一种鸭短喙侏儒综合征蛋黄抗体的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种鸭短喙侏儒综合征蛋黄抗体的制备方法，包括如下步骤：1)、用鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗免疫产蛋鸡，每隔14天加强免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取样检测，琼扩效价达到1:32以上，留蛋使用；2)、进行蛋清蛋黄分离；3)、分离蛋黄加入7倍的去离子水稀释、搅拌均匀；4)、调节混合后蛋黄液pH值到4.5，蛋黄溶液降温到4℃；5)、离心，上清液即为提纯后的卵黄抗体液体。本发明专利技术提取工艺制备用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体，生产时间短，工艺简单，大大降低了人工成本和时间成本。克服了常用提取方法酸沉、辛酸除脂法的生产时间长(约48h‑72h)，工艺复杂，成本高的缺点。

Preparation of egg yolk antibody against Duck short beak dwarf syndrome

【技术实现步骤摘要】
一种鸭短喙侏儒综合征蛋黄抗体的制备方法
本专利技术涉及生物制品制备领域；尤其涉及一种鸭短喙侏儒综合征蛋黄抗体的制备方法。
技术介绍
自2014年以来，一种由新型鹅源鸭源细小病毒(novelduckparvovirus，NDPV)引起的鸭病在国内部分鸭群中不断发生。病鸭主要表现为鸭喙萎缩、舌头肿胀脱出、跛行瘫痪，生长迟缓和侏儒症，根据发病临床特征将该病命名为鸭短喙-侏儒综合征(duckshortbeakanddwarfismsyndrome，DSBDS)。2014年以前，未见该病大面积发生与流行的报道，2014年后全国多地发生，并迅速蔓延，尤其是肉鸭养殖比较密集的地区，给我国养鸭业造成严重的经济损失，现已引起高度的关注。该病可发生于多种肉鸭，如樱桃谷鸭、半番鸭、番鸭、麻鸭、白鸭及褐莱鸭等。发病日龄在7～40日龄，日龄越小，发病率越高。发病率在5％～20％之间，严重者达40％左右，死亡率低于10％。该病既可垂直感染也可水平传播。卵黄抗体(Immunoglobulinofyolk,IgY):通过免疫接种产蛋母鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体；当卵细胞分泌进入输卵管时，流经输卵管的血液中含有的特异性抗体(主要是IgA和IgM)进入卵清中，形成卵清抗体。血清抗体移行进入卵细胞是受体作用的结果，因而血清抗体可在卵细胞中大量蓄积，浓度高于血液中的抗体。与卵黄抗体相比，卵细胞在输卵管中移行的时间较短，因而卵清抗体含量极微。卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种针对新发的鸭短喙侏儒综合征进行预防、治疗的精制卵黄抗体的制备方法。这种卵黄抗体的制备方法比传统酸沉、辛酸除脂需要时间更短，可更快速、更经济的获取卵黄抗体。针对鸭短喙侏儒综合征的卵黄抗体可有效补充市场新发疾病相关治疗、预防药物的空白。本专利技术采用的技术方案为：一种用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体的制备方法，包括如下步骤：1)、用鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗免疫产蛋鸡，每隔14天加强免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取样检测，琼扩效价达到1:32以上，留蛋使用；2)、进行蛋清蛋黄分离；3)、分离蛋黄加入7倍的去离子水稀释、搅拌均匀；4)、调节混合后蛋黄液pH值到4.5，蛋黄溶液降温到4℃；5)、离心，上清液即为提纯后的卵黄抗体液体。优选地，所述鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗的制备工艺为：将SBDS毒株用鸭胚成纤维细胞扩增，培养，然后浓缩，保证浓缩后病毒毒价均为1X107.0TCID50以上，甲醛灭活，即为所需抗原(免疫用水相)；利用灭活疫苗一般制备工艺进行乳化，即得到鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗。优选地，所述离心采用管式离心机，离心机的转速为8000r/min。优选地，步骤4)采用1mol/L的HCl调节。本专利技术所具有的有益效果：本专利技术采用更简便的等电点提取工艺制备用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体，生产时间短，工艺简单，大大降低了人工成本和时间成本。克服了常用提取方法酸沉、辛酸除脂法的生产时间长(约48h-72h)，工艺复杂，成本高的缺点。