一种人胎盘羊膜干细胞向肝细胞定向分化的诱导方法技术

本发明专利技术提供了一种人胎盘羊膜干细胞向肝细胞定向分化的诱导方法，包括一种人胎盘羊膜间充质干细胞分离培养的技术，以及将所述细胞采用慢病毒介导法定向诱导分化为肝细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种人胎盘羊膜干细胞向肝细胞定向分化的诱导方法
本专利技术涉及干细胞领域，具体为涉及一种人胎盘羊膜干细胞向肝细胞定向分化的诱导方法。
技术介绍
肝脏是机体新陈代谢的中心站,具有维持机体健康运转所必需的多种生理、生化功能。肝细胞则是肝脏执行这些功能的最基本单位,因而,其研究价值不言而喻。肝炎病毒、药物、酒精等因素引起的肝功能衰竭(简称肝衰竭)是临床治疗中的一大顽疾。迄今,肝脏移植是唯一证实有效的治疗手段,但其受到肝脏来源缺乏、手术费用昂贵等因素的限制。生物人工肝、肝细胞移植、肝组织工程的研究为终末期肝病的治疗带来新的希望,但缺乏有效的肝细胞来源是这三者临床应用的最大瓶颈。因原代肝细胞在体外培养中很难在维持其形态和功能的前提下进行可观的增殖,肝细胞的来源常常依赖于供体捐献,这一直是基础研究、药物研发及肝病治疗等相关领域的主要制约因素。如何在体外获取可增殖的功能型肝细胞,是迫切需要解决的问题。正常情况下干细胞可以自我更新并保持其未分化状态,在一些特定的诱导环境下,干细胞可以分化成多种其他类型并且具有功能的成体细胞。因此,以易于获取或培养的干细胞为起源本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人胎盘羊膜干细胞向肝细胞定向分化的诱导方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n(1)取新鲜采集的足月剖腹产胎儿的胎盘组织，放置于胎盘盒中，首先采用75％的酒精进行擦拭消毒，然后采用PBS缓冲液进行反复冲洗，直至洗掉表面的血污；/n(2)用手术镊将胎盘外层的羊膜慢慢撕下，放置于无菌培养皿中，采用上述PBS缓冲液反复清洗表面血污，洗净后转移至新的培养皿中，加入D-Hanks溶液，更换一把新的手术镊，配合手术剪，将羊膜剪成直径为1cm

【技术特征摘要】
1.一种人胎盘羊膜干细胞向肝细胞定向分化的诱导方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)取新鲜采集的足月剖腹产胎儿的胎盘组织，放置于胎盘盒中，首先采用75％的酒精进行擦拭消毒，然后采用PBS缓冲液进行反复冲洗，直至洗掉表面的血污；
(2)用手术镊将胎盘外层的羊膜慢慢撕下，放置于无菌培养皿中，采用上述PBS缓冲液反复清洗表面血污，洗净后转移至新的培养皿中，加入D-Hanks溶液，更换一把新的手术镊，配合手术剪，将羊膜剪成直径为1cm3的组织小块，并在溶液中清洗干净；
(3)剪碎后的小组织块移入新的培养皿中，加入消化酶组合物，37℃消化，后1500r离心8～12min，制备出单细胞悬液，再用红细胞裂解液处理3～8min，去除红细胞，最后用D-Hanks溶液清洗1遍，1500r离心8～12min，收集底部组织块；
(4)在底部组织块中加入含10％FBS的DMEM培养基，于37℃，5％CO2中进行培养，细胞长到瓶底90％后采用0.25％胰酶进行消化，1:2的比例进行传代培养，将hp-MSC细胞培养传代至第5～7代；
(5)将HEK293T细胞进行传代培养，以3～5×106个/mL的细胞密度接种于1mL细胞悬液并置于75cm2的细胞培养瓶中培养，当细胞汇合度为50～60％时，采用0.25M的磷酸钙溶液进行转染，再加入包装质粒pCMVΔ8.91以及包膜质粒pVSV-G，最后分别加入慢病毒质粒Foxa3、Gata4、Hnf4a，所述三种慢病毒质粒的浓度分别为50-100ng/μL，每种添加量为20μg,培养48～72h，离心...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊晋宇，程雪，赵亚琪，池金鹏，张诗薇，
申请(专利权)人：山东天川精准医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37