一种温莪术油提取物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种温莪术油提取物及其制备、检测方法和用途。具体地涉及温莪术油提取物采用ＣＯ↓［２］超临界萃取方法制备。本发明专利技术提供的温莪术油质量稳定、可控，无刺激性，基本不含有莪术烯，同时有效成分提取完全，制备简单。本发明专利技术提供了温莪术油在制备治疗抗癌药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药温莪术油提取物及其制备方法和用途，特别涉及一种含有倍半萜类成分的温莪术油提取物及其在制备治疗癌症的药物中的应用。
技术介绍
温莪术为姜科植物温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根茎，习称“温莪术”。温莪术药材、温莪术油及温莪术油的注射液为中国药典收载品种，温莪术油是一种经临床证明疗效确切的抗病毒、抗癌药(中国药典2005版)。中国药典收载的温莪术油一直是采用水蒸气蒸馏法提取，传统的生产工艺由于加热时间长，加热温度高，使得到的莪术油含杂质多，特别是活性成分主要为含氧环状倍半烯萜类化合物，它们在长时间高热条件下易发生转化，影响了莪术油的临床疗效和制剂稳定性。例如温莪术油抗癌主成分-呋喃二烯(Furanodiene，又名蓬莪术环二烯，分子式C15H20O)在100℃或100℃以上长时间加热过程中易发生周环化发应，生成莪术烯(6-甲二叉甲基-4，5，6，7-四氢-3，6-二甲基-5异丙烯基-反式-苯并呋喃)。莪术烯经家兔肌肉刺激性实验证实，莪术烯会产生一定的刺激性作用。此外，由于温莪术中含有较多的淀粉粒，在长时间的加热蒸馏过程中易与水蒸气、挥发油一起被蒸出，造成提取的挥发油中含有大量的泡沫，油水易形成乳浊液，难于分层，使得质量不稳定，存在热源不过关等问题，给挥发油的精制带来难度。因此提供一种质量稳定、无刺激性的温莪术油提取物具有深远的临床意义。
技术实现思路
本专利技术提供了一种温莪术油提取物，该提取物主要含有倍半萜类组分，其中呋喃二烯+吉马酮+莪术二酮在总油中的含量≥50％。 本专利技术提供了一种温莪术油提取物的制备方法。 本专利技术提供了一种温莪术油提取物的检测方法。 本专利技术提供了温莪术油提取物在制备治疗宫颈癌、喉癌、白血病、脑胶质瘤、腹水癌、胃癌、前列腺癌的药物中的用途。 本专利技术提供的温莪术油提取物采用CO2超临界萃取方法制备将莪术药材粉碎成20～40目的细粉，投入到超临界萃取仪中，萃取压力为5～18Mpa，萃取温度20～55℃，分离釜I、II的压力为7～30Mpa，分离温度45～70℃，CO2的流量为20～100kg/h，萃取时间2～8h。 本专利技术提供的温莪术油提取物的检测方法为选用HPLC法和TLC法分离分析温莪术油中的有效成分及进行指纹图谱的研究，目的是由高效液相色谱法(HPLC)和薄层色谱法(TLC)代替气相色谱法(GC)或气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分离分析温莪术油的成分，避免了气相色谱法(GC)或气相色谱-质谱联用法(GC-MS)中进样室和色谱柱的高温对温莪术油有效成分的破坏，而影响温莪术油成分的真实性。 本专利技术提供的温莪术油提取物中倍半萜类成分不受破坏，提高了提取率，质量稳定，不含莪术烯(6-甲叉亚甲基-4，5，6，7-四氢-3，6-二甲基-5异丙烯基-反式-苯并呋喃)，无刺激性，且其在抗宫颈癌、喉癌、白血病、脑胶质瘤、腹水癌、胃癌、前列腺癌中的效果显著。 附图说明 图1为检测方法2中对照品的色谱图。 图2为制备例1得到的提取物的色谱图。 具体实施例方式 制备例1 取温莪术药材1.5kg，粉碎成20～40目的细粉，投入到萃取釜(江苏南通华安超临界萃取有限公司产HA221-50-06型超临界CO2萃取装置)中，选择萃取压力18Mpa，萃取温度为55℃；分离釜I压力12Mpa，温度为55℃，分离釜II压力为7Mpa，温度为45℃；CO2流量为80～100kg/h，萃取时间2h，得到油210g，萃取率为14.0％。