一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法技术

一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，属于生物技术领域。首先通过EdU检测添加了不同浓度雷帕霉素的细胞的增殖能力，其次荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达量，最后蛋白免疫印迹检测LC3蛋白的表达量，结合雷帕霉素对细胞增殖效率的影响和诱导自噬发生的效果综合评价从而确定最佳诱导浓度和时间。探讨雷帕霉素对家禽生殖细胞的诱导条件将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法
本专利技术涉及雷帕霉素诱导鸡胚胎干细胞自噬的最佳浓度和时间的方法，具体是一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，属于生物

技术介绍
雷帕霉素(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)是自噬的负调控分子，最早从链霉菌代谢物中提取出来，作为抗真菌药和免疫抑制剂应用于临床，后来发现其有启动自噬途径和抗肿瘤作用。启动自噬的基本原理是雷帕霉素可以进入哺乳动物细胞内与FKBP12受体形成复合物，而这个复合物对mTORC1中的受体特别敏感，可以与mTORC1结合并抑制其活性，进而使ULK1激活，启动自噬途径。自噬是一种广泛存在于真核生物中的生命现象。大量研究表明，自噬在细胞和生物体的发育和分化过程中均起到非常重要的作用。如在人白血病HL-60细胞中添加雷帕霉素，结果表明1、2、3和5μmol/L雷帕霉素对HL-60细胞增殖均有抑制作用，且抑制效率随着浓度升高而升高。用2μumol/L雷帕霉素处理HL-60细胞0、12和24h后，细胞浆内自噬小体数量增多，形态典型特异，且胞浆内有大的空泡出现本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，其特征是，包括：/n1）不同浓度及诱导时间的雷帕霉素对胚胎干细胞增殖的影响；/n2）qRT-PCR检测各组细胞中自噬基因的表达量；/n3）Western Blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的比例。/n

【技术特征摘要】
1.一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，其特征是，包括：
1）不同浓度及诱导时间的雷帕霉素对胚胎干细胞增殖的影响；
2）qRT-PCR检测各组细胞中自噬基因的表达量；
3）WesternBlot检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的比例。


2.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李碧春，丁颖，左其生，姜景译，袁霞，石祥，张明，张亚妮，孙红艳，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32