【技术实现步骤摘要】
注射用重组人尿激酶原原料中泊洛沙姆残留量的检测方法
本专利技术属于检测分析技术，具体涉及一种注射用重组人尿激酶原原料中泊洛沙姆残留量的测定方法。
技术介绍
注射用重组人尿激酶原(商品名，普佑克)用于急性ST段抬高性心肌梗死的溶栓治疗。注射用重组人尿激酶原的原料为重组人尿激酶原(pro-UK)，即注射用重组人尿激酶原的原液，其制备方法见200410058006.0(公开号为CN1730098A)。注射用重组人尿激酶原(Pro-UK)原料的原生产工艺是20L发酵规模，为了满足蓬勃发展的市场需求，现将工艺放大到300L发酵规模。该300L新工艺在发酵过程中会产生大量的气泡，因此在反应器的细胞培养基中新添加了普兰尼克F68(PluronicF68)，又称泊洛沙姆188(Poloxamer188)，简称F68，它可以作为消泡剂和抗击细胞培养中剪切力的细胞膜稳定剂，该化合物经过后期的纯化工艺可以被去除。根据国家法规的要求，需要对工艺过程中引入的杂质进行研究、检测和控制，因此，为了确定泊洛沙姆188对产品质量的影响，必须对...
【技术保护点】
1.一种原料样品中泊洛沙姆残留量的检测方法，所述方法，包括以下步骤：/n1)样品溶液配制方法：原料样品加入已过夜冷冻的乙腈，原始样品体积与乙腈体积的比值在1～3范围内，震荡，超声2～4min，再震荡20～40s，8000～9800rpm离心1～3min，取上清液；/n2)标准品溶液配制方法：/n取泊洛沙姆标准品，称量并配制标准品溶液，浓度依次为2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.04mg/ml、0.02mg/ml、0.01mg/ml、0.005mg/ml；/n3)高效液相色谱的色谱条件如下：/n色谱柱Acclaim
【技术特征摘要】
1.一种原料样品中泊洛沙姆残留量的检测方法，所述方法，包括以下步骤：
1)样品溶液配制方法：原料样品加入已过夜冷冻的乙腈，原始样品体积与乙腈体积的比值在1～3范围内，震荡，超声2～4min，再震荡20～40s，8000～9800rpm离心1～3min，取上清液；
2)标准品溶液配制方法：
取泊洛沙姆标准品，称量并配制标准品溶液，浓度依次为2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.04mg/ml、0.02mg/ml、0.01mg/ml、0.005mg/ml；
3)高效液相色谱的色谱条件如下：
色谱柱AcclaimTMSurfactantPluscolumn,3μm,30mm×150mm；进样体积10μL；柱温40℃；流速0.7mL/min；梯度洗脱；UV检测器280nm；CAD检测器：采样频率5赫兹，峰过滤时间参数3.6秒，雾化温度50℃，流动相为甲酸铵和乙腈，梯度洗脱；
4)检测：分别取标准品溶液和样品溶液，注入高效液相色谱仪，记录CAD检测到的色谱图，以标准品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，用外标法计算样品溶液中泊洛沙姆的含量，经换算得到注射用重组人尿激酶原原料中泊洛沙姆的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，流动相为100nm甲酸铵和乙腈，梯度洗脱条件见下表
时间(分钟)
流动相A：100mM甲酸铵
流动相B：100％乙腈
梯度曲线*
0.00
72
28
5
4.00
72
28
5
12.00
30
70
5
14.00
10
90
5
18.00
10
90
5
18.10
72
28
5
24.0
72
28
5。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述原料样品为含有微量泊洛沙姆的多肽类药物。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述原料样品为通过...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓旭，莫英，韩进，
申请(专利权)人：天士力生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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