IV型胶原样免疫反应性多肽制造技术

本发明专利技术提供一种对肾炎的检测有用的Ⅳ型胶原样免疫反应性多肽及其抗体、Ⅳ型胶原样免疫反应性多肽选出方法、免疫反应性抗体与免疫反应性多肽的筛选方法、肾炎模型、慢性肾炎的检测方法、以及疫苗与肾炎治疗药。一种Ⅳ型胶原样免疫反应性多肽，其与分离出的慢性肾炎来源的生物试样发生免疫反应。所述Ⅳ型胶原样免疫反应性多肽优选具有选自下组中的至少一个以上：作为结构α链的１链～６链中的任意１条链以上、作为结构区域的选自７Ｓ、主三螺旋区及ＮＣ１中的任意一种以上、以及作为结构多肽的氨基酸数为３个以上、３５个以下。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及IV型胶原样免疫反应性多肽及其抗体、IV型胶原样免疫反应性多肽选出方法、免疫反应性抗体或免疫反应性 多肽的筛选方法、肾炎模型、慢性肾炎的检测方法、疫苗以及 肾炎治疗药。
技术介绍
IV型胶原尚未被完全阐明。IV型胶原的众多分子相互结 合，多种类的成分关联其上，由此形成组织基底膜。另外，因IV型胶原为组织基底膜的主要成分，从而也被称为基底膜胶原。IV型胶原有al链~ a6链6种异构体，1分子IV型胶原由3种a链构 成。3种a链的构成因组织而异，胎盘来源的基底膜中富含al、 (x2链，在全身各组织的基底膜中都可看到。肾来源的基底膜特 异性富含a3链~ a6链。1分子IV型胶原分为三个区域，从N末端起的具有三螺旋结 构的7S和主三螺旋区(TH)、位于C末端区域的非螺旋结构的 NC1。从生物体组织中提取时，根据不同处理方法所得的区域 不同， 一般方法为用胃蛋白酶处理得到三螺旋区域，用细菌 来源的胶原酶处理得到NC1 (非专利文献l)。另 一方面，肾炎根据症状大致分为"急性肾炎"与"慢性肾 炎"，各种各样的详细分类的肾疾病由专科医生命名。因通常称为肾炎的疾病指"慢性肾炎"，本专利技术中在无特别说明的情况下 将"肾炎"与"慢性肾炎"作为同义使用。"慢性肾炎"包括所谓的 慢性肾炎、IgA肾病、微小病变型肾病、膜性肾病、继发性肾 病中的糖尿病性肾病、高血压性肾病等，但不限定于此。肾炎5每年新增透析案例3万人，无论是对于病人的生活质量(QOL)、 还是对于国民医疗费(每l例透析费用为600万日元/年)都是极 大的负担。透析的技术不断进步，但在发病的早期确定肾病变、 直接治疗肾炎的药剂尚不存在。其原因很大程度上是由于肾炎 的发病机制尚未#皮阐明。另外，肾炎存在肾炎特有的抗原，世界上正在对各种抗原 物质进行研究(非专利文献2)。若抗原得到确定，就可望以之 为靶标物质进行诊断试剂与肾炎治疗剂的开发。已确定抗原的 p眷一例子有肺出血-肾炎综合症(Goodpasture's syndrome )(狭 义的抗肾小球基底膜(GBM)抗体肾炎)。有报告指出该抗 原存在于a3链NCl的C末端36位氨基酸残基与N末端起的氨基 酸序列17- 31、以及127- 141 (非专利文献3)等，任意一种抗 原的该部位都位于a3链上。另外，a3链上的17-31 (氨基酸残 基数15个)以及127- 141 (氨基酸残基数15个)为从嵌合型al /a3NCl检索到的。作为罕见的肾炎的肺出血-肾炎综合症属于"急性肾炎"，因 典型情况下2周左右即发展为重症状态，必须迅速进行确诊。确 诊中，使用肾活检的免疫组化染色，根据抗GBM的自身抗体免 疫球蛋白I g G有无沉淀来判断。非专利文献l: Extracelluar Matrix IRL PRESS/OXFORD UNIVERSITY PRESS Oxford New York非专利文献2:腎h透析(肾与透析)2005 July Vol59 No.l 东京医学社非专利文献3: J.Biol Chem ( 1993 ) 268， 26033 — 2603
技术实现思路
