猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂及制备工艺和应用制造技术

本发明专利技术涉及动物疫苗技术领域，尤其是一种猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂及制备工艺和应用，所述免疫增强剂为三价融合型蛋白质，由产肠毒素性大肠杆菌耐热肠毒素的STⅠ型、STⅡ型以及霍乱弧菌ST毒素组成，其基因核酸序列如SEQ ID No：1所示。该三价融合蛋白与佐剂乳化制备免疫原疫苗免疫动物，能刺激机体产生高滴度的抗体，免疫原性良好，克服了单个ST分子免疫原性差的弱点和不足。三价融合蛋白与猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗株联合使用，能够显著增强猪流行性腹泻病毒特异性sIgA抗体水平、延长其抗体持续期、降低哺乳仔猪的腹泻率和死亡率，是一种理想的猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗佐剂。

【技术实现步骤摘要】
猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂及制备工艺和应用
本专利技术涉及动物疫苗
，具体领域为一种猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂。
技术介绍
产肠毒素性大肠杆菌（EnterotoxigenicE.coli，ETEC）是引起幼畜腹泻的主要病原菌。ETEC具有两类致病因子：一类为肠毒素，另一类为粘着素（或称定居因子），已知的粘着素有K88，K99，F14和987P等。ETEC产生两种肠毒素：一种为不耐热性肠毒素（LT），另一种为耐热性肠毒素（ST），其中ST和LT是导致幼龄动物腹泻的直接致病因子。由于ST与LT相比，它是一种生物学活性更强，而免疫原性较弱的小分子多肽，因此而成为国内外许多学者研究的热点之一。由于ETEC产生的ST在ETEC性腹泻中扮演重要角色，对人类和家畜健康有很大威胁，因此对大肠杆菌ST毒素体外表达的优化研究具有重要意义。ST编码的基因位于质粒上，根据产物特性产物又可分为STⅠ和STⅡ，二者核苷酸和氨基酸序列同源性极低。ST毒素为分子量不足5000Da的多肽，通常无免疫原性。STⅠ为甲醇可溶性，且耐热，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂为三价融合型蛋白质，由产肠毒素性大肠杆菌耐热肠毒素的STⅠ型、STⅡ型以及霍乱弧菌ST毒素组成，其基因核酸序列如SEQ ID No：1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂为三价融合型蛋白质，由产肠毒素性大肠杆菌耐热肠毒素的STⅠ型、STⅡ型以及霍乱弧菌ST毒素组成，其基因核酸序列如SEQIDNo：1所示。


2.根据权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂，其特征在于：其编码的氨基酸序列如SEQIDNo：2所示；其中包括3个核心抗原表位：表位1：LSPIAQDAKPVESPKEKIPLES，表位2：PAAKGCMKNLFIALMLIFSSIALSPTVENDT，表位3：DENGNLIDCCEICCHPAGSGVL。


3.权利要求1或2所述的猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将产肠毒素性大肠杆菌耐热肠毒素的STⅠ型、STⅡ型以及霍乱弧菌ST毒素三价融合蛋白开放阅读框与pGEX4T-1载体连接，构建重组表达载体pGEX-LTB，转化BL21(DE3)感受态，筛选获得重组表达菌株BL21(DE3)-pGEX-LTB；
（2）重组表达菌BL21(DE3)-pGEX-LTB，LB培养基培养，在37℃，经IPTG诱导，超声波破碎，12000r/min，4℃，离心15min，收集沉淀蛋白；
（3）往沉淀蛋白中加入PBS缓冲液，漩涡振荡制备得到纯化的产肠毒素性大肠杆菌耐热肠毒素的STⅠ型、STⅡ型以及霍乱弧菌ST毒素三价融合蛋白重组蛋白悬液。


4.权利要求1或...

【专利技术属性】
技术研发人员：张渊魁，唐青海，何召庆，
申请(专利权)人：兆丰华生物科技南京有限公司，兆丰华生物科技福州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32