微粒的样品检测活性的确认方法技术

本发明专利技术提供微粒的样品检测活性的确认方法、样品检测试剂盒以及样品的定量方法。微粒的样品检测活性的确认方法的特征在于：将含有２种以上配体的标准样品和含有与各配体特异性结合的受体且光学上能够区分的２种以上的微粒混合，并检测生成的凝集物的光学性质；样品检测试剂盒的特征在于：其具备上述标准样品和上述微粒；样品的定量方法的特征在于：通过上述确认方法确认微粒的样品检测活性后，将含有２种以上与该微粒中的受体特异性结合的配体的样品和该微粒混合，并检测生成的凝集物的光学性质，然后再次进行上述微粒的样品检测活性的确认；因此本发明专利技术提供试剂的样品检测活性的确认方法、利用该确认方法的样品的定量方法以及含有该试剂的样品检测试剂盒，所述试剂的样品检测活性的确认方法适用于以核酸等为代表的生物体相关物质的样品检测。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及适用于核酸等样品的检测的微粒的样品检测活性的确认方 法和利用该确认方法的样品的定量方法以及含有该微粒的样品检测试剂本申请要求2006年7月13日在日本申请的特愿2006-192741号的优先权，并在此援引其内容。
技术介绍
以往，关于检测作为测定对象物的样品的方法，已知有使样品与作为 样品检测试剂的分散性微粒特异性地结合来检测的方法。例如，已知以浓 度已知的蛋白质为标准样品来进行蛋白质定量的方法(参照专利文献1)。 具体而言，例如在健康诊断等时进行的血液检查中，对各检査项目进行测 定时，使用标准血清作为标准样品。另一方面，还提出了样品为核酸时的样品检测方法(参照专利文献2)，但未选定类似上述蛋白质定量法中使用的标准样品。此外，作为将核酸用作标准样品的方法，报道了例如将人工合成多核 苷酸作为核酸扩增工序中的标准样品的方法(参照专利文献3)、在基因表 达分析中基于基因组DNA的基因来制备标准样品的方法(参照专利文献 4)。而且，在上述样品检测方法中，样品检测试剂需要具有正常的检测活性。但是，专利文献3和4中所述的标准样品用于确认在实时PCR等核酸 扩增工序中的核酸扩增量。而且，根据标准样品的种类，检测信号有荧光、 发光、电泳、凝集、吸光度等各种信号。专利文献3和4中所述的方法因 需要改变检测方法和检测系统而存在通用性低的问题。另外，迄今为止未 报道有适用于通过使作为样品的核酸与分散性微粒特异性地结合来检测的6标准样品。此外，当使用生物体来源的基因作为标准样品时，根据其保存 情况以及检测工序中的条件，有可能出现分解，或难以精制，或混入杂质。如上所述，由于没有具有通用性的适用于核酸检测的标准样品，因此 存在以下问题难以确认在标准样品以及样品的检测中使用的试剂是否具 有正常的检测活性，并且也难以更正核酸检测值。因此，若有不会分解和混入杂质等的标准样品及其简便的使用方法或 试剂盒，就能够解决上述技术问题。专利文献l:日本特开平6-167495号公报 专利文献2:日本专利第3545158号公报 专利文献3:日本特开2003-265190号公报 专利文献4:日本特表2004-532034号公报
技术实现思路
本专利技术是鉴于上述情况而完成的专利技术，其目的在于提供适用于以核酸 等为代表的生物体相关物质的样品检测的试剂的样品检测活性的确认方法 和利用该确认方法的样品定量方法以及含有该试剂的样品检测试剂盒。为了解决上述课题，本专利技术的第1专利技术是一种微粒的样品检测活性的 确认方法，其中，将含有2种以上配体的标准样品和含有与各配体特异性 地结合的受体且光学上能够区分的2种以上的微粒进行混合，并检测生成 的凝集物的光学性质。本专利技术的第2专利技术是基于上述第1专利技术的微粒的样品检测活性的确认 方法，其中，在缓冲液中进行上述标准样品与上述微粒的混合。本专利技术的第3专利技术是基于上述第2专利技术的微粒的样品检测活性的确认 方法，其中，将上述标准样品与上述缓冲液混合后，向该混合液中添加上 述微粒。本专利技术的第4专利技术是基于上述第2专利技术的微粒的样品检测活性的活性 确认方法，其中，将上述微粒与上述缓冲液混合后，向该混合液中添加上 述标准样品。本专利技术的第5专利技术是基于上述第1 4专利技术的微粒的样品检测活性的确 认方法，其中，上述微粒为磁性微粒，并对生成的凝集物施加磁力。本专利技术的第6专利技术是基于上述第1 5专利技术的微粒的样品检测活性的确 认方法，其中，将上述标准样品和上述微粒在4 4(TC下进行混合。