一种高通量筛选高产细胞株的方法技术

本发明专利技术公开了一种高通量筛选高产细胞株的方法。所述高通量筛选高产细胞株的方法包括以下步骤：(1)将筛选标记基因和目的基因插入载体中，得到重组载体；(2)将所述重组载体转染入宿主细胞，进行加压培养及均相时间分辨荧光法检测，得到阳性细胞；(3)对阳性细胞进行稀释后培养，并进行单克隆成像及均相时间分辨荧光法检测，筛选得到高表达目的蛋白的单克隆细胞株。本发明专利技术利用加压培养结合均相时间分辨荧光检测进行快速、高通量筛选阳性细胞，并进一步通过对阳性细胞稀释剂单克隆成像，能够显著提高筛选效率，节约筛选时间，提供了一种高通量且周期短的高产细胞株筛选平台技术。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物制药，涉及一种高通量筛选高产细胞株的方法。

技术介绍

1、在生物制药研发过程中，生产大分子药物的稳定细胞株的开发是整个药物研发和生产中最重要的步骤。抗体药物生产的宿主细胞主要有ns0、hek293、sp2/0、cho等，其中，cho细胞是生产抗体药物应用最广的宿主细胞。

2、谷氨酰胺合成酶(gs)催化谷氨酸和氨合成谷氨酰胺，是哺乳动物体内谷氨酰胺形成的唯一途径。在不含谷氨酰胺的培养基中，gs对哺乳动物细胞的存活是必不可少的。一些哺乳动物细胞系，如小鼠骨髓瘤细胞，不能表达足够的gs，在没有额外添加谷氨酰胺时不能存活。而另外一些细胞系，如中国仓鼠卵巢细胞(cho)，可以表达足够的gs来存活，不需要额外添加谷氨酰胺。在这种情况下，可以用gs抑制剂蛋氨酸亚氨基代砜(msx)来抑制内源性的gs活性，只有含外源gs基因的转染细胞才可以存活。谷氨酰胺合成酶(gs)表达系统将外源基因插入到含有gs基因表达载体的下游，是生物制药行业广泛应用的哺乳动物表达系统之一。horizon公司开发的cho k1衍生细胞——hd-biop3，阳性转染子需要在本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，所述高通量筛选高产细胞株的方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，所述筛选标记基因包括抗生素筛选标记基因和/或谷氨酰胺合成酶基因；

3.根据权利要求1或2所述的高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，步骤(3)所述稀释使用的培养基为CHO Clone Medium；

4.根据权利要求1-3任一项所述的高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，所述载体包括病毒载体或质粒载体；

5.根据权利要求1-4任一项所述的高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，所述...

【技术特征摘要】

1.一种高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，所述高通量筛选高产细胞株的方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，所述筛选标记基因包括抗生素筛选标记基因和/或谷氨酰胺合成酶基因；

3.根据权利要求1或2所述的高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，步骤(3)所述稀释使用的培养基为cho clone medium；

4.根据权利要求1-3任一项所述的高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，所述载体包括病毒载体或质粒载体；

5.根据权利要求1-4任一项所述的高通量筛选高产细胞株的方法，其特征在于，所述宿主细胞包括ns0细胞、hek293细胞、sp2/0细胞或cho细胞中的任意一种或至少两种的组合。

6.根据权利要求1-5任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：于妍，张玮，孙伟，徐骁，纪海姣，代军军，李文蕾，黄瑞晶，李剑，
申请(专利权)人：天士力生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：