一种CAR-T细胞的培养基及培养方法技术

本发明专利技术提供一种CAR‑T细胞的培养基及培养方法，包括以下重量份原料：肌酸磷酸32～60份、焦磷酸12～34份、白细胞介素12～50份、碱性成纤维细胞生长因子10～40份、苯乙酸胍15～35份、巯基乙酸11～38份、角鲨烷8～15份、转铁蛋白2～9份，经脐带血分离得到CAR‑T细胞进行体外培育，利用本发明专利技术的配制的培养基结合培养方法进行培育，得到的CAR‑T细胞个体差异小，增殖率高，达到90％以上，杀瘤活性高，抗瘤谱广，细胞毒活性显著增强，杀瘤活性达到75％以上，提高临床疗效。

【技术实现步骤摘要】
一种CAR-T细胞的培养基及培养方法
本专利技术涉及细胞培养领域，特别涉及一种CAR-T细胞的培养基及培养方法。
技术介绍
CAR-T细胞治疗最早的研究始于1989年，是嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，英文全称ChimericAntigenReceptorT-CellImmunotherapy。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。在实验室，技术人员通过基因工程技术，将T细胞激活，并装上定位导航装置CAR(肿瘤嵌合抗原受体)，将T细胞这个普通“战士”改造成“超级战士”，即CAR-T细胞，他利用其“定位导航装置”CAR，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，它们能高效地杀灭肿瘤细胞，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。但是目前体外培育的CAR-T细胞增殖力不高、细胞毒活性较低的缺点。
技术实现思路
鉴于此，本专利技术提出一种CAR-T细胞的培养基及培养方法，解决上述问题。本专利技术的技术方案是这样实现的：一种CAR-T细胞的培养基：包括以下重量份原料：肌酸磷酸32～60份、焦磷酸12～34份、白细胞介素12～50份、碱性成纤维细胞生长因子10～40份、苯乙酸胍15～35份、巯基乙酸11～38份、角鲨烷8～15份、转铁蛋白2～9份。优选地，一种CAR-T细胞的培养基，包括以下重量份原料：肌酸磷酸45份、焦磷酸22份、白细胞介素35份、碱性成纤维细胞生长因子25份、苯乙酸胍25份、巯基乙酸24份、角鲨烷10份、转铁蛋白5份。优选地，调节碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10～25ng/mL。进一步的，一种CAR-T细胞的培养基的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、收集脐带血，分离出CAR-T细胞，选取1～3mm3CAR-T细胞放置于离心管中，加入2～5mg/ml的胰酶EDTA浸润，然后加入DMEM完全培养基终止胰酶消化；S2、将D-Hank’s平衡盐溶液加入S1中的离心管中，将离心管内的溶液离心4～8min，离心力为300～800g，离心速率为1500～2200r/min；S3、将离心后的CAR-T细胞转移至上述培养基中，加入同等细胞数量的CD3/CD28抗体偶联磁珠刺激培养，放至培养箱中培养8～12天。优选地，所述DMEM的添加量为2～5ml。优选地，所述培养箱的培养条件为，培养温度28～40℃，磁场频率为2～50Hz，磁场强度3～100mT。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的CAR-T细胞的合理选择培养基质，科学配比，各基质协同发挥作用，共同提供CAR-T细胞营养基质，提高增殖能力，调节培养方法，限定培养环境，优化培养体系而获得的细胞增殖能力更强、杀伤活力更大的肿瘤杀伤细胞群体，使得培养出的CAR-T细胞个体差异小，增殖率高，达到90％以上，杀瘤活性高，抗瘤谱广，细胞毒活性显著增强，杀瘤活性达到75％以上，提高临床疗效。具体实施方式为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1一种CAR-T细胞的培养基：包括以下重量份原料：肌酸磷酸32份、焦磷酸12份、白细胞介素12份、碱性成纤维细胞生长因子10份、苯乙酸胍15份、巯基乙酸11份、角鲨烷8份、转铁蛋白2份，碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10ng/mL。