一种虫草头孢菌粉药物制剂中核苷类成分的含量测定方法技术

本发明专利技术公开了一种虫草头孢菌粉制剂的质量控制方法，借助高效液相色谱分离技术，对活性成分腺苷进行了含量测定。该方法灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确的评价虫草头孢菌粉制剂的质量，对控制质量和保证疗效具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种虫草头孢菌粉药物制剂中核苷类成分的含量测定方法
本专利技术具体涉及虫草头孢菌粉药物制剂中核苷类成分的含量测定方法。
技术介绍
虫草头孢菌粉系从新鲜冬虫夏草中分离得到的麦角菌科真菌虫草头孢(CephalosporiumsinensisChen.sp.nov)经液体深层发酵所得菌丝体的干燥粉末。虫草头孢菌粉的主要活性成分为多糖和核苷类。现代医学研究表明：虫草中的活性成分虫草多糖具有良好的抗氧化、提高免疫力和抗纤维化的活性。核苷类成分参与调解人体内各种生理过程。腺苷可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还参与扩张冠脉血管，增加血流量。腺苷对心血管系统和肌体的许多其他系统及组织均有生理作用，常作为虫草类产品的质量控制的标志性物质。虫草头孢菌粉药物制剂由虫草头孢菌粉、香菇、灵芝、山茱萸、肉苁蓉、玉竹、麦冬7味中药组成，具有补肾培元，滋阴养肺，适用于肺肾气虚型高脂血症，慢性支气管炎恢复期的辅助治疗。其中虫草头孢菌粉是君药，具有增强体质、延缓衰老、保护心脏、改善睡眠、增强食欲、提高人体免疫功能等功效。以腺苷属虫草头孢菌粉中的主要活性成分，建立虫草头孢菌粉制剂中腺苷的含量测定方法，有利于全面控制产品的质量，但由于虫草头孢菌粉药物制剂中成分复杂，而核苷类成分极性较大，且极性相近，难以分离，照现有报道成分析检测难度大，目前也还没有针对该药物制剂的质量控制方法的研究报道。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术建立了一种虫草头孢菌粉药物制剂中核苷类成分的含量测定方法，它包括如下操作步骤：1)对照品溶液的制备：取腺苷对照品，加水溶解，即得；2)供试品溶液的制备：取虫草头孢菌粉制剂，加水或有机溶剂水溶液提取，滤过，取续滤液，即得；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图；色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相:以磷酸盐溶液为流动相A，以有机溶剂为流动相B；梯度洗脱程序：40min内使流动相A和流动相B比例在(93-60)：(5-40)之间梯度变化；4)根据步骤3)色谱图中峰面积，计算腺苷含量，公式如下：式中C对为腺苷对照品的浓度，A样为虫草头孢菌粉制剂中腺苷的峰面积，A对为腺苷对照品的峰面积，N为稀释倍数，V样为虫草头孢菌粉制剂的体积。进一步地，步骤1)所述对照品溶液每1ml含30-60μg腺苷，优选每1ml含42μg腺苷。进一步地，步骤2)所述虫草头孢菌粉制剂与水或有机溶剂水溶液的体积比为2ml：15-30ml，优选体积比2ml：25ml。进一步地，步骤2)所述有机溶剂水溶液为10-30％的乙醇或甲醇。进一步地，步骤2)所述提取为超声或加热回流提取。更进一步地，所述超声提取10min，所述加热回流提取1-3次，每次10-20min。进一步地，步骤3)所述流动相A为0.05-0.2mol/L的磷酸二氢钾或磷酸二氢钠，所述流动相B为甲醇或乙腈。更进一步地，所述流动相A为0.05-0.2mol/L磷酸二氢钾，流动相B为乙腈时，梯度洗脱程序为：更进一步地，所述流动相A为0.05-0.2mol/L磷酸二氢钾，流动相B为甲醇时，梯度洗脱程序为：更进一步地，所述流动相A为0.05-0.2mol/L磷酸二氢钠，流动相B为乙腈时，梯度洗脱程序为：更进一步地，所述流动相A为0.05-0.2mol/L磷酸二氢钠，流动相B为甲醇时，梯度洗脱程序为：本专利技术的虫草头孢菌粉药物制剂中核苷类成分的含量测定方法，克服了腺苷类成分呈碱性，易电离，从而导致分离和洗脱效果差的缺点，实现了虫草头孢菌粉药物制剂中腺苷类成分高灵敏度、好稳定性的检测，使虫草头孢菌粉制剂的质量得到客观、全面准确的评价，也保证了其质量和临床疗效，具有重要的意义。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图10.06mol/L磷酸二氢钾(A)-甲醇梯度洗脱液相色谱图图20.06mol/L磷酸二氢钠(A)-乙腈梯度洗脱液相色图图30.07mol/L磷酸二氢钾(A)-甲醇梯度洗脱液相色谱图图40.1mol/L磷酸二氢钠(A)-乙腈梯度洗脱液相色图图5腺苷标准曲线图具体实施方式本专利技术具体实施方式中使用的原料、试剂、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。