一种细胞培养器制造技术

本实用新型专利技术公开了一种细胞培养器。该细胞培养器包括培养体和用于覆盖培体的培养盖，所述的培养体的培养面呈曲面状，培养面表面设置有温敏特性的水凝胶。本实用新型专利技术的细胞培养器增大了细胞培养面的比表面积，可以采用小体积的培养器皿或减少培养器皿用量，还可相应减少培养基的用量，降低成本，减少了操作过多带来的染菌几率和其他操作风险；可使部分细胞达到3D培养的效果，细胞本身和其分泌物更接近于体内状态；培养面接枝有聚N‑异丙基丙烯酰胺，细胞在37℃时能正常生长，当温度低于32℃时，细胞自动脱落，用于培养贴壁细胞时，收集细胞不需要使用胰酶，避免了对细胞的伤害。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞培养器
本技术涉及生物实验设备
，特别涉及一种细胞培养器。
技术介绍
体外细胞培养有多种方式，从不同角度分类，可以分为贴壁培养和悬浮培养、2D培养和3D培养，静态培养和动态培养等。相应的，各种细胞培养器具也是种类繁多，包括细胞培养皿、培养瓶、培养袋、发酵罐、高通量细胞培养器、微载体、细胞培养支架等等。由于培养条件等诸多因素的改变，同一种细胞在3D与2D细胞培养下，其形状、基因的表达及细胞侵袭等特性都有可能发生改变。除此之外，在两种不同的培养模式下，细胞在形状、培养花费、细胞间相互作用及细胞耐药性方面也都表现出巨大的差异。目前3D培养有细胞悬浮培养和三维支架培养两种常用模式。细胞悬浮培养操作简单，但用途较为单一，不能用于细胞的迁移研究。三维支架培养则是将细胞培养在具有空间结构的支架上。支架材料有天然和人工合成两种，天然材料存在提取困难、整体质量较难控制等缺点，人工合成材料生物相容性稍差，有可能引起细胞的排异反应。此外，目前市面上所能见到的细胞培养器的培养面都是平滑的(图1)，这样的培养面培养的细胞数量有限。如果希望获得更多的细胞就要选择更大或更多的细胞培养器，如此以来，自然增加了操作者的工作量和成本，且更多细胞培养器的使用增加了细胞污染或发生其他风险的几率。再者，很多贴壁培养的细胞培养完毕后要进行收集，但贴壁细胞“粘”在培养面表面。通常做法为去除培养液后加入胰酶消化掉细胞抓住培养面的“触角”，使细胞脱离培养面，但加入胰酶对于细胞具有一定的伤害作用。
技术实现思路
本技术的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种细胞培养器。本技术的目的通过下述技术方案实现：一种细胞培养器，包括培养体和用于覆盖培体的培养盖，所述的培养体的培养面呈波浪状，表面设置为粗糙曲面。所述的粗糙曲面为设置有划痕或同材质的细小颗粒物。所述的划痕的深度为40-60μm，间距不大于20μm。所述的细小颗粒物与细胞培养器同材质，直径为60μm±20μm，间距为40～60μm。所述的波浪型曲面为单向波浪曲面或多向波浪曲面。所述的单向波浪曲面为整个培养面只有一个方向的波浪面，其横截面为波浪，纵截面为直线。所述的多向波浪曲面为整个培养面任何方向的剖面均为波浪。所述的波浪状曲面的凸点(最高处)和凹点(最低处)的垂直距离不大于2mm。所述的凹点的曲率直径为40～60μm。所述的培养面上设置有温敏特性的水凝胶层。所述的温敏特性的水凝胶为聚异丙基丙烯酰胺水凝胶。本技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本技术的细胞培养器与传统细胞培养器相比，增大了细胞培养面的比表面积，因此可以采用小体积的培养器皿或减少培养器皿用量，还可相应减少培养基的用量，降低成本，更重要的是减少了操作过多带来的染菌几率和其他操作风险。(2)本技术的细胞培养器可以使部分被培养的细胞达到3D培养的效果(图2、图3和图4)，使得部分被培养的细胞从空间角度上更接近于体内状态，细胞本身和其分泌物更接近于体内状态。虽属于人工合成材质的3D培养，但生产工艺更加简洁，同时具备2D培养的操作简便、经济、培养条件可控等优点。(3)本技术的细胞培养器的培养面接枝有聚N-异丙基丙烯酰胺，细胞在37℃时能正常生长，当温度低于32℃时，细胞自动脱落，用于培养贴壁细胞时，收集细胞不需要使用胰酶，避免了对细胞的伤害。附图说明图1是平面细胞培养面和普通波浪形培养面增加比表面积的示意图。图2是高曲率波浪状培养面培养细胞示意图。图3是设置有划痕的培养面培养细胞示意图。