利用木糖生产原人参二醇的重组解脂耶氏酵母菌株及构建方法和应用技术

本发明专利技术利用木糖生产原人参二醇的重组解脂耶氏酵母菌株及构建方法和应用；以解脂耶氏酵母ATCC 201249为出发菌株，导入了优化的木糖还原酶XYL1、木糖醇脱氢酶XYL2以及过表达的内源的木酮糖激酶XKS表达盒，得重组菌株1；向重组菌1导入达玛烯二醇合酶基因DS，原人参二醇合酶基因PPDS及细胞色素P450还原酶基因ATR1，得重组菌株2；向重组菌株2导入截断的甲羟戊酸途径中编码烟酰胺腺嘌呤二核苷酸‑羟甲基戊二酰辅酶A还原酶的基因tHMG1、鲨烯合酶的基因erg9和编码法尼烯焦磷酸合酶的erg20，得到重组菌株3。利用重组解脂耶氏酵母菌用木糖生产原人参二醇，摇瓶产量达到80.88mg/L。

【技术实现步骤摘要】
利用木糖生产原人参二醇的重组解脂耶氏酵母菌株及构建方法和应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及利用木糖生产原人参二醇的重组解脂耶氏酵母菌株及构建方法和应用。
技术介绍
原人参二醇(Protopanaxadiol，缩写为PPD)是人参、红参等中药中的重要活性成分,是达玛烷型人参皂苷的前体。现代医学研究表明，PPD具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎症等生物活性，在冠心病，抗抑郁等方面也有出色的疗效。由于人参中的PPD含量极少，不到人参干重的0.05％，因此，PPD的生产和制备主要来自于PPD型总皂苷的糖基水解、酶解获得，然而这类方法存在以下几个缺点。1)原料短缺。人参生长周期长，且易受到农药残留污染，导致产品品质无法满足国内外市场需求。2)人参提取物成分复杂，分离纯化成本较高。3)制备过程往往伴随着对环境的高污染。因此，利用合成生物学的方法，通过微生物发酵生产人参皂苷将从根本上解决上述问题。解脂耶氏酵母作为一种GRAS(generallyregardedassafe)非常规酵母，已有研究表明其适合作为萜类化合物生产底盘细胞。木糖是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用木糖生产原人参二醇的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法；其特征是包括如下步骤：/n(1)将优化的木糖代谢基因木糖还原酶基因XYL1表达盒和木糖醇脱氢酶基因XYL2表达盒，以及内源的木酮糖激酶基因XKS表达盒，同时导入解脂耶氏酵母，得到重组菌1；/n木糖还原酶基因XYL1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；/n木糖醇脱氢酶基因XYL2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；/n木酮糖激酶基因XKS的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。/n(2)向所述重组解脂耶氏酵母菌1中导入优化的达玛烯二醇合酶编码基因DS表达盒、优化的原人参二醇合酶编码基因PPDS表达盒和优化的细胞色素-NA...

【技术特征摘要】
1.一种利用木糖生产原人参二醇的重组解脂耶氏酵母菌的构建方法；其特征是包括如下步骤：
(1)将优化的木糖代谢基因木糖还原酶基因XYL1表达盒和木糖醇脱氢酶基因XYL2表达盒，以及内源的木酮糖激酶基因XKS表达盒，同时导入解脂耶氏酵母，得到重组菌1；
木糖还原酶基因XYL1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；
木糖醇脱氢酶基因XYL2的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；
木酮糖激酶基因XKS的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。
(2)向所述重组解脂耶氏酵母菌1中导入优化的达玛烯二醇合酶编码基因DS表达盒、优化的原人参二醇合酶编码基因PPDS表达盒和优化的细胞色素-NADPH-还原酶1的编码基因表达盒，得到重组解脂耶氏酵母菌2；
所述优化的达玛烯二醇合酶编码基因DS的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；
所述优化的原人参二醇合酶编码基因PPDS的核苷酸序列如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢文玉，张传波，武玉芬，鞠海燕，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12