一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法技术

本发明专利技术属于药物质量测定方法技术领域，尤其涉及一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法。针对现有技术中对非那雄胺中异构体杂质的检测方法存在的缺陷，本发明专利技术的技术方案为：分别通过高效液相色谱法对混合对照品溶液和供试品溶液进行测试，通过混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图中各杂质峰的峰面积计算供试品溶液中各杂质的含量。所述稀释剂为甲醇‑水混合溶液；所述流动相包括流动相A及流动相B，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，所述流动相B为甲醇。本发明专利技术中的检测方法能够在反相色谱条件下，检测非那雄胺中的异构体杂质，且不被其余已知杂质干扰，保障产品的品质，操作简单，时间快，精确度高，数据稳定。

【技术实现步骤摘要】
一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法
本专利技术属于药物质量测定方法
，尤其涉及一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法。
技术介绍
非那雄胺(Finasteride)作为竞争性Ⅱ型5α还原酶抑制剂，对良性前列腺增生和雄激素脱发的治疗作用可靠，且安全性和耐受性良好；在减少前列腺手术出血和预防前列腺癌方面有良好的应用前景，对前列腺微血管和细胞凋亡的作用研究，为其应用提供了重要理论依据，非那雄胺不仅能有效地治疗BPH，而且能减低前列腺癌的发病率，减少发生前列癌的风险；还能治疗男性雄激素性脱发(AGA)。其化学名称为N-叔丁基-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-甲酰胺；化学式结构如下：与本品结构相似的化合物度他雄胺、黄体酮在碱性条件下不稳定，可生成17位差向异构体杂质，现有EP方法能控制已知杂质，即下表所示的杂质A、杂质B和杂质C。但是，现有EP方法无法控制异构体杂质。在本化合物的产品中，主要包含的异构体杂质为：17α非那雄胺异构体、5β非那雄胺异构体和5β杂质A异构体。若不在生产和质量控制过程中对异构体杂质进行检测，可能会导致异构体杂质不受控，或给疗效上带来新的问题。这些异构体杂质影响产品总杂质量，影响临床运用，给临床带来安全隐患。因此，需要一种能够准确监控异构体杂质含量的方法，保障非那雄胺产品的品质。目前有人用高效液相色谱法监控非那雄胺杂质A、B、C，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。传统标准中的方法没有提供控制非那雄胺异构体杂质的色谱监控方法，而其他文献报道的也有缺陷，无法满足对产品的高品质要求。
技术实现思路
针对现有技术中对非那雄胺产品中的异构体杂质的检测存在缺陷的技术问题，本专利技术提供一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法，以保障非那雄胺产品的品质。该方法操作简单，时间快，精确度高，数据稳定。一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法,其特征在于,包括如下步骤：(1)配制混合对照品溶液：取非那雄胺及杂质对照品，用稀释剂配制成包含非那雄胺及杂质的混合对照品溶液；所述杂质包括17α非那雄胺异构体、5β非那雄胺异构体或5β杂质A异构体中的至少一种；所述稀释剂为甲醇-水混合溶液；(2)配制供试品溶液：取供试品，用稀释剂配制成供试品溶液；(3)分别通过高效液相色谱法对混合对照品溶液和供试品溶液进行测试，通过混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图中各杂质峰检测杂质的存在；所述高效液相色谱的色谱条件为：流动相包括流动相A及流动相B，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，所述流动相B为甲醇；色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶填料。优选的，步骤(3)中，通过混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图中各杂质峰的峰面积计算供试品溶液中各杂质的含量。优选的，步骤(3)中，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为C18柱，柱温29-31℃，流速为0.55-0.65ml/min，检测波长为208-212nm，流动相pH值为2.8-3.2，进样量为30-50μl；进一步优选的，所述步骤(3)中，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为AgilentInfinityLabPoroshell120EC-C18，柱温30℃，流速为0.6ml/min，检测波长为210nm，流动相pH值为3.0，进样量为40μl。优选的，步骤(3)中，高效液相色谱法中，流动相洗脱比例为磷酸盐缓冲液与甲醇体积比为44:56-46:54。优选的，步骤(3)中，磷酸盐缓冲液的配制方法为，将磷酸二氢钾配制成0.01mol/L的溶液，然后用磷酸调节pH值至3.0。优选的，步骤(1)中，混合对照品溶液中各组分的浓度为：非那雄胺0.8-1.5mg/ml，17α非那雄胺异构体、5β非那雄胺异构体和/或5β杂质A异构体各0.8-1.5μg/ml。优选的，杂质还包括已知杂质，所述已知杂质包括杂质A、杂质B和杂质C；所述杂质A如结构式Ⅰ所示：所述杂质B如结构式Ⅱ所示：所述杂质C如结构式Ⅲ所示：进一步优选的，步骤(1)中，混合对照品溶液中已知杂质的浓度为：杂质A、杂质B和杂质C各2-4μg/ml。