实施例1本专利技术检测方法(1)对照品溶液的制备精密称取腺苷对照品16.91mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置20ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得，于4℃保存备用。(2)供试品溶液的制备精密量取虫草头孢菌粉制剂2ml置25ml量瓶中，加水20ml，超声提取10min，加水定容置刻度，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，作为样品溶液。(3)液相色谱图的获取取对照品溶液和供试品溶液20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图(如图1所示)，所用高效液相色谱设置参数如下：仪器：Agilent1200高效液相色谱仪；色谱柱：ComosilPackproC18(4.6*250mm,5μm)色谱柱；流动相：浓度0.06mol/L磷酸二氢钾(A)-甲醇(B)；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；检测器：二极管阵列检测器(DAD)，扫描范围190-400nm；检测波长：260nm；流动相的梯度洗脱程序如下：(4)样品中腺苷活性成分的测定按如下公式计算有效成分腺苷的含量为18.0mg/瓶式中C对为腺苷对照品的浓度，A样为虫草头孢菌粉制剂中腺苷的峰面积，A对为腺苷对照品的峰面积，N为稀释倍数，V样为虫草头孢菌粉制剂的体积。实施例2本专利技术检测方法(1)对照品溶液的制备精密称取腺苷对照品16.91mg，置100ml量瓶中，加10％甲醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置20ml量瓶中，加10％甲醇至刻度，摇匀，即得，于4℃保存备用。(2)供试品溶液的制备精密量取虫草头孢菌粉制剂2ml置25ml量瓶中，加10％甲醇20ml，超声提取10min，加10％甲醇定容置刻度，滤过，取续滤液，作为样品溶液。(3)液相色谱图的获取取对照品溶液和供试品溶液20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图(如图2所示)，所用高效液相色谱设置参数如下：仪器：Agilent1200高效液相色谱仪；色谱柱：ComosilPackproC18(4.6*250mm,5μm)色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种虫草头孢菌粉药物制剂中核苷类成分的含量测定方法，它包括如下操作步骤：/n1)对照品溶液的制备：取腺苷对照品，加水溶解，即得；/n2)供试品溶液的制备：取虫草头孢菌粉制剂，加水或有机溶剂水溶液提取，滤过，取续滤液，即得；/n3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图；色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：以磷酸盐溶液为流动相A；以有机溶剂为流动相B；梯度洗脱程序：40min内使流动相A和流动相B比例在(93-60)：(5-40)梯度变化；/n4)根据步骤3)色谱图中峰面积，计算腺苷含量，公式如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种虫草头孢菌粉药物制剂中核苷类成分的含量测定方法，它包括如下操作步骤：
1)对照品溶液的制备：取腺苷对照品，加水溶解，即得；
2)供试品溶液的制备：取虫草头孢菌粉制剂，加水或有机溶剂水溶液提取，滤过，取续滤液，即得；
3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入色谱仪，记录色谱图；色谱条件如下：色谱柱：C18色谱柱；流动相：以磷酸盐溶液为流动相A；以有机溶剂为流动相B；梯度洗脱程序：40min内使流动相A和流动相B比例在(93-60)：(5-40)梯度变化；
4)根据步骤3)色谱图中峰面积，计算腺苷含量，公式如下：



式中C对为腺苷对照品的浓度，A样为虫草头孢菌粉制剂中腺苷的峰面积，A对为腺苷对照品的峰面积，N为稀释倍数，V样为虫草头孢菌粉制剂的体积。


2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤1)所述对照品溶液每1ml含30-60μg腺苷，优选每1ml含40μg腺苷。


3.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤2)所述虫草头孢菌粉制剂与水或有机溶剂水溶液的体积比为2ml：15-30ml，优选体积比2ml：25ml。


4.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤2)所述有机溶剂水溶液为10-30％的乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：严敏，谢义鹏，施猛，周锦，刘艳霞，
申请(专利权)人：扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51