专利技术要解决的问题然而该检验存在如下问题在样品采集时对患者造成痛苦 并具危险性，免疫组化染色中需要病理学专家的高度诊断能力。因此，作为简便方法，可使用对血中出现的自身抗体进行 ;险测的ELISA (酶联免疫吸附试^r )试剂盒(商品名氺7 口 7力，一 GBM、进口商二 、乂 、> 3 —股份有限公司、销售商二 7。口股份有限公司)。然而，根据上述ELISA试剂盒附带的说 明书以及所引用的文献(臨床機器*試薬(临床设备'试剂)、 Vol.20 No.3、 367 - 374 ( 1997 )),只有肺出血-肾炎综合症的 自身抗体被高浓度地检测到，其他肾炎时仅能检测到与健康者 同样的低水平。根据该说明书，使用的抗原为牛GBM抗原，GBM 由以IV型胶原为主要成分的多种成分组成，考虑大小的话，为 GBM〉 IV型月交原〉NC1 〉 a3《连的NCl 〉上述的各氨基酸残基 (抗原)。使用牛GBM作为抗原时，该巨大区域中没有其他的 肾炎的抗原，作为肾炎的检测是不充分的。另外，现在虽为日 本唯一获得许可并在医保范围内的诊断试剂，但存在因价格昂 贵且为进口商品而使用困难的问题。因此本专利技术的目的在于提供对肾炎的检测有用的IV型胶 原样免疫反应性多肽及其抗体、IV型胶原样免疫反应性多肽选 出方法、免疫反应性抗体与免疫反应性多肽的筛选方法、肾炎 模型、慢性肾炎的检测方法、以及疫苗与肾炎治疗药。用于解决问题的手段本专利技术人为解决上述问题，在伴随肾病、其他疾病的继发 性肾病的治疗药开发与早期检测方法上经长期努力专心研究， 通过使用慢性肾炎来源的生物试样找出肾炎的抗原部位，确立 了IV型胶原样免疫反应性多肽及其抗体、IV型胶原样免疫反应 性多肽选出方法、免疫反应性抗体与免疫反应性多肽的篩选方 法、肾炎模型、慢性肾炎的检测方法、以及疫苗与肾炎治疗药，7完成了本专利技术。即，本专利技术的iv型胶原样免疫反应性多肽，其特征在于，与分离出的慢性肾炎来源的生物试样发生免疫反应。另外，本专利技术的IV型胶原样免疫反应性多肽的抗体，其特 征在于，与上述IV型胶原样免疫反应性多肽发生免疫反应。此外，本专利技术的IV型胶原样免疫反应性多肽选出方法，其特征在于，所述方法以分离出的慢性肾炎来源的生物试样为配 体，选出与上述慢性肾炎来源的生物试样发生免疫反应的上述IV型胶原样免疫反应性多肽。此外，本专利技术的免疫反应性抗体的筛选方法，其特征在于，使用上述IV型胶原样免疫反应性多肽。此外，本专利技术的免疫反应性多肽的篩选方法，其特征在于，使用上述IV型胶原样免疫反应性多肽的抗体。此外，本专利技术的肾炎模型，其特征在于，以选自上述IV型 胶原样免疫反应性多肽及上述IV型胶原样免疫反应性多肽的抗体中的任意 一种以上为引发原。此外，本专利技术的慢性肾炎的检测方法，其特征在于，使用选自上述IV型胶原样免疫反应性多肽及上述IV型胶原样免疫反应性多肽的抗体中的任意一种以上。此外，本专利技术的疫苗，其特征在于，使用选自上述IV型胶 原样免疫反应性多肽及上述IV型胶原样免疫反应性多肽的抗体所组成的组中的任意一种以上。另外，肾炎治疗药，其特征 在于，含有该疫苗。专利技术效果通过本专利技术，可提供对肾炎的检测有用的IV型胶原样免疫 反应性多肽及其抗体、IV型胶原样免疫反应性多肽选出方法、免疫反应性抗体与免疫反应性多肽的筛选方法、肾炎模型、慢性肾炎的检测方法、以及疫苗与肾炎治疗药。 附图说明图l为示意健康者与尿中白蛋白值高者的比较(抗NC1抗 体)的图。图2为示意不同疾病抗NC1抗体的一览的图。 图3为示意同 一肾炎患者抗三链抗体与抗NC1抗体的关联 的图。图4为示意慢性肾炎TD 3 8 、糖尿病性肾炎TD4 2与健康者 (TD31 ~ 37、 TD39 ~ 41 )的测定比寿交it才居(4元NCl4元体)的图。 图5为示意人NCl的a3链、a4链、a5链、a6链的图。 图6为示意慢性肾炎No38、糖尿病性肾炎No42、 IgA肾病与 健康者No31、 32、 33的NC1样抗原性的比较的图。具体实施例方式以下对本专利技术的IV型胶原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Ⅳ型胶原样免疫反应性多肽，其特征在于，与分离出的慢性肾炎来源的生物试样发生免疫反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：横山司甫，
申请(专利权)人：横山司甫，
类型：发明
国别省市：JP[日本]