一种谷氨酸生产菌株及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种谷氨酸生产菌株及其制备方法与应用，属于生物工程领域。本发明专利技术通过谷氨酸棒杆菌A（保藏编号CGMCC NO.1.10760）和谷氨酸棒杆菌B（保藏编号CGMCC NO.1.1735）之间的原生质经融合、突变与再生最后获得FM19‑007菌株（CGMCC No.18678）。该菌种特征是在显微镜下观察呈短杆状，无芽孢，无鞭毛,革兰氏染色呈阳性，细胞大小为0.7‑1×1.2‑3μm，a‑酮戊二酸脱氢酶丧失；谷氨酸脱氢酶活性强；不利用谷氨酸，解除谷氨酸反馈抑制，具有向胞外分泌谷氨酸的能力；发酵过程中衰亡期发生明显的形态变化同时发生细胞膜通透性变化（形成细胞渗漏）。以此突变菌株发酵生产谷氨酸，谷氨酸产率22%，产量提高51.72%，谷氨酸产量显著提高。

【技术实现步骤摘要】
一种谷氨酸生产菌株及其制备方法与应用
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种谷氨酸生产菌株及其制备方法与应用。
技术介绍
谷氨酸菌发酵分为四个时期：适应期、对数增长期、产酸期（稳定期）、衰亡期，其中衰亡期基本不产酸。谷氨酸菌分泌的谷氨酸在胞内，通过细胞膜分泌到胞外，为了获得胞内谷氨酸，需要外界干扰分泌胞外。目前工业上应用的谷氨酸产生菌有谷氨酸棒状杆菌、乳糖发酵短杆菌、散枝短杆菌、黄色短杆菌、噬氨短杆菌等。我国常用的菌种有北京棒状杆菌、纯齿棒状杆菌等。目前谷氨酸生产菌种的育种思路主要有：一是可通过诱变选育L-谷氨酸的结构类似物抗性突变株和营养缺陷型的回复突变株，以解除自身的反馈抑制和反馈阻遏，增大L-谷氨酸积累量，可以选育酮基丙二酸抗性突变株、谷氨酸氧肟酸盐抗突变株、谷氨酰胺抗性突变株等；二是增加L-谷氨酸的前体物的合成量，可通过如选育抗氟乙酸、氟化钠、氮丝氨酸、氟柠檬酸等突变株，以及强化CO2固定反应突变株（选育以琥珀酸或苹果酸为唯一碳源，生长良好的菌株、选育氟丙酮酸敏感性突变株及选育丙酮酸缺陷、天冬氨酸缺陷突变株本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种谷氨酸生产菌株，其特征在于：该菌株是谷氨酸棒杆菌（

【技术特征摘要】
1.一种谷氨酸生产菌株，其特征在于：该菌株是谷氨酸棒杆菌（Corynebacteriumglutamicum）FM19-007菌株，保藏编号为CGMCCNo.18678。


2.一种如权利要求1所述得谷氨酸生产菌株的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）制备原生质体：采用青霉素预处理保藏编号为CGMCCNO.1.10760的谷氨酸棒杆菌A和保藏编号为CGMCCNO.1.1735的谷氨酸棒杆菌B的种子液，作用4h后，向种子液中添加溶菌酶和麦胚凝集素，于34℃下作用12h，得原生质体悬液；
（2）原生质体融合：取步骤（1）中谷氨酸棒杆菌A（保藏编号CGMCCNO.1.10760）和谷氨酸棒杆菌B（保藏编号CGMCCNO.1.1735）的原生质体悬液混合，离心，弃去上清液，加入PEG6000溶液和新生磷酸钙溶液，混合均匀，37℃保温20min，得融合后的原生质体悬液；
（3）原生质体再生：用高渗缓冲液稀释步骤（2）中制得的融合后的原生质体悬液，将其涂布到选择性再生平板，34℃条件下培养观察，挑选24h后长出的单菌落保存LB斜面；
（4）对步骤（3）获得的菌株进行辐照，辐照剂量水平为80mSv/h，辐照10S，得FM19-007菌株。


3.根据权利要求2所述的一种如权利要求1所述得谷氨酸生产菌株的培育方法，其特征在于，所述步骤（1）中，向种子液中加入青霉素的量为1U/mL，即每1mL种子液中加入青霉素的量为1U。


4.根据权利要求2所述的一种如权利要求1所述得谷氨酸生产菌株的培育方...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄继红，侯银臣，魏兆军，惠明，廖爱美，杜丽平，杨玉岭，周靖波，雷红涛，赵黎明，田海龙，赵祎，刘娜，吕行，古绍彬，冯军伟，纪小国，
申请(专利权)人：河南工业大学，河南科谱特医药科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41