细胞保存剂和细胞的保存方法技术

本发明专利技术涉及一种细胞保存剂和细胞的保存方法。以质量份数计，该细胞保存剂包括：0.5份～2.5份的维生素C、3份～6份的人血白蛋白、0.1004份～0.251份的葡萄糖酸钠、0.0736份～0.184份的醋酸钠、0.0074份～0.0185份的氯化钾、0.006份～0.015份的氯化镁和2份～2.5份的葡萄糖。上述细胞保存剂能够提高冷藏时细胞的存活率。

【技术实现步骤摘要】
细胞保存剂和细胞的保存方法
本专利技术涉及细胞冻存
，特别是涉及一种细胞保存剂和细胞的保存方法。
技术介绍
免疫细胞过继疗法是放化疗后肿瘤患者辅助治疗的重要手段之一。淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞、肿瘤浸润淋巴(TIL)细胞和CD3单抗激活的杀伤细胞曾被用于免疫细胞过继疗法的研究中，但由于体外增殖数量少、IL-2输注取材困难及细胞毒力较低等原因，淋巴因子激活的杀伤(LAK)细胞、肿瘤浸润淋巴(TIL)细胞和CD3单抗激活的杀伤细胞的临床应用受到极大限制。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkillercells，CIK细胞)是将人外周血单个核细胞(PBMC)在体外经过多种细胞因子(IFN-γ,rIL-2,抗CD3McAb和IL-1α)共同诱导而获得的一群异质细胞，同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点，被认为是肿瘤过继免疫治疗的新希望。在免疫细胞过继疗法中，扩增培养的CIK细胞通常需要冷藏保存，然而，冷藏保存时CIK细胞的存活率下降快，只能短暂(一般不超过48小时)保存CIK细胞。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种能提高CIK细胞的细胞存活率的细胞保存剂。一种细胞保存剂，以质量份数计，所述细胞保存剂包括：0.5份～2.5份的维生素C、3份～6份的人血白蛋白、0.1004份～0.251份的葡萄糖酸钠、0.0736份～0.184份的醋酸钠、0.0074份～0.0185份的氯化钾、0.006份～0.015份的氯化镁和2份～2.5份的葡萄糖。上述细胞保存剂通过维生素C、人血白蛋白、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾、氯化镁和葡萄糖的相互配合，提高CIK细胞冷藏时的细胞存活率，延长CIK细胞的保存时间。在其中一个实施例中，所述细胞保存剂还包括0.2852份～0.713份的氯化钠。在其中一个实施例中，所述细胞保存剂还包括碳酸氢钠、盐酸半胱氨酸、焦亚硫酸钠和依地酸二钠中的至少一种。在其中一个实施例中，所述细胞保存剂包括：25份的维生素C、5份的人血白蛋白、0.1506份～0.2008份的葡萄糖酸钠、0.1104份～0.1472份的醋酸钠、0.0111份～0.0148份的氯化钾、0.009份～0.012份的氯化镁、5份～2份的葡萄糖和0.4278份～0.5704份的氯化钠。在其中一个实施例中，所述细胞保存剂包括：25份的维生素C、5份的人血白蛋白、0.1757份的葡萄糖酸钠、0.1288份的醋酸钠、0.01295份的氯化钾、0.0105份的氯化镁、75份的葡萄糖和0.4491份的氯化钠。6.根据权利要求1～3及5中任一项所述的细胞保存剂，所述细胞保存剂为粉剂或溶液剂。在其中一个实施例中，制备100mL的所述细胞保存剂的原料包括：2mL～10mL的维生素C注射液、20mL～50mL的复方电解质注射液、15mL～30mL的人血白蛋白注射液和20mL～50mL的葡萄糖氯化钠注射液；所述维生素C注射液中维生素的浓度为0.25g/mL；所述复方电解质注射液中含有葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁，在所述复方电解质注射液中，葡萄糖酸钠的浓度为0.00502g/mL，醋酸钠的浓度为0.00368g/mL，氯化钾的浓度为0.00037g/mL，氯化镁的浓度为0.0003g/mL，所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的浓度为0.2g/mL。在其中一个实施例中，制备100mL的所述细胞保存剂的原料包括：5mL的维生素C注射液、30mL～40mL的复方电解质注射液、25mL的人血白蛋白注射液和30mL～40mL的葡萄糖氯化钠注射液。在其中一个实施例中，制备100mL的所述细胞保存剂的原料包括：5mL的维生素C注射液、35mL的复方电解质注射液、25mL的人血白蛋白注射液和35mL的葡萄糖氯化钠注射液。一种细胞的保存方法，包括以下步骤：将细胞与上述的细胞保存剂混合，制备细胞悬液，其中，所述细胞悬液中细胞的密度为0.1×108个/mL～0.7×108个/mL；及在2℃～8℃的条件下保存所述细胞悬液。在其中一个实施例中，所述细胞为细胞因子诱导的杀伤性细胞。在其中一个实施例中，所述细胞冻存剂在使用时，每100mL的细胞保存剂稀释液包括：0.5g～2.5g的维生素C、3g～6g的人血白蛋白、0.1004g～0.251g的葡萄糖酸钠、0.0736g～0.184g的醋酸钠、0.0074g～0.0185g的氯化钾、0.006g～0.015g的氯化镁和2g～2.5g的葡萄糖。附图说明图1为实施例1中的A～E组的细胞总数柱状图；图2为实施例1中的A～E组的细胞活率柱状图；图3为实施例1中的F～J组的细胞总数柱状图；图4为实施例1中的F～J组的细胞活率柱状图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本专利技术公开内容更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。此外，本文中的份数若无特殊说明均是质量份数。本专利技术一实施方式提供了一种细胞保存剂，该细胞保存剂包括：0.5份～2.5份的维生素C、3份～6份的人血白蛋白、0.1004份～0.251份的葡萄糖酸钠、0.0736份～0.184份的醋酸钠、0.0074份～0.0185份的氯化钾、0.006份～0.015份的氯化镁和2份～2.5份的葡萄糖。维生素C用于减少细胞氧化损伤，快速缓解细胞内过氧化物的累积；人血白蛋白作为稳定剂用于维持胶体渗透压、避免细胞团聚；葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁用于保持pH值、离子渗透压、胶体渗透压。上述细胞保存剂通过维生素C、人血白蛋白、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾、氯化镁和葡萄糖的相互配合，提高冷藏时细胞的存活率。在其中一个实施例中，细胞保存剂还包括0.2852份～0.713份的氯化钠。在其中一个实施例中，细胞保存剂包括：1.25份的维生素C、5份的人血白蛋白、0.1506份～0.2008份的葡萄糖酸钠、0.1104份～0.1472份的醋酸钠、0.0111份～0.0148份的氯化钾、0.009份～0.012份的氯化镁、1.5份～2份的葡萄糖和0.4278份～0.5704份的氯化钠。在其中一个实施例中，细胞保存剂包括：1.25份的维生素C、5份的人血白蛋白、0.1757份的葡萄糖酸钠、0.1288份的醋酸钠、0.01295份的氯化钾、0.0105份的氯化镁、1.75份的葡萄糖和0.4491份的氯化钠。在其中一个实施例中，细胞保存剂还包括碳酸氢钠、盐酸半胱氨酸、焦亚硫酸钠和依地酸二钠中的至少一种。进一步地，细胞保本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞保存剂，其特征在于，以质量份数计，所述细胞保存剂包括：0.5份～2.5份的维生素C、3份～6份的人血白蛋白、0.1004份～0.251份的葡萄糖酸钠、0.0736份～0.184份的醋酸钠、0.0074份～0.0185份的氯化钾、0.006份～0.015份的氯化镁和2份～2.5份的葡萄糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种细胞保存剂，其特征在于，以质量份数计，所述细胞保存剂包括：0.5份～2.5份的维生素C、3份～6份的人血白蛋白、0.1004份～0.251份的葡萄糖酸钠、0.0736份～0.184份的醋酸钠、0.0074份～0.0185份的氯化钾、0.006份～0.015份的氯化镁和2份～2.5份的葡萄糖。


