一种病毒保存液及其制备方法技术

本申请涉及一种病毒保存液及其制备方法，涉及病毒检测领域，保存液原料按重量份包括以下组分：Hanks缓冲液50‑75份，三羟甲基氨基甲烷16‑35份，乙二胺四乙酸3‑6份，氯化钠6‑12份，胎牛血清8‑16份，抗生素添加剂6‑13份，血清防护剂2‑5份，水80‑103份。基于以上原料，并按照本申请的制备方法，即可得到本申请的病毒保存液；本申请可以有效提高保存液自身的抗菌性能，从而提高病毒的保存时间和完整性。

【技术实现步骤摘要】
一种病毒保存液及其制备方法
本申请涉及病毒检测的领域，尤其是涉及一种病毒保存液及其制备方法。
技术介绍
病毒是由一种核酸分子与蛋白质构成或仅由蛋白质构成，个体微小、结构简单，常见的流行传染病通常是RNA病毒，如流感病毒、艾滋病毒、甲流病毒。由于没有细胞结构，病毒自身不能复制，而是将基因侵入宿主细胞内，借助后者的复制系统复制新的病毒。病毒样本采集后，为了维持病毒样本的活性、延长样本中病毒存活时间，会将采样拭子放入保存液中保存、运输。现有公开号为CN111321123A的中国专利，公开了一种免核酸提取的病毒保存液，包含A组分和B组分，其中A组分包含：酸性缓冲液、吐温20和酸性蛋白酶；其中，酸性缓冲液的摩尔浓度为20mM-100mM，pH在1.0-5.0，吐温20的体积百分比为0.1％-2％，酸性蛋白酶的浓度为0.1-100mg/mL；B组分包含：中性或偏碱性缓冲液，其浓度为0.5-1M，pH为7.0-9.0。针对上述中的相关技术，专利技术人认为存在有以下缺陷：保存液在保存过程中，也会受到外界环境中的细菌污染，一旦保存液发生变质，会导致病毒稳定性下降。
技术实现思路
为了提高保存液自身的抗菌性能，本申请提供一种病毒保存液及其制备方法。第一方面，本申请提供一种病毒保存液，采用如下的技术方案：一种病毒保存液，原料按重量份包括以下组分：Hanks缓冲液50-75份，三羟甲基氨基甲烷16-35份，乙二胺四乙酸3-6份，氯化钠6-12份，胎牛血清8-16份，抗生素添加剂6-13份，血清防护剂2-5份，水80-103份。通过采取上述技术方案，Hanks缓冲液可以营造保存液的中性环境，有助于增加病毒的生存时间和感染稳定性，同时，三羟甲基氨基甲烷的加入则是作为核酸和蛋白质的溶剂；乙二胺四乙酸的加入可以作为保存液的抗凝剂，减少保存液的凝聚而影响对病毒的保存；氯化钠则是可以平衡病毒在保存液中的渗透压，从而可以提高病毒的保存时间；胎牛血清的加入，首先可以作为蛋白质稳定剂，可在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜，使其不易分解，保证病毒的完整性，除此之外，胎牛血清与抗生素添加剂相互配合，具有抗细菌和抗真菌的作用，可以提高保存液本身的抗菌性，减少保存液本体的损害，同时血清防护剂的加入，可以减少胎牛血清内毒素的产生，使得胎牛血清正常工作，从而进一步提高保存液自身的抗菌性能。优选的，原料按重量份包括以下组分：Hanks缓冲液62-69份，三羟甲基氨基甲烷24-29份，乙二胺四乙酸4-5份，氯化钠8-11份，胎牛血清9-12份，抗生素添加剂8-9份，血清防护剂3-5份，水95-100份。通过采取上述技术方案，对保存液中个组分的含量进行进一步的限定，从而可以使得各个组分之间达到更好的配合，进一步提高保存液的抗菌性能。优选的，原料按重量份包括以下组分：Hanks缓冲液66份，三羟甲基氨基甲烷26份，乙二胺四乙酸4份，氯化钠10份，胎牛血清11份，抗生素添加剂9份，血清防护剂4份，水100份。通过采取上述技术方案，对保存液中个组分的含量进行进一步的细化，从而可以使得各个组分之间达到最佳的配合，进一步提高保存液的抗菌性能。优选的，所述抗生素添加剂按重量份包括，青霉素12-25份，庆大霉素16-26份。通过采取上述技术方案，青霉素是抗菌素的一种，分子中含有青霉烷，可以能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用；庆大霉素则是能与细菌核糖体30s亚基结合，阻断细菌蛋白质合成，从而青霉素和庆大霉素的加入可以有效提高保存液自身的抗菌性能。优选的，所述血清防护剂按重量份包括以下组分：纳米活性炭5-9份，十二烷基硫酸钠11-19份，大豆卵磷脂8-12份。通过采取上述技术方案，胎牛血清的内毒素为脂多糖，主要位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上，胎牛血清与外界环境接触时间越久，内毒素的生成越多；纳米活性炭由于具有良好的作用，加入到保存液中，可以对空气中的灰尘等进行吸附，从而可以减少空气中灰尘对胎牛血清的影响；十二烷基硫酸钠则是可以提高纳米活性炭的分散性，从而使得纳米活性炭可以均匀地分布在保存液中；大豆卵磷脂作为细胞壁的成分之一，不仅可以对保存液提供营养物质，而且大豆卵磷脂可以与胎牛血清相似相容，使得大豆卵磷脂在胎牛血清的表面形成保护层，减少外界环境对胎牛血清的影响。优选的，所述血清防护剂按重量份还包括以下组分：木糖醇5-9份，己二醇3-6份。通过采取上述技术方案，大豆卵磷脂作为一种双亲性的物质，大豆卵磷脂的亲油基可以与胎牛血清相似相容，大豆卵磷脂的亲水基则是可以与木糖醇和己二醇的羟基作用，并且利用木糖醇和己二醇的成膜性，充分在胎牛血清的表面形成保护膜，减少胎牛血清内毒素的生成；同时己二醇具有良好的抗菌性，可以进一步提高保存液的抗菌性能。优选的，原料按重量份还包括以下组分：胰蛋白酶11-19份，肝素钙4-9份。通过采用上述技术方案，胰蛋白酶作为一种蛋白质水解酶，可以对保存液进行稀释，提高病毒在保存液中的完整性，同时可以起到杀菌作用，进一步提高保存液的抗菌性能；肝素钙可以提供一定的钙离子，从而维持胰蛋白酶的活性，进一步提高保存液的使用性能。第二方面，本申请提供一种病毒保存液的制备方法，采用如下的技术方案：一种病毒保存液的制备方法，包括以下步骤：将Hanks缓冲液、三羟甲基氨基甲烷和水混合均匀，然后加入乙二胺四乙酸、氯化钠、抗生素添加剂和血清防护剂混合均匀后，加入胎牛血清，混合均匀得到细胞保存液。通过采取上述技术方案，将各组分按顺序混合，即可得到病毒保存液，同时，本申请最后加入胎牛血清，从而可以进一步减少胎牛血清与外界环境的接触时间，进一步减少胎牛血清内堵塞的产生。优选的，包括以下步骤：将Hanks缓冲液、三羟甲基氨基甲烷和水混合均匀，然后加入乙二胺四乙酸、氯化钠、抗生素添加剂混合均匀得到第一混液；将第一混液加热至38-40℃，保温1-2分钟，加入胰蛋白酶和肝素钙，混合均匀后，加入血清防护剂混合均匀，最后加入胎牛血清，混合均匀得到细胞保存液。通过采用上述技术方案，本申请在混合胰蛋白酶的时候，将第一混液加热到38-40℃，可以进一步提高胰蛋白酶的活性，从而提高保存液的使用性能。综上所述，本申请包括以下至少一种有益技术效果：1.本申请通过加入胎牛血清，首先可以作为蛋白质稳定剂，在病毒的蛋白质外壳形成一种保护膜，使其不易分解，保证病毒的完整性，除此之外，胎牛血清与抗生素添加剂相互配合，具有抗细菌和抗真菌的作用，可以提高保存液本身的一个抗菌性，减少保存液本体的损害，同时血清防护剂的加入，可以减少胎牛血清内毒素的产生，从而进一步提高保存液自身的抗菌性能；2.本申请的血清防护剂可以有效减少胎牛血清与外界环境的接触，从而可以有效减少胎牛血清内堵毒素的产生；3.本申请又加入了胰蛋白酶和肝素钙，从而可以进一步提高保存液的抗菌性。具体实施方式以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种病毒保存液，其特征在于原料按重量份包括以下组分：Hanks缓冲液50-75份，三羟甲基氨基甲烷16-35份，乙二胺四乙酸3-6份，氯化钠6-12份，胎牛血清8-16份，抗生素添加剂6-13份，血清防护剂2-5份，水80-103份。/n