本专利技术的第7专利技术是基于上述第1 6的专利技术的微粒的样品检测活性的 确认方法，其中，将通过检测的标准样品 的检测值同与该标准样品为相同种类且相同浓度的标准样品的已知检测值 进行比较。本专利技术的第8专利技术是基于上述第1 6的专利技术的微粒的样品检测活性的 确认方法，其中，使用浓度己知的标准样品每隔任意的时间段进行微粒的 样品检测活性的确认方法。本专利技术的第9专利技术是一种样品的定量方法，其中，在通过上述第1 6 的专利技术的方法确认微粒的样品检测活性后，将含有2种以上与该微粒中的 受体特异性结合的配体的样品和该微粒混合，并检测生成的凝集物的光学 性质，然后再次进行上述微粒的样品检测活性的确认。本专利技术的第10专利技术是一种样品的定量方法，其中，用上述第1 6的 专利技术的方法，使用相同种类且已知的不同的多个浓度的标准样品进行微粒 的样品检测活性的确认，导出标准样品检测值与标准样品浓度之间的函数， 利用将含有与该标准样品中的配体为相同种类且相同数目的配体的样品与 该微粒混合时的样品检测值和所述函数，对样品进行定量。本专利技术的第11专利技术是一种样品检测试剂盒，其具备含有2种以上配体 的标准样品和含有与各配体特异性结合的受体且光学上能够区分的2种以 上的微粒。本专利技术的第12专利技术是一种样品检测试剂盒，其具备含有2个以上配体 的2种以上混合而成的标准样品和含有与各配体特异性结合的受体且光学 上能够区分的2种以上的微粒。本专利技术的第13专利技术是基于上述第11或12专利技术的样品检测试剂盒，其 中，上述标准样品中的配体是半抗原。本专利技术的第14专利技术是基于上述第11 13专利技术的样品检测试剂盒，其 中，上述标准样品中的配体的种类与样品中的配体的种类相同。本专利技术的第15专利技术是基于上述第11 14专利技术的样品检测试剂盒，其 中，上述标准样品中配体的数目和种类与样品中配体的数目和种类相同。本专利技术的第16专利技术是基于上述第11 15专利技术的样品检测试剂盒，其 中，上述标准样品的种类与样品相同。本专利技术的第17所述的专利技术是基于上述第11 16专利技术的样品检测试剂 盒，其中，上述标准样品中的配体由分子量为180 60000的分子形成。本专利技术的第18专利技术是基于第11 17专利技术的样品检测试剂盒，其中， 上述标准样品中的配体具有在至少0 IO(TC的温度范围内与上述微粒中的 受体特异性结合的能力。本专利技术的第19专利技术是基于上述第11 18专利技术的样品检测试剂盒，其 中，上述标准样品中的配体是选自荧光物质、地高辛配基、氨基酸残基数 为6以上的多肽、2个以上单糖结合而成的糖链、生物素、蛋白质、聚组氨 酸、透明质酸(HA)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、序列号l表示的肽以及 它们的衍生物中的l种以上。本专利技术的第20专利技术是基于上述第11 19专利技术的样品检测试剂盒，其 中，在上述标准样品中含有具有链状结构的高分子物质。本专利技术的第21专利技术是基于上述第20专利技术的样品检测试剂盒，其中， 上述高分子物质为水溶性的。本专利技术的第22专利技术是基于第20或21专利技术的样品检测试剂盒，其中， 上述高分子物质在其主链或侧链的末端具有上述配体。本专利技术的第23专利技术是基于上述第20 22专利技术的样品检测试剂盒，其 中，上述高分子物质是选自多糖、聚乙二醇、多核苷酸、多肽、聚丙烯酸 衍生物、聚丙烯酰胺、聚酯、聚醚、聚酰胺以及它们的衍生物中的1种以 上。本专利技术的第24专利技术是基于上述第20 23专利技术的样品检测试剂盒，其 中，上述高分子物质主链的长度为15 200nm。本专利技术的第25专利技术是基于上述第20 24专利技术的样品检测试剂盒，其 中，在上述标准样品与上述微粒的混合中使用的溶液中，上述高分子物质 为直链状。本专利技术的第26专利技术是基于上述第11 25专利技术的样品检测试剂盒，其 中，上述标准样品的分子长度为样品的分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微粒的样品检测活性的确认方法，其中，将含有２种以上配体的标准样品和含有与各配体特异性结合的受体且光学上能够区分的２种以上的微粒进行混合，并检测生成的凝集物的光学性质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：西川和孝，
申请(专利权)人：奥林巴斯株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]