一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母制造技术

本发明专利技术公开了一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，所述毕赤酵母包括如SEQ ID No.1所示DNA序列的重组猪α1干扰素基因片段和如SEQ ID No.2所示DNA序列的蛋白质二硫键异构酶PDI基因片段；通过在毕赤酵母中整合多拷贝重组猪α1干扰素基因片段和插入表达酵母蛋白质二硫键异构酶的DNA片段，辅助蛋白质在酵母细胞内折叠，减少干扰素在细胞内堆积，提高猪α1干扰素分泌到细胞外的量，猪干扰素α1的表达量达到了1.43g/L,较只整合干扰素表达盒的菌株提高了40％以上，显著提高了菌体发酵生产猪α1干扰素的水平，使高拷贝菌株的生产性能得到有效发挥。

【技术实现步骤摘要】
一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母
本专利技术涉及生物技术和基因工程
，特别涉及一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母。
技术介绍
干扰素(Interferon)根据蛋白质的来源、结构及其受体不同可分为I型、II型和III型，每种类型又包含不同的亚型。目前只有I型中的α和β干扰素以及II型中的γ干扰素被批准应用于预防和治疗病毒感染。猪的α1干扰素编码基因(PoIFNα1)是1986年由法国科学家首次从猪的基因组文库中分离得到的(LefevreandBonnardiere,1986)。该基因的完整开放阅读框编码一个长为189个氨基酸的蛋白质，包含一个由23个氨基酸残基组成的信号肽序列(1-23位氨基酸)和由166个氨基酸残基(24-189位氨基酸)组成的成熟蛋白质。成熟的猪干扰素α1由166个氨基酸残基组成，其二级结构以α-螺旋为主。PoIFNα1含有5个半胱氨酸残基，其中Cys1-Cys98，Cys29-Cys138形成两个二硫键。干扰素是动物机体应对病毒等病原体入侵时较快产生的一种重要细胞因子，干扰素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述毕赤酵母包括如SEQ ID No.1所示DNA序列的重组猪α1干扰素基因片段和如SEQ ID No.2所示DNA序列的蛋白质二硫键异构酶PDI基因片段。/n

【技术特征摘要】
1.一种通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述毕赤酵母包括如SEQIDNo.1所示DNA序列的重组猪α1干扰素基因片段和如SEQIDNo.2所示DNA序列的蛋白质二硫键异构酶PDI基因片段。


2.根据权利要求1所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述毕赤酵母分别经过猪α1干扰素表达载体pPICZαA-pIFNa1和辅助分泌表达载体pPIC3.5K-PDI转化。


3.根据权利要求2所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述转化后得到的菌株分别通过博来霉素、G418进行抗生素浓度梯度高拷贝筛选。


4.根据权利要求3所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述博来霉素的浓度梯度为0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.2mg/ml、1.6mg/ml；所述G418的浓度梯度为0.4mg/ml、0.8mg/ml。


5.根据权利要求1所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于，所述重组猪α1干扰素基因片段的插入位点为醇氧化酶基因座；所述蛋白二硫键异构酶PDI基因片段的插入位点为组氨酸合成酶基因座。


6.根据权利要求2所述的通过辅助分泌高效表达重组猪α1干扰素的毕赤酵母，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，付建华，张志清，
申请(专利权)人：广东海纳川生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44