本发明专利技术提供一种超声／微波协同萃取－ＨＰＬＣ检测食品中的罂粟壳生物碱的方法，待测样品经过超声－微波协同萃取；过滤；分离；液相色谱分析；分别以吗啡、磷酸可待因和盐酸罂粟碱为对照品，得出吗啡，可待因，罂粟碱的特征峰，以峰面积为纵坐标，标准样品浓度为横坐标绘制标准曲线；取处理好的样品分别与吗啡、磷酸可待因、盐酸罂粟碱对照品相同的条件进样，得出检测样品的谱图及标准曲线，从而确定样品中是否含有罂粟壳生物碱及含量。由于超声－微波协同萃取充分利用了超声波振动的空化作用，降低目标物与样品基体的结合力，使样品中罂粟成分提取彻底。本发明专利技术的灵敏度能达到０．１ｎｇ／Ｌ，实验干扰小并且操作简单，耗时短，具有回收率高、精密度高等优点，在食品中罂粟壳生物碱的检测方面有很好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种超声/微波协同萃取-HPLC检测食品中的罂粟壳生 物碱的方法，属于液相色谱分析
技术介绍
罂粟壳，为罂粟科植物罂粟(Pa。aver somnlferumL)的干燥果壳， 含有罂粟碱、吗啡、可待因、地巴因、那可汀等多种生物碱。罂粟壳具 有敛肺、涩肠、止痛功效。吸食罂粟果壳及制品.可造成吸食者在心理、 生理上产生很强的依赖性。罂粟壳的对机体作用似吗啡，长期食用危害 与吸食海洛因相似。因此国家将其列入麻醉药品予以管制，禁止非法供 应、运输和使用。但社会上存在一些非法经营者，为了招榄顾客，在调味 料中添加罂粟壳,消费者食用后有异香之感，在不知不觉中上瘾、中毒。 这种异常感觉正是罂粟壳中的吗啡等生物碱刺激神经的一种反应，并非 食物的味道。因此，加强相关食品的监督检测非常必要。文献报道对食品中罂粟壳生物碱有薄层法(TLC)、高效液相色谱法 (HPLC)、免疫测定法(IMA)等。薄层法灵敏度lMg，高效液相色谱法 (HPLC)炅敏度l.lng但两种方法检测干扰严重；免疫测定法灵敏度高， 但特异性差。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种炅敏度高、精密度并且操作简单的超声-微波协同萃取—高效液相法，检测目标为罂粟壳中含有的吗啡、可待 因和罂粟碱，以确定被检测食品中是否含有罂粟壳生物碱。本专利技术的技术方案是这样实现的这种超声/微波协同萃取-HPLC检测食品中的罂粟壳生物碱的方法，其特征在于包括如下步骤A、 萃取取2mL待测样品，加75%乙醇，酒石酸调pH至4，放进超 声一微波协同萃取仪70。C，萃取15分钟；B、 过滤萃取后的样品过滤，残渣用PH4.0的75冗酸性乙醇洗涤 2-3次，冷却后用脱脂棉过滤，再用75%酸性乙醇洗涤1次，水浴挥发 乙醇成糖浆状，自然冷却后用脱脂棉过滤，残渣用10%的酒石酸溶液洗 涤3-4次；C、 分离合并滤液于分液漏斗中，用30nl和20mL石油醚脱脂两 次，水层用氨水调。H至9.0-9.5,再用比例为3 : l的三氯甲烷异丙 醇混合液30ml 、 30 ml和20 ml萃取3次，每次静置15m1n,合并萃取 液，用无水硫酸钠脱水后水浴揮发有机溶剤，加甲醇定容至5 ml离心 管中，进液相前用0.45 " m的滤膜过滤，供色谱分析；D、 液相色谱分析检测目标为罂粟壳中含有的吗啡、可待因和罂 粟碱，液相色谱条件为柱温30。C，流速lml/m1n ; 最大吸收波长:吗啡210nm，可待因213nm,罂粟碱253nm ; 流动相水相:0.005 mol/L磷酸二氢钠和0.00005 mol/L磷酸氢二钠缓冲溶液; 有机相乙腈；D-1、标准曲线制备分别以吗啡、磷酸可待因和盐酸罂粟碱为对照品在上述色谱条件下稀释进样，得出吗啡，可待因，罂粟碱的特征峰,以峰面积为纵坐标，标准样品浓度为橫坐标绘制标准曲线；D-2、样品检测取步骤C处理好的样品分别与吗啡、磷酸可待因 和盐酸罂粟碱对照品相同的条件进样，得出检测样品的谱图及标准曲 线，从而确定样品中是否含有罂粟壳生物碱及含量。所述超声/微波协同萃取-HPLC检测食品中的罂粟壳生物碱的方法， 步骤D-1中吗啡标准曲线制备包括对吗啡的色谱图峰形进行优化，在标准品浓度为0.5-10vg/mL梯度为:<table>table see original document page 7</column></row><table>将吗啡标准品稀释为0.5、 1、 2、 4、 6、 8、 10 〃g/mL，在上述色 谱条件下，平行测定每个标准样品3次，绘制标准样品浓度与峰面积的 关系曲线，得回归方程y:42.92x-3.9387，相关系数R2=0.999934。所述超声/微波协同萃取-HPLC检测食品中的罂粟壳生物碱的方法， 其特征在于步骤D-1中磷酸可待因标准曲线制备包括 对磷酸可待因的色谱图峰形进行优化，在浓度为0.2-10ug/rrl梯度为<table>table see original document page 8</column></row><table>将可待因标准品稀释为0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 2、 4、 6、 8、 10 〃 g/nt,在上述色谱条件下，平行测定每个标准样品3次，绘制标准样品 浓度与峰面积的关系曲线，得回归方程y=31.606x-1.6496,相关系数 R2=0.999940。