生产香草醛的方法技术

本申请涉及通过应用改进的生物催化剂生产香草醛和/或其衍生物的新方法。还提供了用于制备所述改进的生物催化剂的表达系统。此外，本文还提供了可用于香草醛生化生产的新型酶突变体、相应的编码序列和载体。本发明专利技术进一步提供了经遗传修饰以改善生物催化剂功能表达的重组宿主细胞或生物，以及用于生产香草醛的重组宿主细胞或生物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生产香草醛的方法
本文提供了生产香草醛和相关化合物和衍生物的生化方法，该方法包括使用多肽的新组合。此外，本文提供了可用于香草醛的生化生产的新型酶突变体。
技术介绍
香草醛是全球用于食品、饮料和药品的重要化合物。世界上只有一小部分的生产是通过从香草豆荚中提取天然得到的；然而，这些天然植物来源的可用性低，生产方法费力且缓慢。尽管从香荚兰(V.planifolia)或塔希提香荚兰(V.tahitensis)的兰花豆荚中提取的复杂提取物以高成本提供了独特而复杂的混合物和嗅觉品质，但大多数香草醛(>99％，即每年1.6万吨)是由石化产品原料生产的，仍然有少量从造纸业的木质素废料中获得。但是，天然“非豆来源香草醛(vanillinnotfromthebean)”(NFB)的市场规模很小，但仍在增长，该市场主要服务于北美和欧洲。这两个市场要求拥有自然地位的监管要求不同。可以使用不同的生物化学方法将包括阿魏酸、姜黄素、丁子香酚或异丁子香酚的不同原料转化为香草醛。生产香草醛的生物技术方法已得到综述[GallageNJ,BL.2015.MolPlan本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达系统，用于重组表达具有异丁子香酚氧化活性的多肽，该表达系统包含带有如下序列的单个核酸构建体：/na.核苷酸序列(A)，其编码具有酶促异丁子香酚氧化活性的多肽，和/nb.至少一个核苷酸序列(B)，其编码至少一种辅助多肽，该辅助多肽单独地或协同地协助由所述核苷酸序列(A)编码的多肽的功能性表达；/n其中所述表达系统提供了所述核苷酸序列(A)和(B)的共表达。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180329 EP 18165125.81.一种表达系统，用于重组表达具有异丁子香酚氧化活性的多肽，该表达系统包含带有如下序列的单个核酸构建体：
a.核苷酸序列(A)，其编码具有酶促异丁子香酚氧化活性的多肽，和
b.至少一个核苷酸序列(B)，其编码至少一种辅助多肽，该辅助多肽单独地或协同地协助由所述核苷酸序列(A)编码的多肽的功能性表达；
其中所述表达系统提供了所述核苷酸序列(A)和(B)的共表达。


2.权利要求1的表达系统，其是单个多顺反子核酸构建体。


3.前述权利要求之一的表达系统，其中所述核苷酸序列(A)编码：
a.具有异丁子香酚氧化活性并且包含与SEQIDNO:2具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的多肽；或者
b.具有异丁子香酚氧化活性并且包含一种氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列与SEQIDNO:4具有至少70％的序列同一性，并且在选自T52，Q74，D440的氨基酸序列位置上包含至少一个突变，以及可选地在选自N120，T121，F281，M298和L470的氨基酸序列位置上包含至少一个另外的突变。


4.权利要求3的表达系统，其中具有异丁子香酚氧化活性的多肽是在选自SEQIDNO:4的T52，Q74和D440的氨基酸序列位置上包含至少一个突变的突变多肽。


5.前述权利要求之一的表达系统，其中所述至少核苷酸序列(B)包括核苷酸序列(B1)和(B2)，其中
a.(B1)编码具有分子伴侣素活性的多肽，该多肽包含与SEQIDNO:8具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和
b.(B2)编码具有分子伴侣素活性的多肽，该多肽包含与SEQIDNO:10具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。


6.具有异丁子香酚氧化活性的多肽，其包含与SEQIDNO:4具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，并且在选自T52，Q74，D440的氨基酸序列位置上包含至少一个突变，以及可选地在选自N120，T121，F281，M298和L470的氨基酸序列位置上包含至少一个另外的突变。


7.权利要求6的多肽，其是在选自SEQIDNO:4的T52，Q74和D440的氨基酸序列位置上包含至少一个突...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·布鲁尔曼，
申请(专利权)人：弗门尼舍有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH