HLA-G转录物和同种型及它们的用途制造技术

本发明专利技术涉及HLA‑G分子及其治疗用途的领域。本发明专利技术涉及新的HLA‑G同种型，即衍生自HLA‑G基因的新的RNA转录物和蛋白质，包含其的药物组合物，以及这些转录物的特异性引物和这些蛋白质的特异性抗体。本发明专利技术进一步涉及这些分子的诊断或治疗用途。

HLA-G transcripts and homologs and their uses

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HLA-G转录物和同种型及它们的用途
本专利技术涉及HLA-G分子及其治疗用途的领域。本专利技术涉及新的HLA-G同种型，即衍生自HLA-G基因的新的RNA转录物和蛋白质，包含其的药物组合物，以及这些转录物的特异性引物和这些蛋白质的特异性抗体。本专利技术进一步涉及这些分子的诊断或治疗用途。
技术介绍
HLA-G是具有有效免疫调节活性的HLAIb类分子，其在需要调节免疫反应以避免同种异体移植识别(即母胎界面或移植患者)的生理条件下表达。HLA-G首先被描述在维持妊娠中起关键作用[1]，并发现其在绒毛外细胞滋养层细胞中的胎儿母体界面中组成性表达。HLA-G具有耐受原(tolerogenic)作用，通过与T或B淋巴细胞、NK细胞或多形核细胞相互作用来调节适应性免疫和天然免疫。这种作用是通过α3结构域将完全可溶的同种型和膜结合的同种型直接与抑制性受体结合而介导的。实际上，髓系的B和T淋巴细胞、NK细胞和单核细胞表达免疫球蛋白质样转录物ILT2(CD85j，ILIRB1)[15]；单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞表达ILT-4(CD85d，LILRB2)[16]。杀伤细胞免疫球蛋白质样受体(KIR2DL4/p49)对HLA-G具有特异性，并由蜕膜NK细胞表达。与其他抑制性受体不同，其也可以介导激活[17，18]。另外，可溶性HLA-G通过CD8样经典的I类可溶性分子触发T细胞和NK细胞的凋亡[19]。在正常情况下，HLA-G的表达仅限于一些组织，而在病理情况下则强烈增加。实际上，HLA-G在包括实体瘤和血液肿瘤的几种病理条件下高水平重新表达。已在不同的人类实体瘤和血液肿瘤中检测到膜结合的HLA-G和可溶性HLA-G的过表达，并且可能代表了肿瘤细胞通过抑制NK和T细胞介导的裂解而逃避免疫系统控制的机制。特别是，在最常见的人肾恶性肿瘤之一[4]的透明细胞肾细胞癌(ccRCC)中已报道了HLA-G表达的高发生率[2，3]。另外，在鼠模型中已经证明了HLA-G作为使得肿瘤能够逃逸的免疫检查点的作用[5，6]。另一方面，HLA-G介导的对免疫反应的控制的丧失可能导致由免疫效应细胞的不受控制的激活引起的自身免疫性/炎性疾病的发作。最近几年的一些研究表明，HLA-G在控制自身免疫性/炎性疾病(诸如多发性硬化症(MS)、克罗恩病(CD)、牛皮癣、天疱疮、乳糜泻，系统性红斑狼疮(SLE)、哮喘、青少年特发性关节炎，和类风湿关节炎(RA))中起着重要的作用[23]。已鉴定出7种HLA-G同种型，其中4种是膜结合的(HLA-G1、HLA-G2、HLA-G3和HLA-G4)，而3种是可溶的(HLA-G5、HLA-G6和HLA-G7)。所有这些HLA-G均在其N末端包括肽信号。HLA-G1蛋白质同种型包括三个外部结构域(α1、α2和α3)、跨膜区和胞质结构域。HLA-G2蛋白质同种型不包括α2结构域(即α1和α3结构域是直接连接的)，其后是跨膜结构域和胞质结构域。HLA-G3蛋白质同种型缺少α2和α3结构域，即，它包括直接连接到跨膜结构域和胞质结构域的α1结构域。HLA-G4蛋白质同种型缺少α3结构域，即，它包括α1结构域、α2结构域、跨膜结构域和胞质结构域。可溶性HLA-G同种型均缺少跨膜结构域和胞质结构域。有趣的是，所有这些可溶性HLA-G蛋白质都包含任何膜结合的HLA-G中不存在的其他氨基酸，这是由于一个内含子的保留所致。更具体地：-HLA-G5蛋白质同种型包含α1、α2和α3结构域，以及由内含子4编码的21个氨基酸残基的额外C末端肽序列(由于转录剪接和RNA成熟后内含子4保留)；-HLA-G6蛋白质同种型对应于没有α2的HLA-G5，即HLA-G6包含α1和α3结构域，以及由内含子4编码的21个氨基酸残基的额外C末端肽序列(由于转录剪接和RNA成熟后内含子4保留)；-HLA-G7蛋白质同种型仅包含α1结构域，以及由内含子2编码的2个额外C末端的氨基酸残基(由于转录剪接和RNA成熟后内含子2保留)；报导的所有七种HLA-G同种型均来自一个初级转录物的选择性(alternative)剪接，具有相似的翻译起始位点，尚未提出独特的功能作用。到目前为止，HLA-G基因外显子的编号基于IMGT/HLA数据库(在本文中也称为IMGT/HLA命名法)，并被描述为包含8个外显子、7个内含子和3'非翻译端，分别对应以下结构域：外显子1：信号序列、外显子2：α1细胞外结构域、外显子3：α2，细胞外结构域、外显子4：α3细胞外结构域、外显子5：跨膜结构域、外显子6：胞质结构域I、外显子7：胞质结构域II(非翻译的)、外显子8：胞质结构域III(非翻译的)以及3'非翻译区。但是，根据Ensembl数据库，HLA-G基因可能在5'端具有IMGT/HLA数据库中所没有的一个补充外显子。另外，由于外显子7对应于非翻译的结构域，因此将其视为外显子本身是否有意义这一问题仍未解决。因此，该补充外显子的存在将更改5'非翻译区(UTR)的大小和启动子的位置。通过修饰蛋白质和/或miRNA的结合，这可以改变基因的调节。在小鼠模型中出现了基于合成HLA-G衍生的蛋白质或抗体的治疗方法，并且这些新的治疗工具可能被证明可用于治疗癌症、传染病、自身免疫性/炎性疾病，和同种异体移植排斥。此外，已经显示出HLA-G1的可溶形式(也称为HLA-G5)抑制血管生成，并且已提出将其用作预防病理性新血管形成的治疗靶标[28]。因此，在这种情况下，需要基于HLA-G分子的新治疗方法。
技术实现思路
专利技术人发现了HLA-G基因的新转录物，最有可能是由于选择性剪接。专利技术人已证明存在HLA-G转录物，该HLA-G转录物在5'末端具有对应于外显子1(根据IMGT/HLA命名法)上游区域的补充序列。有趣的是，这些转录物(本文中称为长HLA-G转录物)与先前已知的HLA-G转录物相比也具有106bp的缺失，并具有可用作翻译起始起点的ATG[29]。这些结果证实了这样的假设，即基于Ensembl数据库使用新的命名法是有意义的。因此，除非另有说明，否则下文将使用Ensembl命名法。在这种新的命名法中(如图1所示)，第一外显子位于5'末端的补充序列内，而先前的外显子7已被取消。因此，外显子编号因而被修改：外显子1：对应于新发现的序列；外显子2：信号序列；外显子3：α1细胞外结构域；外显子4：α2细胞外结构域；外显子5：α3细胞外结构域；外显子6：跨膜结构域；外显子7：胞质结构域I；外显子8：胞质结构域III(非翻译的)以及3'非翻译区(与IMGT/HLA命名法相比，外显子1重命名为外显子2，外显子2重命名为外显子3等)。此外，专利技术人发现了以前从未报道过的保留内含子1、4、6或7的新HLA-G转录物，以及同时保留两个内含子(特别是内含子3和4或者内含子3和5)的转录物。专利技术人进一步表明，选择性剪接使得可能存在新的翻译起始密码子，该新的翻译起始密码子不同于位于外显子2中的翻译起始密码子，迄今为止，外显子2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经分离的HLA-G蛋白质，其序列具有以下特征中的至少一个：/n-所述经分离的HLA-G蛋白质在其N末端部分包括五个氨基酸残基MKTPR，即SEQ ID NO:1，和/或；/n-所述经分离的HLA-G蛋白质没有α1结构域，也就是说没有序列SEQ ID NO:3，和/或；/n-所述经分离的HLA-G蛋白质没有跨膜/胞质结构域，也就是说没有序列SEQ ID NO:6，条件是所述蛋白质由序列SEQ ID NO:90、91和92中任一序列组成，和/或；/n-所述经分离的HLA-G蛋白质包括由保留一个内含子的至少一部分而产生的氨基酸，条件是所述内含子不是内含子2或内含子4。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170724 EP 17305986.61.一种经分离的HLA-G蛋白质，其序列具有以下特征中的至少一个：
-所述经分离的HLA-G蛋白质在其N末端部分包括五个氨基酸残基MKTPR，即SEQIDNO:1，和/或；
-所述经分离的HLA-G蛋白质没有α1结构域，也就是说没有序列SEQIDNO:3，和/或；
-所述经分离的HLA-G蛋白质没有跨膜/胞质结构域，也就是说没有序列SEQIDNO:6，条件是所述蛋白质由序列SEQIDNO:90、91和92中任一序列组成，和/或；
-所述经分离的HLA-G蛋白质包括由保留一个内含子的至少一部分而产生的氨基酸，条件是所述内含子不是内含子2或内含子4。


2.根据权利要求1所述的经分离的HLA-G蛋白质，其中，其序列包括选自SEQIDNO:7至SEQIDNO:31组成的组的序列或由选自SEQIDNO:7至SEQIDNO:31组成的组的序列组成。


3.根据权利要求1所述的经分离的HLA-G蛋白质，其中，所述的经分离的HLA-G蛋白质在其N末端部分包括5个氨基酸残基MKTPR。


4.根据权利要求1所述的经分离的HLA-G蛋白质，其中，其序列包括选自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16组成的组的序列或由选自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、14、15、16组成的组的序列组成。


5.根据权利要求1所述的经分离的HLA-G蛋白质，其中，其序列包括选自SEQIDNO:9、10、11、12、13、14、17、18、19、20、22、23、24、25、26、27、29、30、31组成的组的序列或由选自SEQIDNO:9、10、11、12、13、14、17、18、19、20、22、23、24、25、26、27、29、30、31组成的组的序列组成。


6.根据权利要求1所述的经分离的HLA-G蛋白质，其中，其序列包括选自SEQIDNO:8、10、12、14、16、18、20、21、23、25、27、28、30组成的组的序列或由选自SEQIDNO:8、10、12、14、16、18、20、21、23、25、27、28、30组...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·D·卡罗塞拉，戴安娜·特罗尼克勒·鲁，简菲利普·戴斯里斯，杰罗姆·韦瑞尼，弗朗索瓦·帝格朗尚，N·鲁阿弗雷斯，乔尔·勒马约特，
申请(专利权)人：原子能和替代能源委员会，法国公立援助医院，
类型：发明
国别省市：法国;FR