β-半乳糖苷酶融合蛋白及其制备方法与用途技术

本发明专利技术提供了一种β‑半乳糖苷酶融合蛋白及其制备方法与用途，通过使用柔性肽接头连接两个β‑半乳糖苷酶催化亚基刚性单元，使其在大肠杆菌原核系统中成功高效地异源表达出有活性的重组蛋白；本发明专利技术在二聚体间插入Linker的方法基于基因克隆、重组手段，具有操作便捷、经济成本低且重复性高等优点。

【技术实现步骤摘要】
β-半乳糖苷酶融合蛋白及其制备方法与用途
本专利技术具体涉及一种β-半乳糖苷酶融合蛋白及其制备方法与用途。技术背景β-半乳糖苷酶，常简称为乳糖酶，广泛存在于各种动物、植物及微生物中。1889年，荷兰生物学家第一次报道了β-半乳糖苷酶可水解乳糖，β-半乳糖苷酶的最初应用也是利用其水解乳糖的性质来降低乳制品中的乳糖含量。利用各种技术手段研究β-半乳糖苷酶对乳中乳糖的水解作用，具有很强的现实意义。鉴于Lactobacillusbrevis源的β-半乳糖苷酶为由两个大小不一的亚基组成的异型二聚体，本申请以氨基酸序列组成的柔性肽接头以连接Lactobacillusbrevis源β-半乳糖苷酶的两个蛋白亚基，基于克隆、基因重组等程序，对表达的重组蛋白进行β-半乳糖苷酶活性评估和应用。
技术实现思路
基于现有技术的状况，本专利技术的目的是提供一种β-半乳糖苷酶融合蛋白及其制备方法与用途；通过柔性氨基酸肽接头连接二聚体使其在大肠杆菌原核系统中异源表达，本专利技术建立了氨基酸柔性肽链(柔性肽接头)插入二聚体之间用以连接两个亚基的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种β-半乳糖苷酶融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白通过使用柔性肽接头连接两个β-半乳糖苷酶催化亚基刚性单元。/n

【技术特征摘要】
1.一种β-半乳糖苷酶融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白通过使用柔性肽接头连接两个β-半乳糖苷酶催化亚基刚性单元。


2.根据权利要求1所述的β-半乳糖苷酶融合蛋白，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶催化亚基刚性单元为同型亚基或异型亚基。


3.根据权利要求2所述的β-半乳糖苷酶融合蛋白，其特征在于，所述β-半乳糖苷酶催化亚基来源于短乳酸杆菌Lactobacillusbrevis。


4.根据权利要求1所述的β-半乳糖苷酶融合蛋白，其特征在于，所述柔性肽接头为由几个氨基酸相互连接形成的含有多个肽键的一条柔性链状结构。


5.根据权利要求4所述的β-半乳糖苷酶融合蛋白，其特征在于，所述柔性肽接头选自甘氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或丙氨酸中的一种或多种。


6.如权利要求4所述的β-半乳糖苷酶融合蛋白，其特征在于，所述柔性肽接头的分子式含有(GxSy)n的重复序列，其中，x、y、n为大于等于1的整数。


7.如权利要求6所述的β-半乳糖苷酶融合蛋白，其特征在于，所述柔性肽接头选自以下组：
Linker1：GSHM；
Linker2：GSGSGHM；

【专利技术属性】
技术研发人员：韩媛媛，刘丽，约瑟夫·弗戈迈尔，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32