一种超高液相色谱法制备高纯度大麻二酚的方法技术

一种超高液相色谱法制备高纯度大麻二酚的方法，属于天然药物化学制备技术领域。针对目前大麻二酚提取工艺流程复杂，提取率及纯度低的问题，本发明专利技术提供了一种利用超高液相色谱制备高纯度大麻二酚的方法，所述方法为以工业大麻为原料，以醇溶液或酮溶液为提取溶剂，利用动态超声逆流提取或加热回流提取，获得提取液；将提取液浓缩后经不锈钢加压硅胶柱色谱分离，再用超高液相色谱分离获得大麻二酚提取物。本发明专利技术适用于高纯度大麻二酚的工业化生产。

Preparation of high purity cannabinol by ultra high performance liquid chromatography

【技术实现步骤摘要】
一种超高液相色谱法制备高纯度大麻二酚的方法
本专利技术属于天然药物制备
，具体涉及一种超高液相色谱法制备高纯度大麻二酚的方法。
技术介绍
工业大麻(Cannabissativa)与传统有毒大麻具有本质差别，根据1988年联合国明确规定，工业大麻是指不具备提取成瘾性成分(四氢大麻酚THC)价值或直接作为毒品吸食，专供工业用途的原料大麻，生长期的工业大麻的花絮及叶中的四氢大麻酚含量(THC)<0.3％，可以合法进行规模化种植与工业化开发利用。工业大麻是一种非常有前途的药用植物，其中大麻酚类化合物中药用价值最高的活性成分为大麻二酚(CBD)。大麻二酚(CBD)为大麻中非成瘾部分，CBD能阻止四氢大麻酚(THC)对人体神经系统的影响，同时具有抗肌肉引起的不随意挛缩、抗结缔组织炎症、风湿性关节炎、抗精神焦虑、抗细胞凋亡、抗氧化、抗炎、保护神经细胞等药理活性。二氢大麻酚(CBD)不溶于水，溶于乙醇、乙醚、石油醚、苯、碱溶液、正己烷、6号溶剂油、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、甲醇。熔点67℃、沸点185℃。目前大麻二酚提取大多采用醇提法、柱层析或单纯超临界萃取等技术，技术相对老旧，且生产效率低，纯度低。
技术实现思路
针对目前大麻二酚提取工艺流程复杂，提取率及纯度低的问题，本专利技术提供了一种超高液相色谱法制备高纯度大麻二酚的方法，所述方法包括：1)提取：以工业大麻为原料，以醇溶液或酮溶液为提取溶剂，利用动态超声逆流提取或加热回流提取，获得提取液；2)分离：将提取液浓缩后经不锈钢加压硅胶柱色谱分离，再用超高液相色谱分离获得大麻二酚提取物。进一步地限定，步骤1)所述提取，方法如下：将原料粉碎，按照1g：(6～20)mL的料液比，加入体积浓度为10％～80％的醇溶液或酮溶液，动态超声逆流提取或加热回流提取获得提取液；所述原料为工业大麻的花絮和叶片中的一种或两种的混合物。进一步地限定，所述动态超声逆流提取或加热回流提取2～3次，每次0.5～2h，100-120目滤网或板框压滤机过滤，然后合并提取液。进一步地限定，所述醇溶液为甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种的混合溶液；所述酮溶液为丙酮溶液。进一步地限定，步骤2)所述浓缩是指将提取液经减压回收提取溶剂，获得浸膏。进一步地限定，步骤2)所述不锈钢加压硅胶柱色谱分离是指将浓缩后获得的浸膏加60-200目硅胶拌样，所述浸膏与硅胶的质量比为(1:4)～(1:30)。经加压不锈钢柱色谱，以300～1400目硅胶为填料，进行洗脱，获得洗脱液，洗脱剂采用正己烷、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇中的一种或者是任意几种的混合物。进一步地限定，所述任意几种的混合物为下述组合中的任意一种：①正己烷与丙酮的混合物，所述正己烷与丙酮的体积比为(12:1)～(3:1)；②正己烷与乙酸乙酯的混合物，所述正己烷与乙酸乙酯的体积比为(10:1)～(2:1)；③正己烷与甲醇的混合物，所述正己烷与甲醇的体积比为(15:1)～(5:1)；④正己烷与乙醇的混合物，所述正己烷与乙醇的体积比为(12:1)～(4:1)；⑤二氯甲烷与甲醇的混合物，所述二氯甲烷与甲醇的体积比为(90:1)～(10:1)；⑥二氯甲烷与乙醇的混合物，所述二氯甲烷与乙醇的体积比为(95:1)～(15:1)；⑦二氯甲烷与乙酸乙酯的混合物，所述二氯甲烷与乙酸乙酯的体积比为(60:1)～(5:1)；⑧二氯甲烷与丙酮的混合物，所述二氯甲烷与丙酮的体积比为(80:1)～(20:1)；⑨石油醚与丙酮的混合物，所述石油醚与丙酮的体积比为(15:1)～(3:1)；⑩石油醚与乙酸乙酯的混合物，所述石油醚与乙酸乙酯的体积比为(12:1)～(3:1)；石油醚与甲醇的混合物，所述石油醚与甲醇的体积比为(20:1)～(8:1)；石油醚与乙醇的混合物，所述石油醚与乙醇的体积比为(18:1)～(6:1)。进一步地限定，步骤2)所述超高液相色谱，使用正相硅胶柱或反相C18柱色谱柱进行梯度洗脱，梯度洗脱所用流动相由流动相A与流动相B组成，其中流动相A为乙腈或甲醇，流动相B为含0.02％～0.1％(体积分数)三氟乙酸的水、含0.02％～0.1％(体积分数)冰醋酸的水或含0.02％～0.1％(体积分数)甲酸的水。进一步地限定，步骤2)所述梯度洗脱，在0-10min，流动相A与流动相B体积比为(100∶5)～(90：10)；10～12min，流动相A与流动相B体积比为(95∶5)～(100∶0)；12～15min流动相A与流动相B体积比为100∶0。