一种人胚胎干细胞诱导分化成间充质干细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种人胚胎干细胞(hESC)诱导分化成间充质干细胞(MSCs)的方法，主要涉及三个阶段，包括原条(PS)细胞的诱导，向外侧中胚层细胞的分化以及MSCs的分化。所述方法采用了分阶段分化的方法，整个分化过程可以追踪并质控，成本较低，且操作简单；获得hESCs诱导分化成MSCs的中间产物，包括PS细胞、外侧中胚层细胞和MSCs；可以高效产生数量更多的MSCs，倍增时间更短，并且可重复，最短仅需17天即可获得成熟的MSCs；其中前两个阶段的分化诱导培养基为成分明确的无血清培养基，使分化出来的MSCs免受外源物质的污染，保证了其均一性和临床适用性。

A method of inducing human embryonic stem cells into mesenchymal stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种人胚胎干细胞诱导分化成间充质干细胞的方法
本专利技术涉及生物与医药
，具体而言，本专利技术涉及一种人胚胎干细胞(hESC)诱导分化成间充质干细胞(MSCs)的方法。
技术介绍
间充质干细胞由(MSCs)于其独特的生物学特性，多种功能和潜在的治疗价值而吸引了广泛的关注。由于其具有再生能力和免疫调节特性(Leetal.，2012)，MSCs已被用于治疗各种退行性和炎症性疾病(Shietal.，2018)，如关节软骨损伤、移植物抗宿主病和心肌缺血等。几乎在所有结缔组织中都发现了MSC，例如脐带和血液，羊膜和体液，胎盘，骨髓，脂肪和牙髓。MSCs具有高增殖能力和可塑性，可以分化为许多体细胞谱系，并且可以迁移并归巢到受伤的组织中(Sohnietal.，2013)。然而，体细胞来源的MSCs受细胞数量、异质性和生物安全问题的限制，使得其临床治疗应用潜力受到一定的限制，并且如果可能的话，可能会传播供体的病原体(Parekkadanetal.，2010)。近年来，许多文章已经报道开发出许多方案，可以将人胚胎干细胞(hESCs)诱导分化产生MS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种hESC诱导分化成MSCs的方法，其特征在于，包含以下步骤：/n1)hESC在PS诱导培养基中培养，获得PS细胞；/n2)PS细胞在外侧中胚层诱导培养基中培养，获得外侧中胚层细胞；/n3)外侧中胚层细胞在MSCs诱导培养基中培养，获得MSCs。/n

【技术特征摘要】
1.一种hESC诱导分化成MSCs的方法，其特征在于，包含以下步骤：
1)hESC在PS诱导培养基中培养，获得PS细胞；
2)PS细胞在外侧中胚层诱导培养基中培养，获得外侧中胚层细胞；
3)外侧中胚层细胞在MSCs诱导培养基中培养，获得MSCs。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的PS诱导培养基采用mTeSR1noselectedfactors、低糖DMEM培养基或DMEM/F12中的一种作为基础培养基，添加激活素A，CHIR99021，bFGF和PIK90。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的激活素A浓度为20～35ng/mL，CHIR99021浓度为2～5μM，bFGF浓度为15～20ng/mL，PIK90浓度为20～100nM，培养时间为24小时。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述的外侧中胚层诱导培养基采用mTeSR1noselectedfactors、低糖DMEM培养基或DMEM/F12中的一种作为基础培养基，添加有A-83-01，LDN-193189，BMP4，CHIR99021和bFGF。


5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的A-83-01浓度为0.5～1.5μM，LDN-193189浓度为200～300nM，BMP4浓度为10～20ng/mL，CHIR99021浓度为2～4μM，bFGF浓度为15～25ng/mL，培养时间为2天...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳华，周珂，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33