2.根据权利要求1所述的细胞保存剂，其特征在于，所述细胞保存剂还包括0.2852份～0.713份的氯化钠。


3.根据权利要求1所述的细胞保存剂，其特征在于，所述细胞保存剂还包括碳酸氢钠、盐酸半胱氨酸、焦亚硫酸钠和依地酸二钠中的至少一种。


4.根据权利要求1～3任一项所述的细胞保存剂，其特征在于，以质量份数计，所述细胞保存剂包括：1.25份的维生素C、5份的人血白蛋白、0.1506份～0.2008份的葡萄糖酸钠、0.1104份～0.1472份的醋酸钠、0.0111份～0.0148份的氯化钾、0.009份～0.012份的氯化镁、1.5份～2份的葡萄糖和0.4278份～0.5704份的氯化钠；
优选地，以质量份数计，所述细胞保存剂包括：1.25份的维生素C、5份的人血白蛋白、0.1757份的葡萄糖酸钠、0.1288份的醋酸钠、0.01295份的氯化钾、0.0105份的氯化镁、1.75份的葡萄糖和0.4491份的氯化钠。


5.根据权利要求1～3中任一项所述的细胞保存剂，其特征在于，所述细胞保存剂为粉剂或溶液剂。


6.根据权利要求1所述的细胞保存剂，其特征在于，制备100mL的所述细胞保存剂的原料包括：2mL～10mL的维生素C注射液、20mL～50mL的复方电解质注射液、15mL～30mL的人血白蛋白注射液和20mL～50...

【专利技术属性】
技术研发人员：张珊，何嵘，宋宗培，罗燕平，
申请(专利权)人：深圳普瑞金生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44