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不限定本专利技术的保护范围。实施例1一种用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体的制备方法，包括如下步骤：1)、将SBDS毒株用鸭胚成纤维细胞扩增，培养，然后浓缩，保证浓缩后病毒毒价均为1X107.0TCID50以上，甲醛灭活，即为所需抗原(免疫用水相)；利用灭活疫苗一般制备工艺进行乳化，即得到鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗；2)、用鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗免疫产蛋鸡，每隔14天加强免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取样检测，琼扩效价达到1:32以上，留蛋使用；3)、进行蛋清蛋黄分离；分离蛋黄加入7倍的去离子水稀释、搅拌均匀；用1mol/L的HCl调节混合后蛋黄液pH值到4.5，蛋黄溶液降温到4℃；用管式离心机8000r/min离心，上清液即为提纯后的卵黄抗体液体。对比例11)、将SBDS毒株用鸭胚成纤维细胞扩增，培养，然后浓缩，保证浓缩后病毒毒价均为1X107.0TCID50以上，甲醛灭活，即为所需抗原(免疫用水相)；利用灭活疫苗一般制备工艺进行乳化，即得到鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗；2)、用鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗免疫产蛋鸡，每隔14天加强免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取样检测，琼扩效价达到1:32以上，留蛋使用；3)、进行蛋清蛋黄分离；分离蛋黄加入1倍去离子水，搅拌均匀，按3倍体积加入pH5.2的醋酸盐缓冲溶液，混合蛋黄溶液降温到4℃，4℃保存24小时；24小时后吸取上清液，上清液升温到30℃，按终浓度1％加入正辛酸，搅拌均匀，搅拌均匀后停止升温，室温下静止24小时；吸取上层清液，上层清液即为提纯后的卵黄抗体液体。实施例1与对比例1的卵黄抗体产品进行比较：提取方法产量性状效价工艺时间对比例120ml/枚淡黄色澄明液体1:3260h实施例180ml/枚淡黄色澄明液体1:3212h实施例2将实施例1获得的卵黄抗体进行安全性试验、效力试验。2.1安全性试验取非免疫3日龄雏鸭10只，肌肉分点注射实施例1卵黄抗体2ml。观察10天。10天内雏鸭全部健活。2.2效力试验取非免疫3日龄雏鸭40只，随机分成4组，10只每组。第1组为健康对照组，不注射任何药品，隔离饲养；第2组肌肉注射实施例1卵黄抗体1ml/只；第3组注射对比例1卵黄抗体1ml/只；第4组注射生理盐水1ml/只。注射后第12小时第2,3,4组每只注射SBDS病毒100LD50。观察10天。通过实验可以看出：本专利技术卵黄抗体的提取工艺相较于现有工艺(传统的酸沉、辛酸除脂方法)更简单、快速，提取后卵黄抗体使用效果与现有工艺相同。但本专利技术提取工艺生产出卵黄抗体量更多，时间更短，有效节省工艺时间，降低成本。且本专利技术提取过程中，采用离心工艺，离心后可有效提高产品稳定性，与沉淀后制成冻干粉又有明显提升，可保留液体制剂时对抗体稳定性的要求。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：/n1)、用鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗免疫产蛋鸡，每隔14天加强免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取样检测，琼扩效价达到1:32以上，留蛋使用；/n2)、进行蛋清蛋黄分离；/n3)、分离蛋黄加入7倍的去离子水稀释、搅拌均匀；/n4)、调节混合后蛋黄液pH值到4.5，蛋黄溶液降温到4℃；/n5)、离心，上清液即为提纯后的卵黄抗体液体。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)、用鸭短喙侏儒综合征灭活疫苗免疫产蛋鸡，每隔14天加强免疫一次，三次免疫后10天收集高免蛋，取样检测，琼扩效价达到1:32以上，留蛋使用；
2)、进行蛋清蛋黄分离；
3)、分离蛋黄加入7倍的去离子水稀释、搅拌均匀；
4)、调节混合后蛋黄液pH值到4.5，蛋黄溶液降温到4℃；
5)、离心，上清液即为提纯后的卵黄抗体液体。


2.根据权利要求1所述的一种用于鸭短喙侏儒综合征预防、治疗的卵黄抗体的制备方法，其特征在于：所述鸭短喙...

【专利技术属性】
技术研发人员：王宇鹏，程雪娇，杨雪，孙珊珊，李丽琴，宋秀梅，石青青，王嵩，
申请(专利权)人：天津市中升挑战生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12