一种基因编辑的载体和方法技术

本发明专利技术公开了基因工程技术领域的一种基因编辑的载体和方法。所述载体通过增加pegRNA表达框数量，使用聚合酶II和聚合酶III启动子共同驱动pegRNA，并结合tRNA和RNA核酶的表达策略构建而成，使用本发明专利技术的载体，进行基因编辑，尤其是植物基因编辑，可以显著提高先导编辑的效率，提高精准编辑效率。

【技术实现步骤摘要】
一种基因编辑的载体和方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种基因编辑的载体和方法。
技术介绍
精确的基因组编辑技术在作物育种和基因组功能研究中发挥着重要作用。尽管近年来基因编辑技术取得迅速进展，但精确编辑在植物中仍面临巨大挑战。最近，先导编辑系统(PrimeEditing)在哺乳动物细胞中被开发和测试(Anzalone,Randolphetal.Search-and-replacegenomeeditingwithoutdouble-strandbreaksordonorDNA2019)。第一代先导编辑系统(PE1)由野生型逆转录酶(M-MLV)和Cas9切口酶(H840A)的融合蛋白以及先导编辑引导RNA(pegRNA)两部分组成，其中先导编辑引导RNA由单链引导RNA(sgRNA)在其3’末端增加一段含有新遗传信息的逆转录模板(rtT)和引物结合位点(PBS)的序列获得；在PE1系统的基础上，优化M-MLV逆转录酶建立PE2系统；在PE2系统的基础上，引入切割非编辑链的sgRNA建立PE3和PE3b系统，其效率有明显提升。动物细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因编辑的载体，包括：先导编辑系统，所述先导编辑系统包括针对特定编辑位点的pegRNA系统和PE融合蛋白基因，所述PE融合蛋白基因由Cas9基因和逆转录酶基因融合而成，其特征在于，所述针对特定编辑位点的pegRNA系统包括针对至少一个特定编辑位点的pegRNA基因，所述每个pegRNA基因至少设置2个表达框进行重复表达。/n

【技术特征摘要】
1.一种基因编辑的载体，包括：先导编辑系统，所述先导编辑系统包括针对特定编辑位点的pegRNA系统和PE融合蛋白基因，所述PE融合蛋白基因由Cas9基因和逆转录酶基因融合而成，其特征在于，所述针对特定编辑位点的pegRNA系统包括针对至少一个特定编辑位点的pegRNA基因，所述每个pegRNA基因至少设置2个表达框进行重复表达。


2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于，每个所述pegRNA基因的至少一个所述表达框由双启动子驱动，可选的，所述双启动子为聚合酶II和聚合酶III启动子共同驱动。


3.根据权利要求1或2所述的载体，其特征在于，所述pegRNA系统还包括tRNA基因和RNA核酶基因，可选的，所述tRNA基因和RNA核酶基因位于所述pegRNA基因的其中一个表达框中，和所述pegRNA基因表达框联合表达，可选的，位于同一表达框中的tRNA基因、pegRNA基因及RNA核酶基因依次相连。


4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈其军，逯敏慧，姜媛媛，柴一萍，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11