图4是设置有同材质细小颗粒物的培养面培养细胞示意图。图5是培养皿的结构示意图；其中，1为皿体，2为皿盖。图6是37℃时，细胞在接枝温敏特性水凝胶的培养面上正常培养的细胞形态图。图7是低于32℃时，细胞从接枝温敏特性水凝胶的培养面脱落的示意图。具体实施方式下面将结合实施方式和附图对本技术的实施方案进行详细描述，但本技术的实施方式不限于此。实施例1(1)本技术的结构一种细胞培养皿，如图5所示，包括皿体和皿盖。皿体的培养面呈多向波浪状曲面，表面具有同材质的细小颗粒物，细小颗粒物直径为60μm±20μm，间距为40μm。培养面表面还设置有温敏特性的水凝胶。波浪状曲面的曲面最高处(凸点)和最低处(凹点)的垂直距离等于2mm，凹点的曲率直径为40～60μm。(2)本技术的制备1)称取聚N-异丙基丙烯酰胺(NIPAAm)、交联剂亚甲基丙烯酰胺(MBA)和异丙醇，配制含有质量体积比为55％的NIPAAm和含有质量体积比为0.5％的MBA的异丙醇溶液。2)将步骤1)制备的溶液取400uL加入培养皿中，将培养皿置于电子加速器中照射，每次照射剂量为30KGy，循环8次，总照射剂量为240KGy。采用普通培养皿作为对照组。3)用去离子水冲洗培养皿，除去未反应单体和溶剂，浸泡7天，每天换一次水。4)干燥培养皿，消毒灭菌，进行细胞接种实验，在培养皿上接种Vero细胞(丰晖生物)，以含有10％(v/v)新生牛血清的M199培养基培养，观察脱落效果，以验证高能电子接枝的培养皿能否重复使用。结果表明，37℃时Vero细胞在接枝温敏特性水凝胶的培养面上正常培养，低于32℃时Vero细胞从接枝温敏特性水凝胶的培养瓶培养面上脱落。使用本专利技术的培养皿培养得到比对照组数量更多的Vero细胞。实施例2(1)本技术的结构一种细胞培养瓶，包括瓶体和瓶盖。瓶体的培养面呈单向波浪状曲面，培养面表面设置有深度为40～60μm的划痕，划痕之间间距不大于20μm。培养面表面还设置有温敏特性的水凝胶。波浪状曲面的曲面最高处(凸点)和最低处(凹点)的垂直距离等于2mm，凹点的曲率直径为40～60μm。(2)本技术的制备1)称取聚N-异丙基丙烯酰胺(NIPAAm)、交联剂亚甲基丙烯酰胺(MBA)和异丙醇，配制含有质量体积比为55％的NIPAAm和含有质量体积比为0.5％的MBA的异丙醇溶液。2)将步骤1)制备的溶液取400uL加入培养瓶中，将培养瓶置于电子加速器中照射，每次照射剂量为30KGy，循环8次，总照射剂量为240KGy。采用普通培养瓶作为对照组。3)用去离子水冲洗培养瓶，除去未反应单体和溶剂，浸泡7天，每天换一次水。4)干燥培养瓶，消毒灭菌，进行细胞接种实验，在培养瓶中接种Vero细胞，以含有10％(v/v)新生牛血清的M199培养基培养，观察脱落效果。结果表明，37℃时Vero细胞在接枝温敏特性水凝胶的培养面上正常培养(图6)，低于32℃时Vero细胞从接枝温敏特性水凝胶的培养瓶培养面上脱落(图7)。使用本专利技术的培养瓶培养得到比对照组数量更多的Vero细胞。上述实施例为本技术较佳的实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞培养器，包括培养体和用于覆盖培养体的培养盖，其特征在于：所述的培养体的培养面呈波浪状，表面设置为粗糙曲面；/n所述的粗糙曲面为设置有划痕或细小颗粒物；/n所述的划痕的深度为40～60μm，间距不大于20μm；/n所述的细小颗粒物与细胞培养器同材质，直径为60μm±20μm，间距为40～60μm；/n所述的波浪状曲面的凸点和凹点的垂直距离不大于2mm；/n所述的凹点的曲率直径为40～60μm。/n

【技术特征摘要】
1.一种细胞培养器，包括培养体和用于覆盖培养体的培养盖，其特征在于：所述的培养体的培养面呈波浪状，表面设置为粗糙曲面；
所述的粗糙曲面为设置有划痕或细小颗粒物；
所述的划痕的深度为40～60μm，间距不大于20μm；
所述的细小颗粒物与细胞培养器同材质，直径为60μm±20μm，间距为40～60μm；
所述的波浪状曲面的凸点和凹点的垂直距离不大于2mm；
所述的凹点的曲率直径为40～60μm。


2.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏伟，嵐山芮，李永生，
申请(专利权)人：广州瑞铂茵健康科技有限公司，
类型：新型
国别省市：广东;44