一种高效促进纤维环源干细胞增殖的方法技术

本发明专利技术属于生物技术及细胞培养技术领域，具体涉及一种基于Collagel凝胶三维培养法和生物力学作用高效促进纤维环源干细胞增殖的方法。本发明专利技术所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，以Collagel凝胶支架作为三维基质，通过将纤维环源干细胞与Collagel凝胶混合为细胞悬液进行培养，形成模拟体内生长环境的三维结构微环境，同时联合生理性的动态压力作用，模拟体内椎间盘纤维环组织承载的动态压力作用，促进体外培养的纤维环源干细胞增殖。

【技术实现步骤摘要】
一种高效促进纤维环源干细胞增殖的方法
本专利技术属于生物技术及细胞培养
，具体涉及一种基于Collagel凝胶三维培养法和生物力学作用高效促进纤维环源干细胞增殖的方法。
技术介绍
椎间盘退变是一种常见疾病，尤其是随着人口老龄化和人们工作生活方式的改变，椎间盘突出、椎管狭窄等脊柱退行性疾病的发生率不断升高，部分症状严重患者甚至需要接受手术治疗。目前，髓核摘除和椎间融合是脊柱退行性疾病的主要手术疗法，但术中却不可避免地会造成纤维环的缺损。纤维环是指位于椎间盘的周缘部、由纤维软骨组成的纤维组织，纤维环的纤维在椎体间斜行，并在横切面上排列成同心环状，相邻环的纤维具有相反的斜度，而相互交叉。纤维环的前方有坚强的前纵韧带，前纵韧带的深层纤维并不与纤维环的浅层纤维融合在一起，却十分加强纤维环的力量；而纤维环的后方有后纵韧带，并与之融合在一起，后纵韧带虽较前纵韧带为弱，亦加强纤维环后部的坚固性。简言之，纤维环在吸收震荡和保持髓核组织形态上发挥了重要作用。纤维环的损坏会导致椎间盘不再处于密闭环境，而椎间盘压力降低等一系列微环境改变均不利于椎间盘的修本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)配制Collagel凝胶培养基质，备用；/n所述Collagel凝胶培养基质包括如下成分：/n试剂A：5×MEM；/n试剂B：FBS(胎牛血清)；/n试剂C：1M Hepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)；/n试剂D：0.1M NaOH与5×MEM的混合液；/nCollagel凝胶：2-10mg/ml COL1(Ⅰ型胶原蛋白)与0.01M HCl的混合液；/n(2)取分离的纤维环源干细胞，制成单细胞悬液，并计数；/n(3)将所述细胞与所述Collagel凝胶培养基质混合均匀，得到细胞-Colagel悬液；/n(4)取步骤(...

【技术特征摘要】
1.一种高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制Collagel凝胶培养基质，备用；
所述Collagel凝胶培养基质包括如下成分：
试剂A：5×MEM；
试剂B：FBS(胎牛血清)；
试剂C：1MHepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)；
试剂D：0.1MNaOH与5×MEM的混合液；
Collagel凝胶：2-10mg/mlCOL1(Ⅰ型胶原蛋白)与0.01MHCl的混合液；
(2)取分离的纤维环源干细胞，制成单细胞悬液，并计数；
(3)将所述细胞与所述Collagel凝胶培养基质混合均匀，得到细胞-Colagel悬液；
(4)取步骤(3)得到的细胞-Colagel悬液加入至细胞培养板中，置于CO2培养箱中进行细胞培养；
(5)将步骤(4)培养后的细胞置于细胞组织力学加载培养与分析系统，对所述纤维环源干细胞进行动态压力刺激，并继续细胞培养，即得。


2.根据权利要求1所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述Collagel凝胶培养基质的配置步骤具体包括：
(a)取所述试剂A、试剂B和试剂C进行混合，备用；
(b)另取试剂D和Collagel，并调节混合液pH7.0-7.2，备用；
(c)分别将上述步骤(a)和(b)制备的混合液混匀，即得。


3.根据权利要求1或2所述高效促进纤维环源干细胞增殖的方法，其特征在于，所述试剂A、试剂B、试...

【专利技术属性】
技术研发人员：师浩钧，王磊磊，黄伟敏，周军，
申请(专利权)人：师浩钧，
类型：发明
国别省市：山东;37