优选的，步骤(2)中，稀释剂由甲醇与水按体积比60:40混合而成。优选的，步骤(3)中对混合对照品溶液和供试品溶液进行测试前，先用系统适用性溶液进行预检测，以确定合格的色谱条件，所述系统适用性溶液由非那雄胺及各杂质对照品配制而成，所述合格的色谱条件满足：杂质与杂质之间分离度大于1.5，以及杂质与主成分之间分离度大于1.5；且连续测定5次混合对照品溶液，各异构体杂质峰峰面积RSD值≤2.0％。在非那雄胺产品中，可能的异构体杂质主要是17α非那雄胺异构体、5β非那雄胺异构体和5β杂质A异构体，这些异构体杂质之间以及它们与产品主要成分非那雄胺之间的结构差异和极性差异小，难以分离。因而，如何在不被其他已知杂质干扰的情况下分别检测这几种杂质存在一定的技术困难。本申请的技术方案及优化方案中所采用的色谱条件根据非那雄胺主成分性质及各异构体杂质性质、分离情况来确定。最终确定的色谱条件能够达到很好的分离效果，使得杂质与杂质之间分离度大于1.5，以及杂质与主成分之间分离度大于1.5；且连续测定5次混合对照品溶液，各异构体杂质峰峰面积RSD值≤2.0％。从而能够监控非那雄胺中的异构体杂质，为非那雄胺原料质量控制提供可行的检测方法。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为专利技术中较优条件下对各杂质进行定位的图谱。具体实施方式以下通过实例对本专利技术作进一步的说明：本申请所适用产品为非那雄胺，化学名称为N-叔丁基-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾-1-烯-17β-甲酰胺。主要的检测对象为17α非那雄胺异构体(17αFTD)、5β非那雄胺异构体(5βFTD)和5β杂质A异构体(5β杂质A)。实施例所用仪器、设备和试剂：高效液相色谱仪：Aglient1260。色谱柱：AgilentInfinityLabPoroshell120EC-C18，4.6mm×150mm，4μm。试剂：甲醇(Fisher；批号178513；色谱纯)；磷酸二氢钾(CNW；批号33420100；色谱纯)；超纯水。电子天平：M本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法,其特征在于,包括如下步骤：/n(1)配制混合对照品溶液：取非那雄胺及杂质对照品，用稀释剂配制成包含非那雄胺及杂质的混合对照品溶液；所述杂质包括17α非那雄胺异构体、5β非那雄胺异构体或5β杂质A异构体中的至少一种；所述稀释剂为甲醇-水混合溶液；/n(2)配制供试品溶液：取供试品，用稀释剂配制成供试品溶液；/n(3)分别通过高效液相色谱法对混合对照品溶液和供试品溶液进行测试，通过比较混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图判断供试品中是否存在杂质；/n所述高效液相色谱的色谱条件为：流动相包括流动相A及流动相B，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，所述流动相B为甲醇；色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶填料。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法,其特征在于,包括如下步骤：
(1)配制混合对照品溶液：取非那雄胺及杂质对照品，用稀释剂配制成包含非那雄胺及杂质的混合对照品溶液；所述杂质包括17α非那雄胺异构体、5β非那雄胺异构体或5β杂质A异构体中的至少一种；所述稀释剂为甲醇-水混合溶液；
(2)配制供试品溶液：取供试品，用稀释剂配制成供试品溶液；
(3)分别通过高效液相色谱法对混合对照品溶液和供试品溶液进行测试，通过比较混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图判断供试品中是否存在杂质；
所述高效液相色谱的色谱条件为：流动相包括流动相A及流动相B，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，所述流动相B为甲醇；色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶填料。


2.按照权利要求1所述的的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，通过混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图中各杂质峰的峰面积计算供试品溶液中各杂质的含量。


3.按照权利要求1所述的的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为C18柱，柱温29-31℃，流速为0.55-0.65ml/min，检测波长为208-212nm，流动相pH值为2.8-3.2，进样量为30-50μl；
优选的，所述步骤(3)中，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为AgilentInfinityLabPoroshell120EC-C18，柱温30℃，流速为0.6ml/min，检测波长为210nm，流动相pH值为3.0，进样量为40μl。


4.按照权利要求1所述的一种利用高效液相色谱仪检测非那雄胺中异构体杂质的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，高效液相色谱法中，流动相洗脱比例为磷酸盐缓冲液与甲醇体积比为44:56-46:54。


5.按照权利要求1所述的一种利用高效...

【专利技术属性】
技术研发人员：余永秀，李凤，龙明菊，
申请(专利权)人：扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司，四川海汇药业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51