大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的用途制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，本发明专利技术公开了一种大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的用途，用于提高大豆的抗病性能；大豆Glyma.04G016500.1抗病基因cDNA核苷酸的序列如SEQ ID NO：1所述。本发明专利技术还同时提供了制备GmSAUL1沉默植株的方法：沉默大豆Glyma.04G016500.1基因。

【技术实现步骤摘要】
大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的用途
本专利技术涉及基因工程
，特别涉及大豆Glyma.04G016500.1抗病基因及其编码的蛋白质GmSAUL1与合成方法。
技术介绍
大豆是一种非常重要的农作物，可以为人类提供蛋白质。但是大豆在生长的过程中非常容易受到生物以及非生物胁迫，例如大豆斑点病菌、大豆斑疹病菌、大豆根腐病、大豆霜霉病、大豆花叶病毒，这些疾病都会影响大豆的产量，所以提高大豆的抗病性的研究是非常必要的。E3连接酶是一个大家族。人类基因中E3编码基因不足700个，与人类基因组相比，高等植物大大扩展了E3基因家族。在拟南芥基因组中，比如：拟南芥中的E3编码基因已经超过了1400个。水稻中E3编码基因有1300多个，说明E3连接酶在植物的生命活动中扮演着重要的角色。这种扩展暗示了E3连接酶可能在植物特定的过程中发挥了一定的作用或者存在遗传冗余。衰老相关基因(SAUL1)是一种E3连接酶，通过不同的机制可以参与植物的抗病反应，在植物的防御反应中发挥着重要的作用。泛素化过程是真核生物中常见的蛋白质翻译后修饰过程，该过程被用来调节蛋白质底物的稳定性。大豆Glyma.04G016500.1编码的蛋白GmSAUL1参与蛋白质泛素化的途径，该途径是蛋白质修饰的一部分。专利号201510964032.8的专利技术《大豆Glyma·04G253500抗病基因的用途》告知了：沉默大豆Glyma.04G253500基因，验证其增强大豆抗病的能力；并转入诱导型启动子，增强大豆抗病能力---抗大豆花叶病毒(SMV)、抗大豆霜霉菌(大豆霜霉病菌属于真菌)，改良抗病性状。Glyma.04G253500编码的是激酶，其主要是参与MAPK途径。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的用途。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的用途，用于提高大豆的抗病性能；所述大豆Glyma.04G016500.1抗病基因cDNA核苷酸的序列如SEQIDNO：1所述。作为本专利技术的大豆Glyma.04G016500.1抗病基因用途的改进：所述抗病包括抗大豆斑点病菌(Psg)、抗大豆花叶病毒(SMV)。说明：大豆斑点病菌属于细菌。本专利技术还同时提供了制备GmSAUL1沉默植株的方法：沉默大豆Glyma.04G016500.1基因，大豆Glyma.04G016500.1抗病基因cDNA核苷酸的序列如SEQIDNO：1所述。在本专利技术中，提供了大豆Glyma.04G016500.1抗病基因及其编码的蛋白质GmSAUL1与合成方法。大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的cDNA核苷酸的序列如SEQIDNO：1所述。大豆Glyma.04G016500.1抗病基因编码的蛋白质GmSAUL1的氨基酸序列如SEQIDNO：2所述。大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的合成方法为：提取基因沉默型大豆的RNA，将RNA反转录为cDNA，再以cDNA为模板，以下述序列为引物，通过RT-PCR获得Glyma.04G016500.1的基因沉默序列，所述引物的序列为：Glyma.04G016500.1-F：AAGGGATCCGTTATGCGTGATCCTGTTACTTTAGAGlyma.04G016500.1-R：TTGGGTACCCCTTCAGCATGTCAACAATCATTG本专利技术还提供了一种GmSAUL1沉默植株，为验证沉默植株的沉默效果，通过提取沉默植株中的RNA，将RNA反转录为cDNA，再以cDNA为模板，以下述序列为引物，通过RT-PCR验证Glyma.04G016500.1的基因沉默效果，所述引物的序列为：Glyma.04G016500.1验证-F：ATGATGGCTGCGAGCTGlyma.04G016500.1验证-R：CTCATGTGAAAGGAATTTTACTAC本专利技术利用基因沉默及基因诱导技术，沉默大豆Glyma.04G016500.1基因，验证其增强大豆抗病的能力；并转入诱导型启动子，增强大豆抗病能力，改良抗病性状。本专利技术的Glyma.04G016500.1编码的是E3连接酶，其主要参与的途径是泛素化途径。本专利技术的有益效果：大豆Glyma.04G016500.1抗病基因提高了大豆抗病性能；大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的合成方法简单，合成效率高，可以实现工业化生产。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1为Glyma.04G016500.1抗病基因沉默片段的扩增结果。图2为GmSAUL1沉默植株表型；图2中：A为对照组与实验组的整体表型，沉默GmSAUL1后，沉默植株与对照组相比生长发育受到影响，出现植株矮小的表型；B为未沉默GmSAUL1的对照组(BPMV-0)的局部叶片；C为沉默GmSAUL1的实验组(BPMV-GmSAUL1)的局部叶片。图3为GmSAUL1沉默植株沉默效果分子验证；图3中：A为用载体上的引物进行验证，结果显示目的片段成功插入载体中；B为用目的基因的验证引物进行验证，结果显示目的基因被沉默。图4为检测GmSAUL1沉默植株中PR1基因转录水平，结果显示GmSAUL1沉默植株中PR1基因转录水平显著升高。图5为GmSAUL1沉默植株中出现细胞死亡；图5中：A为台盼蓝染色后的对照植株与沉默植株的整体叶片；B为对照组BPMV-0在体式显微镜下的局部叶片；C为实验组BPMV-GmSAUL1在体式显微镜下的局部叶片，沉默植株叶片出现细胞死亡现象。图6为GmSAUL1沉默植株中H2O2积累增加；图6中：A为DAB染色后对照植株与沉默植株的整体叶片；B为对照组BPMV-0在体式显微镜下的局部叶片；C为实验组BPMV-GmSAUL1在体式显微镜下的局部叶片，沉默植株中H2O2积累增加。图7为GmSAUL1沉默植株中SA含量增加；图7中：A为对照组BPMV-0与实验组BPMV-GmSAUL1中freeSA(自由水杨酸)的含量比较，标准偏差p<0.05；B为对照组BPMV-0与实验组BPMV-GmSAUL1中totalSA(总水杨酸)的含量比较，标准偏差p<0.05。图8为GmSAUL1沉默植株接种大豆斑点病菌Psg的表型及细菌计数比较；图8中：A为接种Psg(Pseudomonassyringaepv.glycinea大豆斑点病菌)6天后大豆的表型；B为Psg细菌侵染后的局部叶片；C为接种Psg6天后菌落数目，标准偏差p<0.005。图9为沉默GmSAUL1导致植株对大豆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的用途，其特征在于：用于提高大豆的抗病性能；所述大豆Glyma.04G016500.1抗病基因cDNA核苷酸的序列如SEQ ID NO：1所述。/n

【技术特征摘要】
1.大豆Glyma.04G016500.1抗病基因的用途，其特征在于：用于提高大豆的抗病性能；所述大豆Glyma.04G016500.1抗病基因cDNA核苷酸的序列如SEQIDNO：1所述。


2.根据权利要求1所述的大豆Glyma.04G016500.1抗病...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建中，李俊梅，钟晨丽，
申请(专利权)人：浙江师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33