一种基于温皿制备人源脂肪干细胞膜片的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于温皿制备人源脂肪干细胞膜片的方法，包括以下步骤：(1)取温度敏感培养皿或温度敏感培养板，加入浸润液浸湿后，吸除浸润液；(2)将冻存的脂肪干细胞或培养的脂肪干细胞接种至温度敏感培养皿或温度敏感培养板中，培养，制备脂肪干细胞膜片；(3)获取脂肪干细胞膜片；(4)脂肪干细胞膜片进行再培养。本发明专利技术的方法中，温皿或温皿板不需要包被，可以采用冻存细胞直接接种，细胞膜片与温皿的分离速度快，完整度高，如此可以节省步骤和时间，提高制备效率。

【技术实现步骤摘要】
一种基于温皿制备人源脂肪干细胞膜片的方法
本专利技术属于干细胞再生医学
，涉及一种基于温皿制备人源脂肪干细胞膜片的方法，尤其涉及一种可直接贴附于损伤患处的温度敏感培养皿制备人脂肪干细胞膜片的方法。
技术介绍
干细胞是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未分化细胞，是形成哺乳类动物组各个织器官的原始细胞。在修复机体、器官移植、医学美容等众多领域都有极高的应用价值。干细胞研究已成为生命科学领域的重大热点。人体脂肪干细胞多来源于通过美容抽脂手术而获得脂肪组织，在经过化学酶或机械分离后可得到脂肪血管基质成分，再将其脂肪血管基质成分进一步分离提纯、培养扩增后即可得到脂肪干细胞。目前脂肪干细胞除在临床面部美容、乳房填充、整形外科及抗衰老应用外，在机体组织器官损伤、修复的许多临床前研究实验中均已证明脂肪干细胞具有修复损伤细胞的功能，可促进细胞再生。人体脂肪组织储量丰富、获取方便，且并不涉及伦理道德问题，脂肪干细胞有望成为组织工程和器官再生的重要种子细胞。脂肪干细胞在体外培养时，经特殊培养条件可诱导分化为临床治疗所需的不同细胞。例如本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于温皿制备人源脂肪干细胞膜片的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)取温度敏感培养皿或温度敏感培养板，加入浸润液浸湿后，吸除浸润液；/n(2)将冻存的脂肪干细胞或培养的脂肪干细胞接种至温度敏感培养皿或温度敏感培养板中，培养，制备脂肪干细胞膜片；/n(3)获取脂肪干细胞膜片；/n(4)脂肪干细胞膜片进行再培养。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于温皿制备人源脂肪干细胞膜片的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取温度敏感培养皿或温度敏感培养板，加入浸润液浸湿后，吸除浸润液；
(2)将冻存的脂肪干细胞或培养的脂肪干细胞接种至温度敏感培养皿或温度敏感培养板中，培养，制备脂肪干细胞膜片；
(3)获取脂肪干细胞膜片；
(4)脂肪干细胞膜片进行再培养。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述浸润液包括完全培养基，所述完全培养基由GibcoDMEM/F-12或α-MEM或高糖DMEM或低糖DMEM基础培养基、5％～10％AventaCELL-Helios血清替代物以及5ng/ml-10ng/mlEGF组成。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，脂肪干细胞通过以下步骤培养获得：
步骤a、脂肪干细胞分离：
1)去除人体脂肪组织上层油脂及下层血性肿胀液，将脂肪组织与生理盐水混合，离心，去除离心后的脂肪上层油脂和底层血性液体；
2)重复上述步骤，获取中层纯脂肪组织；
3)按体积比例加入注射用胶原酶溶液混匀后，放入37℃震荡水浴中消化分解；
4)加入生理盐水，再次离心，留取底部的细胞沉淀；
5)将细胞沉淀加入生理盐水，再次离心去除上层溶液，留取底部的细胞沉淀：
6)重复上述步骤，得到的细胞沉淀为脂肪血管基质成分；
步骤b、脂肪干细胞培养：
1)将得到的脂肪血管基质成分加入完全培养基重悬，取样计数；
2)按照密度为3000～10000cells/cm2的接种量将细胞接种至培养瓶，置于培养箱中静置培养；
3)培养48h后换液，去除未贴壁细胞，此后每72h换液1次；
4)当细胞融合度至80％-90％，进行细胞传代；
5)弃去原培养液，加入BI重组酶消化细胞，镜下观察细胞接近圆形，轻轻拍打，终止消化，取样计数；
6)接种于培养瓶中此时细胞计为P0代；
7)重复步骤4)-6)以获得足够的细胞；传代后的细胞冻存备用。


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【专利技术属性】
技术研发人员：王淑玲，王莉，李宁，袁惟芯，邵小燕，
申请(专利权)人：上海赛傲生物技术有限公司，北京赛傲生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31