经高效液相色谱法分离分析(分析条件见检测方法2选用HPLC法定性定量分析莪术油中的有效成分及有关物质)，检测结果为呋喃二烯含量为31.3％，吉马酮(牻牛儿酮)含量为15.5％，莪术二酮含量为11.7％，色谱图见图2。 制备例2 取温莪术药材1.5kg，粉碎成20～40目的细粉，投入到超临界萃取仪(江苏南通华安超临界萃取有限公司产HA221-50-06型超临界CO2萃取装置)中，选择17Mpa为超临界CO2萃取莪术油的萃取压力，温度为50℃；分离釜I压力10Mpa，温度为50℃，分离釜II压力为7.5Mpa，温度为60℃；CO2流量为25kg/h，萃取2.5h，得到莪术油198g，萃取率达到13.2％，其中呋喃二烯在温莪术油中的含量为33.8％，吉马酮(牻牛儿酮)含量为14.1％，莪术二酮含量为12.6％。 制备例3 取温莪术药材1.5kg，粉碎成20～40目的细粉，投入到超临界萃取仪(江苏南通华安超临界萃取有限公司产HA221-50-06型超临界CO2萃取装置)中，选择15Mpa为超临界CO2萃取莪术油的萃取压力，温度为55℃；分离釜I压力12Mpa，温度为50℃，分离釜II压力为8Mpa，温度为63℃；CO2流量为25kg/h，萃取2.5h，得到莪术油191g，萃取率达到12.7％，其中呋喃二烯在温莪术油中的含量为30.4％，吉马酮(牻牛儿酮)含量为15.1％，莪术二酮含量为12.7％。 制备例4.温莪术油脂肪乳注射剂 将5.0g温莪术油提取物、100g注射用大豆油、12g注射用蛋黄磷脂、0.02g维生素E混合均匀后，置60℃恒温水浴搅拌至澄清油溶液；将2g泊洛沙姆188、22.5g注射用甘油溶解分散在800ml注射用水中，加热至60℃为水相；将上述油溶液与水相按一定比例置组织捣碎机中，分次以8000～10000rpm高速搅拌，制成初乳剂；然后迅速降温后，调整pH值8～9，用注射用水使乳剂成1000ml；再经高压均质机匀化后，用0.22μm微孔滤膜滤过，灌封，即得100支乳剂(每支含温莪术油提取物50mg/10ml)。 试验例1温莪术油提取物对人早幼粒白血病HL-60、胃癌SGC-7901、前列腺癌PC3的作用(体外筛选，MTT法)。 1、材料 温莪术油提取物按制备例1方法制备；水蒸气蒸馏温莪术油(自提，依据《中国药典》2005版1部莪术油项下提取工艺制得)。 实验瘤株体外培养细胞人早幼粒白血病HL-60、胃癌SGC-7901、前列腺癌PC3，购于中国科学院上海细胞库。 2.方法进行体外细胞增殖抑制实验(MTT活细胞染色法) 取对数生长期的人早幼粒白血病HL-60、胃癌SGC-7901、前列腺癌PC3各株体外培养细胞(贴壁细胞用消化液消化)，台盼蓝排染法计数活细胞数，其中HL-60和SGC-7901用新鲜RPMI1640培养液，PC3用新鲜DMEM培养液，调整细胞密度为1×105个/ml，于96孔培养板内，每孔加细胞悬液200μL(每孔约2×104个)。在37℃、体积分数为5％的CO2饱和湿度培养箱中将HL-60培养1h后，SGC-7901、PC3培养24h后加药处理。2种温莪术油以DMSO为溶剂；以灭菌的生理盐水为溶剂，配制成5档剂量组，试药组每孔加试液0.4μL，组每孔加试液2μL，空白对照组不加任何试液，每档样品设三复孔。在37℃、体积分数为5％的CO2饱和湿度培养箱中培养48h后，每孔加入8μL MTT液，继续培养4h后每孔加入100μL DMSO，置摇床摇匀至结晶全部溶解，选用Synergy HT酶联仪于570～630nm处测各孔吸光度值，将各加试液孔均值(T)与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种温莪术油提取物，该提取物主要含有倍半萜类组分，其中呋喃二烯＋吉马酮＋莪术二酮在总油中的含量≥５０％。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙秀燕，
申请(专利权)人：烟台大学，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]