进一步地限定，步骤2)所述梯度洗脱的流速为0.8mL·min-1～1.5mL·min-1；柱温为30℃～40℃；检测波长为220nm。有益效果本专利技术采用超高液相色谱制备技术提取获得的纯度为90％～98％的大麻二酚晶体。具体实施方式本专利技术所使用的仪器或试剂，如无特殊说明，均可通过商业化途径购买获得。实施例1.利用超高液相色谱(UPLC)制备高纯度大麻二酚(CBD)的方法。1)提取：以工业大麻为原料，以醇溶液或酮溶液为提取溶剂，利用动态超声逆流提取或加热回流提取，获得提取液。具体方法为：将工业大麻花絮粉碎至50目，按照1g：6mL的料液比，加入体积浓度为10％的甲醇溶液，动态超声逆流提取2次，每次2h，100目滤网过滤，然后合并提取液。2)分离：将提取液浓缩后经不锈钢加压硅胶柱色谱分离，再用超高液相色谱分离获得大麻二酚提取物。具体方法为：将提取液经减压回收提取溶剂，获得浸膏。将浓缩后获得的浸膏加60目硅胶拌样，所述浸膏与硅胶的质量比为1:4。经加压不锈钢柱色谱(120～150cm×12～15cm)，以800目硅胶为填料，进行洗脱，获得洗脱液，洗脱剂为正己烷与丙酮的混合物，所述正己烷与丙酮的体积比为(12:1)～(3:1)，可以采用梯度洗脱的方式，梯度洗脱过程中正己烷与丙酮的体积比由12:1降低至3:1。然后将加压不锈钢柱色谱处理获得的洗脱液采用超高液相色谱(超高液相色谱流动相携载样品在进样前，先用0.45微米滤膜过滤)，使用反相C18硅胶柱进行梯度洗脱，梯度洗脱所用流动相由流动相A与流动相B组成，其中流动相A为乙腈，流动相B为含0.02％(体积分数)三氟乙酸的水，在0-10min，流动相A与流动相B体积比为100∶5；10～12min，流动相A与流动相B体积比为95∶5；12～15min流动相A与流动相B体积比为100∶0。梯度洗脱的流速为0.8mL·min-1；柱温为30℃；检测波长为220nm，获得的洗脱液经减压回收流动相后冷冻干燥，条件为预冻温度-30℃℃，预冻时间10h，隔板温度60℃，干燥时间30h。最终得到淡黄色纯度为90％的大麻二酚晶体。实施例2.利用超高液相色谱(UPLC)制备高纯度大麻二酚(CBD)的方法。1)提取：以工业大麻为原料，以醇溶液或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种超高液相色谱法制备高纯度大麻二酚的方法，其特征在于，所述方法包括：/n1)提取：以工业大麻为原料，以醇溶液或丙酮溶液为提取溶剂，利用动态超声逆流提取或加热回流提取，获得提取液；/n2)分离：将提取液浓缩后经不锈钢加压硅胶柱色谱分离，再用超高液相色谱分离获得大麻二酚提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种超高液相色谱法制备高纯度大麻二酚的方法，其特征在于，所述方法包括：
1)提取：以工业大麻为原料，以醇溶液或丙酮溶液为提取溶剂，利用动态超声逆流提取或加热回流提取，获得提取液；
2)分离：将提取液浓缩后经不锈钢加压硅胶柱色谱分离，再用超高液相色谱分离获得大麻二酚提取物。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述提取，方法如下：将原料粉碎，按照1g：(6～20)mL的料液比，加入体积浓度为10％～80％的醇溶液或酮溶液，动态超声逆流提取或加热回流提取获得提取液；所述原料为工业大麻的花絮和叶片中的一种或两种的混合物。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述动态超声逆流提取或加热回流提取2～3次，每次0.5～2h，100-120目滤网或板框压滤机过滤，然后合并提取液。


4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述醇溶液为甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种的混合溶液；所述酮溶液为丙酮溶液。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述浓缩是指将提取液经减压回收提取溶剂，获得浸膏。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述不锈钢加压硅胶柱色谱分离是指将浓缩后获得的浸膏加60-200目硅胶拌样，所述浸膏与硅胶的质量比为(1:4)～(1:30)，经加压不锈钢柱色谱，以300～1400目硅胶为填料，进行洗脱，获得洗脱液，洗脱剂采用正己烷、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇中的一种或者是任意几种的混合物。


7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述任意几种的混合物为下述组合中的任意一种：
①正己烷与丙酮的混合物，所述正己烷与丙酮的体积比为(12:1)～(3:1)；
②正己烷与乙酸乙酯的混合物，所述正己烷与乙酸乙酯的体积比为(10:1)～(2:1)；
③正己烷与甲醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘欣，曹亮，
申请(专利权)人：黑龙江阳光工业大麻研究院，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23