实施例2一种CAR-T细胞的培养基：包括以下重量份原料：肌酸磷酸60份、焦磷酸34份、白细胞介素50份、碱性成纤维细胞生长因子40份、苯乙酸胍35份、巯基乙酸38份、角鲨烷15份、转铁蛋白9份，碱性成纤维细胞生长因子的浓度为25ng/mL。实施例3一种CAR-T细胞的培养基，包括以下重量份原料：肌酸磷酸45份、焦磷酸22份、白细胞介素35份、碱性成纤维细胞生长因子25份、苯乙酸胍25份、巯基乙酸24份、角鲨烷10份、转铁蛋白5份，碱性成纤维细胞生长因子的浓度为18ng/mL；上述实施例1～3采用以下培养方法：具体步骤如下：S1、收集脐带血，分离出CAR-T细胞，选取2mm3CAR-T细胞放置于离心管中，加入3mg/ml的胰酶EDTA浸润，然后加入3mlDMEM完全培养基终止胰酶消化；S2、将D-Hank’s平衡盐溶液加入S1中的离心管中，将离心管内的溶液离心6min，离心力为500g，离心速率为1900r/min；S3、将离心后的CAR-T细胞转移至上述培养基中，加入同等细胞数量的CD3/CD28抗体偶联磁珠刺激培养，放至培养箱中，在培养温度32℃，磁场频率为34Hz，磁场强度54mT的条件下培养10天。实施例4本实施例与实施例3的区别在于，一种CAR-T细胞的培养基的培养方法，包括以下步骤：S1、收集脐带血，分离出CAR-T细胞，选取1mm3CAR-T细胞放置于离心管中，加入2mg/ml的胰酶EDTA浸润，然后加入2mlDMEM完全培养基终止胰酶消化；S2、将D-Hank’s平衡盐溶液加入S1中的离心管中，将离心管内的溶液离心4min，离心力为300g，离心速率为1500r/min；S3、将离心后的CAR-T细胞转移至上述培养基中，加入同等细胞数量的CD3/CD28抗体偶联磁珠刺激培养，放至培养箱中，在培养温度28℃，磁场频率为2Hz，磁场强度3mT的条件下培养8天。实施例5本实施例与实施例3的区别在于，一种CAR-T细胞的培养基的培养方法，包括以下步骤：S1、收集脐带血，分离出CAR-T细胞，选取3mm3CAR-T细胞放置于离心管中，加入5mg/ml的胰酶EDTA浸润，然后加入5mlDMEM完全培养基终止胰酶消化；S2、将D-Hank’s平衡盐溶液加入S1中的离心管中，将离心管内的溶液离心8min，离心力为800g，离心速率为2200r/min；S3、将离心后的CAR-T细胞转移至上述培养基中，加入同等细胞数量的CD3/CD28抗体偶联磁珠刺激培养，放至培养箱中，在培养温度40℃，磁场频率为50Hz，磁场强度100mT的条件下培养12天。实施例6本实施例与实施例3的区别在于，一种CAR-T细胞的培养基的培养方法，未加入同等细胞数量的CD3/CD28抗体偶联磁珠刺激培养。实施例7本实施例与实施例3的区别在于，一种CAR-T细胞的培养基的培养方法，所述培养箱的培养条件为，培养温度25℃，磁场频率为58Hz，磁场强度120mT。对比例1本对比例和实施例3的区别在于，一种CAR-T细胞的培养基，包括以下重量份原料：肌酸磷酸30份、焦磷酸44份、白细胞介素10份、碱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CAR-T细胞的培养基，其特征在于：包括以下重量份原料：肌酸磷酸32～60份、焦磷酸12～34份、白细胞介素12～50份、碱性成纤维细胞生长因子10～40份、苯乙酸胍15～35份、巯基乙酸11～38份、角鲨烷8～15份、转铁蛋白2～9份。/n

【技术特征摘要】
1.一种CAR-T细胞的培养基，其特征在于：包括以下重量份原料：肌酸磷酸32～60份、焦磷酸12～34份、白细胞介素12～50份、碱性成纤维细胞生长因子10～40份、苯乙酸胍15～35份、巯基乙酸11～38份、角鲨烷8～15份、转铁蛋白2～9份。


2.如权利要求1所述的一种CAR-T细胞的培养基，其特征在于：包括以下重量份原料：肌酸磷酸45份、焦磷酸22份、白细胞介素35份、碱性成纤维细胞生长因子25份、苯乙酸胍25份、巯基乙酸24份、角鲨烷10份、转铁蛋白5份。


3.如权利要求1所述的一种CAR-T细胞的培养基，其特征在于：调节碱性成纤维细胞生长因子的浓度为10～25ng/mL。


4.如权利要求1所述的一种CAR-T细胞的培养基的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、收集脐带血，分...

【专利技术属性】
技术研发人员：湛振键，齐国光，刘世豪，
申请(专利权)人：广东康盾生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44