一种异源二聚体蛇毒蛋白的制备方法技术

本发明专利技术提供了重组质粒、高表达异源二聚体蛇毒蛋白抗血小板溶栓素的细胞株及高表达抗血小板溶栓素的方法。本发明专利技术所述方法抗血小板溶栓素的表达量超过10mg/L，通过两步纯化，纯度可达95％以上。实验表明重组抗血小板溶栓素具有生物学活性。

【技术实现步骤摘要】
一种异源二聚体蛇毒蛋白的制备方法
本专利技术涉及重组蛋白的制备方法，特别涉及血栓治疗的重组蛋白药物异源二聚体蛇毒蛋白的制备方法。
技术介绍
心脑血管疾病尤其是血栓引起的脑梗塞和心机梗塞严重威胁着人类健康，影响患者的生存质量。这类疾病是目前世界上的第三大致死因素，不仅在急性发作期给病人的生命带来极大的威胁，而且由于极易发生的愈后不良，导致物力、财力的巨大耗费。因此，对这类疾病寻找新的安全有效的药物迫在眉睫，而蛇毒对凝血系统的作用越来越受到人们的重视，蛇毒中某些成分是治疗上述疾病的有效药物。尖吻蝮蛇蛇毒抗血小板溶栓素是在中国科大生命学院多年对蛇毒蛋白组分分离、纯化和活性研究的基础上发现的一种C型凝集素样蛋白，命名为Agkisacutacin，中文名为抗血小板溶栓素。Agkisacutacin为异源二聚体，两个亚基表观分子量非常接近，均在14-15kDa左右。经MALDI-TOFMS精确测定了Agkisacucetin的分子量为30kDa。通过氨基酸N端序列测定、LC-MS和Agkisacucetin蛋白的晶体结构等方法，最终得到Agkisa本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转化体，包括：如图1所示的质粒pPIC9K-A，其中Agkisacutacin A链基因序列如SEQ ID NO.1所示；和如图2所示的质粒pUCZ-B，其中Agkisacutacin B链基因序列如SEQ IDNO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种转化体，包括：如图1所示的质粒pPIC9K-A，其中AgkisacutacinA链基因序列如SEQIDNO.1所示；和如图2所示的质粒pUCZ-B，其中AgkisacutacinB链基因序列如SEQIDNO.2所示。


2.根据权利要求1所述的转化体，其特征在于，表达重组异源二聚体蛇毒蛋白，所述异源二聚体蛇毒蛋白由A链、B链两条肽链组成，其中，A链氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，B链氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。


3.根据权利要求2所述的转化体，其特征在于，为毕赤酵母菌株。


4.根据权利要求3所述的转化体，其特征在于，其保藏编号为CCTCCNo.M2016358，分类命名为巴斯德毕赤酵母GS115。


5.权利要求1-4任一项所述转化体在制备血栓治疗药物中的用途。


6.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴向荣，李小羿，钱芳，
申请(专利权)人：兆科药业合肥有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34