由一个可变区(VL)和一个恒定区(CL)组成。可变区与抗原特异性结合，因抗体个体不同而呈现差异性，而抗体的恒定区则由抗体的种属及亚型决定。抗体重链可变区包含三个互补决定区(Complementarity-determiningregions；CDRH1、CDRH2、CDRH3)，轻链可变区也包含三个互补决定区，即CDRL1、CDRL2、和CDRL3，互补决定区又称高变区，直接与抗原表位结合。各国针对新冠肺炎的治疗提出了多种治疗方案，但是目前并没有特异性针对新冠病毒的治疗药物或疫苗上市。抗体药物在传染病、自身免疫疾病及肿瘤等的治疗上发挥了重要作用，在当前面临的SARS-CoV-2疫苗开发困难且时期漫长、传统药物副作用大甚至没有效果的情况下，开发针对新冠病毒SARS-CoV-2的单克隆抗体具有非常重要的意义。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种特异性针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体及其应用。本专利技术为实现上述目的，通过以下技术方案实现：本专利技术公开了一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体，该单克隆抗体与新冠病毒SARS-CoV-2棘突糖蛋白RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列依次为SEQIDNO：2、SEQIDNO：3和SEQIDNO：4；轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列依次为SEQIDNO：6、SEQIDNO：7和SEQIDNO：8。优选的一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体，命名为A2，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：1，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：5。本专利技术还包括一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码上述任一项所述的单克隆抗体。本专利技术还包括一种包括上述的核酸分子的表达载体，除了前面所述的核酸分子之外，表达载体还包括与所述核酸分子序列操作性相连的表达调控序列。表达载体是指可将编码A2抗体的多聚核苷酸插入其中并使A2抗体得到表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内得以表达。载体的种类包括本领域熟知的细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒或其他载体。原则上，只要能在宿主体内复制和稳定，任何载体都可以用。在表达载体中，除了含有复制起点外，还可含有标记基因和其他翻译调控元件。本专利技术还包括一种包含上述的核酸分子或上述的表达载体的宿主细胞。表达A2抗体的宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌、链霉菌属；鼠伤寒沙门氏菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇S2或Sf9的昆虫细胞；CHO、COS、293细胞或Bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。本专利技术还包括一种非诊断目的的检测新冠病毒SARS-CoV-2水平的方法，包括以下步骤：①提取含有新冠病毒SARS-CoV-2的样品；②将步骤①得到的样品与上述的单克隆抗体A2接触；③检测样品与单克隆抗体的免疫反应。本专利技术还包括上述任一项所述的针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体在制备新冠病毒SARS-CoV-2检测产品中的应用。所述检测产品包括但不限于检测试剂、试剂盒、芯片或试纸。凡是包括前面所述结合分子的能够检测出SARS-CoV-2的检测产品均包括在本专利技术的范围之内。本专利技术还包括上述任一项所述的针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体在制备抑制新冠病毒SARS-CoV-2抗体药物中的应用。本专利技术还包括上述任一项所述的针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体在制备预防或治疗由新冠病毒SARS-CoV-2引起的肺炎的药物制剂中的应用。本专利技术所用的术语“新冠病毒SARS-CoV-2”与“SARS-CoV-2病毒”、“新冠病毒”、“SARS-CoV-2”、“新型冠状病毒SARS-CoV-2”可以互换使用。本专利技术相比现有技术具有以下优点：本专利技术的针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体，效价高、特异性强，可以高效表达，能与新冠病毒SARS-CoV-2表面的棘突蛋白RBD区特异性结合，可用于新冠病毒SARS-CoV-2的检测，并且能够中和并减弱一定的新冠病毒毒性，起到预防或/和治疗新冠病毒肺炎的目的。本专利技术的噬菌体展示技术把外源DNA插入噬菌体编码外壳蛋白的基因中，使外源DNA片断对应的表达产物融合在噬菌体的外壳蛋白中形成融合蛋白，呈现在噬菌体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体，其特征在于：该单克隆抗体与新冠病毒SARS-CoV-2棘突糖蛋白RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ IDNO：4；轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。/n

【技术特征摘要】
20200515 CN 20201041486811.一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体，其特征在于：该单克隆抗体与新冠病毒SARS-CoV-2棘突糖蛋白RBD区特异性结合，包括重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3和轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3；重链可变区的互补性决定区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列依次为SEQIDNO：2、SEQIDNO：3和SEQIDNO：4；轻链可变区的互补性决定区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列依次为SEQIDNO：6、SEQIDNO：7和SEQIDNO：8。


2.根据权利要求1所述的一种针对新冠病毒SARS-CoV-2棘突蛋白RBD区的单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：1，所述单克隆抗体的轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO：5。


3.一种分离的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码权利要求1～2中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：董金华，李海梅，陈丽梅，
申请(专利权)人：潍坊医学院，
类型：发明
国别省市：山东;37