【技术特征摘要】
1.一种病毒保存液，其特征在于原料按重量份包括以下组分：Hanks缓冲液50-75份，三羟甲基氨基甲烷16-35份，乙二胺四乙酸3-6份，氯化钠6-12份，胎牛血清8-16份，抗生素添加剂6-13份，血清防护剂2-5份，水80-103份。


2.根据权利要求1所述的一种病毒保存液，其特征在于原料按重量份包括以下组分：Hanks缓冲液62-69份，三羟甲基氨基甲烷24-29份，乙二胺四乙酸4-5份，氯化钠8-11份，胎牛血清9-12份，抗生素添加剂8-9份，血清防护剂3-5份，水95-100份。


3.根据权利要求2所述的一种病毒保存液，其特征在于原料按重量份包括以下组分：Hanks缓冲液66份，三羟甲基氨基甲烷26份，乙二胺四乙酸4份，氯化钠10份，胎牛血清11份，抗生素添加剂9份，血清防护剂4份，水100份。


4.根据权利要求1所述的一种病毒保存液，其特征在于：所述抗生素添加剂按重量份包括，青霉素12-25份，庆大霉素16-26份。


5.根据权利要求1所述的一种病毒保存液，其特征在于：所述血清防护剂按重量...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘召宏，
申请(专利权)人：南京健邦锦源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32