所述的超声/微波协同萃取-HPLC检测食品中的罂粟壳生物碱的方 法，步骤D-1中盐酸罂粟碱标准曲线制备包括 对罂粟碱的色谱图峰形进行优化，在浓度为0.2-10ug/mL梯度为<table>table see original document page 8</column></row><table>将罂粟碱标准品稀释为0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 2、 4、 6、 8、 10 〃 g/mL,在上述色谱条件下，平行测定每个标准样品3次，绘制标准样品 浓度与峰面积的关系曲线，得回归方程y=19.903x-1.1284，相关系数 R2=0.999954。所述超声/微波协同萃取-HPLC检测食品中的罂粟壳生物碱的方法, 步骤D-2样品检测包括取步骤c处理好的样品分别与吗啡、磷酸可待因和盐酸罂粟碱对照 品相同的条件进样，得出检测样品的谱图及标准曲线，每次进样量10 ^L。本专利技术与现有检测技术相比，其优点和积极效果表现在由于超声 -微波协同萃取充分利用了超声波振动的空化作用(同吋具有萃取和机 械搅拌作用)以及微波的高能作用，使样品介质内各点受到的作用一致, 降低目标物与样品基体的结合力，加速目标物从固相进入溶剤的过程， 使样品中罂粟成分提取彻底。本专利技术用超声-微波协同萃取一高效液相 法检测食品中的罂粟壳生物碱其炅敏度能达到0.1ng/L，实验干扰小。并且操作简单，耗吋短，具有回收率高、精密度高等优点，在食品中罂粟壳生物碱的检测方面有很好的应用前景。附图说明图1是吗啡、磷酸可待因、盐酸罂粟碱标准曲线图图2是吗啡标准品的色谱图图3是磷酸可待因标准品的色谱图图4是盐酸罂粟碱标准品的色谱图图5是测试样品中吗啡的色谱图图6是测试样品中可待因的色谱图图7是测试样品中罂粟碱的色谱图具体实施例方式1、样品处理，模拟样品为添加罂粟壳的牛肉汤1-1、萃取取2mL待测样品，加75%乙醇，酒石酸调pH至4，放进超声一微波协同萃取仪70。C，萃取15分钟；l-2、过滤萃取后的样品过滤，残渣用州4.0的75%酸性乙醇洗 涤2-3次，冷却后用脱脂棉过滤，再用75%酸性乙醇洗涤1次，水浴挥 发乙醇成糖浆状，自然冷却后用脱脂棉过滤，残渣用10%的酒石酸溶液 洗涤3-4次；1- 3、分离合并滤液于分液漏斗中，用30mL和20mL石油醚脱脂 两次，水层用氨水调PH至9.0-9.5,再用比例为3 : l的三氯甲烷异 丙醇混合液30m] 、 30 m，和20 ml萃取3次，每次静置15m1n，合并萃 取液，用无水硫酸钠脱水后水浴挥发有机溶剤，加甲醇定容至5 ml离 心管中，进液相前用0.45/^m的滤膜过滤，供色谱分析；本文档来自技高网...
【技术保护点】
超声／微波协同萃取－ＨＰＬＣ检测食品中的罂粟壳生物碱的方法，其特征在于包括如下步骤： Ａ、萃取：取２ｍＬ待测样品，加７５％乙醇，酒石酸调ｐＨ至４，放进超声－微波协同萃取仪７０℃，萃取１５分钟； Ｂ、过滤：萃取后的样品过滤，残渣用ｐＨ４．０的７５％酸性乙醇洗涤２－３次，冷却后用脱脂棉过滤，再用７５％酸性乙醇洗涤１次，水浴挥发乙醇成糖浆状，自然冷却后用脱脂棉过滤，残渣用１０％的酒石酸溶液洗涤３－４次； Ｃ、分离：合并滤液于分液漏斗中，用３０ｍＬ和２０ｍＬ石油醚脱脂两次，水层用氨水调ｐＨ至９．０－９．５，再用比例为３∶１的三氯甲烷∶异丙醇混合液３０ｍｌ、３０ｍｌ和２０ｍｌ萃取３次，每次静置１５ｍｉｎ，合并萃取液，用无水硫酸钠脱水后水浴挥发有机溶剂，加甲醇定容至５ｍｌ离心管中，进液相前用０．４５μｍ的滤膜过滤，供色谱分析； Ｄ、液相色谱分析：检测目标为罂粟壳中含有的吗啡、可待因和罂粟碱， 液相色谱条件：柱温３０℃，流速１ｍｌ／ｍｉｎ； 最大吸收波长：吗啡２１０ｎｍ，可待因２１３ｎｍ，罂粟碱２５３ｎｍ； 流动相： 水相：０．００５ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠和０．００００５ｍｏｌ／Ｌ磷酸氢二钠缓冲溶液； 有机相：乙腈； Ｄ－１、标准曲线制备：分别以吗啡、磷酸可待因和盐酸罂粟碱为对照品在上述色谱条件下稀释进样，得出吗啡，可待因和罂粟碱的特征峰，以峰面积为纵坐标，标准样品浓度为横坐标绘制标准曲线； Ｄ－２、样品检测：取步骤Ｃ处理好的样品分别与吗啡、磷酸可待因和盐酸罂粟碱对照品相同的条件进样，得出检测样品的谱图及标准曲线，从而确定样品中是否含有罂粟壳生物碱及含量。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王庭欣，李小亭，冯丽娟，赵志磊，吴广臣，夏立娅，刘峥颢，庞艳苹，
申请(专利权)人：河北大学，
类型：发明
国别省市：13[中国|河北]
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