MHC多聚体的生产方法技术

本发明专利技术涉及通过使用温度介导的肽交换来产生负载有所需肽的MHC多聚体的快速、灵活和有效的方法。该方法可以同时并行用于不同的所需肽。在该方法中，使用条件性肽，该条件性肽在低温下形成稳定的肽‑MHC复合物，但在暴露于限定的提高的温度时会解离。所得的条件性MHC I复合物和多聚体能够负载选择的肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】MHC多聚体的生产方法专利技术背景免疫监视由结合细胞内肽用于呈递给CD8+T淋巴细胞的主要组织相容性I类(MHCI)复合物介导。这种区分自身和外来物的能力是适应性免疫的基础，且如果没有这样做可能导致自身免疫性疾病的发生。在生命中，人类不断受到病原体(例如病毒)的攻击。它们中的一些会建立终身感染，其中病毒以潜伏状态持续存在而不会引起症状，但偶尔会重新激活。引起复发性感染的这样的病毒中的一类是疱疹病毒1。通常，重新激活不会导致疾病，因为一旦识别出病毒抗原，感染就会被T细胞迅速清除。但是，在移植的情况下，当患者是免疫妥协的时，疱疹病毒(如巨细胞病毒(CMV)或埃巴病毒(EBV))的重新激活会导致严重的健康威胁2，3。因此，监测移植接受者中的T细胞数量以预测患者是否可能清除感染或是否需要干预是非常重要的。可以动用适应性免疫系统以使我们受益。在过去的十年中，旨在抑制或增强细胞免疫反应的免疫疗法已经取得了巨大的进步。包括针对CTLA-4和PD-1/PD-L1的抗体在内的几种免疫检查点抑制剂已被批准用于临床，并且在包括黑色素瘤、非小细胞肺癌和肾细胞癌在内的各种癌症的治本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于生产MHC分子的方法，所述方法包括：/na.在降低的温度下提供MHC分子，所述MHC分子在所述MHC分子的肽结合槽中结合有模板肽，所述模板肽在升高的温度下与所述MHC分子解离，其中所述MHC分子优选是人白细胞抗原-A(HLA-A)分子；/nb.将所述温度改变至升高的温度，由此使所述模板肽与所述MHC分子解离；和/nc.在允许所需肽结合至所述MHC分子的肽结合槽的条件下，使所述MHC分子在所述升高的温度下与所述所需肽接触以结合至所述MHC分子的肽结合槽。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171026 NL 20198141.用于生产MHC分子的方法，所述方法包括：
a.在降低的温度下提供MHC分子，所述MHC分子在所述MHC分子的肽结合槽中结合有模板肽，所述模板肽在升高的温度下与所述MHC分子解离，其中所述MHC分子优选是人白细胞抗原-A(HLA-A)分子；
b.将所述温度改变至升高的温度，由此使所述模板肽与所述MHC分子解离；和
c.在允许所需肽结合至所述MHC分子的肽结合槽的条件下，使所述MHC分子在所述升高的温度下与所述所需肽接触以结合至所述MHC分子的肽结合槽。


2.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述降低的温度是10℃或更低的温度和/或所述升高的温度是15℃或更高的温度，优选地，其中所述降低的温度是4℃或更低的温度，和/或其中所述升高的温度在20℃至40℃之间并且包括20℃和40℃。


3.前述权利要求中任一项所述的方法，其中，b)和c)同时进行。


4.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所需肽以超过结合有模板肽的所述MHC分子的量的过量提供，优选其中所述过量是至少约5倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、200倍的摩尔过量。


5.前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤a)中的所述MHC分子作为单体、作为包含至少两个MHC分子的复合物或作为多聚体提供。


6.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述MHC分子是包含所述MHC分子和至少一个其他分子，优选至少一个其他蛋白质，优选至少一个其他MHC分子的复合物的一部分。


7.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述MHC分子是人HLA-A分子，并且其中所述HLA-A分子优选选自HLA-A*02和HLA-A*02：01。


8.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述模板肽通过取代至少一个、两个或更多个锚定残基，优选一个或两个锚定残基而获得。


9.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述模板肽是包含以下的多肽：
a.如SEQIDNO：1(IAKEPVHGV)、SEQIDNO：2(IAKEPVHGA)或SEQIDNO：3(FAPGNAPAL)中所示的多肽序列；或者
b.具有1、2、3或4个氨基酸取代、缺失或插入的如SEQIDNO：1或SEQIDNO：2或SEQIDNO：3中所示的多肽序列。


10.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法针对结合至所述MHC分子的肽结合槽的不同所需肽并行地执行。


11.前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤a)中提供的所述MHC分子在所述降低的温度下产生并负载所述模板肽。


12.前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述MHC分子的肽结合槽中结合有模板肽的MHC分子是通过在10度或更低的温度下在所述模板肽存在下将MHC分子重折叠而提供的。


13.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法是无细胞的。


14.前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括检测所述所需肽与所述MHC分子的结合，优选其中所述结合是通过检测与所述所需肽缔合的标记物来检测的，优选其中所述所需肽包含所述标记物。


15.前述权利要求中任一项所述的方法，用于在测试或参考化合物的存在下确定所述所需肽的结合。


16.可通过前述权利要求中任一项所述的方法获得的MHC分子。


17.组合物，其包含权利要求16所述的MHC分子和T细胞，优选CD8+T细胞。


18....

【专利技术属性】
技术研发人员：雅克·雅各布斯·内夫斯，赫伊伯·奥瓦，马乌戈热塔·安娜·加斯特卡，乔莲·约翰娜·卢伊马斯特罗，
申请(专利权)人：莱顿大学医学中心附属莱顿教学医院，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL