一种NK细胞低温保存回输液制造技术

本发明专利技术提供一种NK细胞低温保存回输液，通过在NK细胞低温保存回输液中添加葡萄糖氯化钠注射液，作为稀释液/缓冲液，起到保持pH值、离子渗透压、胶体渗透压和为细胞提供能量葡萄糖的作用；添加人血白蛋白能维持血浆胶体渗透压的恒定，供给营养；添加的维生素C促进抗体及胶原形成，组织修补，同时维生素C还具备有抗氧化，抗自由基，抑制酪氨酸酶的形成，可减少细胞氧化损伤，并且可以快速缓解细胞内过氧化物的累积。该NK细胞低温保存回输液可以使NK细胞，在4℃中保存48h后活率保持在80％以上，且制剂可直接回输。

Cryopreservation of NK cells for transfusion

【技术实现步骤摘要】
一种NK细胞低温保存回输液
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种NK细胞低温保存回输液。
技术介绍
自然杀伤细胞(NaturalKillerCell，NK)是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别靶细胞、杀伤介质。一般NK细胞的回输方式采用的是加入人血白蛋白的生理盐水作为细胞的回输液，但由于其缺乏营养和缓冲能力，细胞活性下降速度快，只能在短时间内进行回输，对于异地运输，细胞的活性无法保障。为了提高细胞活性，采用超低温冻存制剂保存，但是超低温运输成本高，操作程序更为繁琐，并且想要达到较好冻存效果，往往需要添加DMSO，但DMSO对细胞存在一定的毒性，它常温下能与蛋白质疏水基团发生作用，导致蛋白质变性，具有血管毒性和肝肾毒性。因此含有DMSO的制剂注射入人体内可能会引起不良反应。DMSO导致的不良反应在动物实验中已被证实。在一些临床治疗案例中，注射了含有DMSO的造血干细胞的病人表现出恶心、头痛、高血压、腹泻和腹部绞痛等症状。因此，对于临床治疗的细胞保存应该尽量避免使用DMSO。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提供一种NK细胞低温保存回输液，旨在解决长时间异地运输NK细胞过程中，细胞活性降低，且超低温运输成本高、操作繁琐的问题，使其能够在常温或者低温条件下较长时间保持细胞的活性，降低成本。为实现上述目的，本专利技术提出的一种NK细胞低温保存回输液，包括：维生素C注射液，所述维生素C注射液中维生素C的含量为15～35％；人血白蛋白注射液，所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的体积浓度为10％～30％；葡萄糖氯化钠注射液，所述葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的质量浓度为2％～8％，氯化钠的质量浓度为0.9％；其中，200ml所述NK细胞低温保存回输液中，所述维生素C注射液、人血白蛋白注射液以及葡萄糖氯化钠注射液的体积比为5:10:85。可选地，所述维生素C注射液中还包括碳酸氢钠、盐酸半胱氨酸、焦亚硫酸钠和依地酸二钠。可选地，所述维生素C注射液中维生素C的含量为25％。可选地，所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的体积浓度为20％。可选地，所述葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的质量浓度为5％。本专利技术技术方案通过在NK细胞低温保存回输液中添加葡萄糖氯化钠注射液，作为稀释液/缓冲液，起到保持pH值、离子渗透压、胶体渗透压和为细胞提供能量葡萄糖的作用；添加人血白蛋白能维持血浆胶体渗透压的恒定，供给营养；添加的维生素C促进抗体及胶原形成，组织修补，同时维生素C还具备有抗氧化，抗自由基，抑制酪氨酸酶的形成，可减少细胞氧化损伤，并且可以快速缓解细胞内过氧化物的累积。该NK细胞低温保存回输液可以使NK细胞，在4℃中保存48h后活率保持在80％以上，且制剂可直接回输。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例。图1为本专利技术不同保存液保存细胞后的活细胞总数的实验结果图；图2为本专利技术不同保存液保存细胞后的细胞活率的实验结果图。本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提出一种NK细胞低温保存回输液，该NK细胞低温保存回输液可以使NK细胞在4℃中保存48h后活率保持在80％以上，且制剂可直接回输。在本专利技术实施例中，提出的一种NK细胞低温保存回输液，包括：维生素C注射液，所述维生素C注射液中维生素C的含量为15～35％；人血白蛋白注射液，所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的体积浓度为10％～30％；葡萄糖氯化钠注射液，所述葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的质量浓度为2％～8％，氯化钠的质量浓度为0.9％；其中，200ml所述NK细胞低温保存回输液中，所述维生素C注射液、人血白蛋白注射液以及葡萄糖氯化钠注射液的体积比为5:10:85。具体的，葡萄糖氯化钠注射液作为稀释液/缓冲液，起到保持pH值、离子渗透压、胶体渗透压和为细胞提供能量葡萄糖的作用。具体的，人血白蛋白能维持血浆胶体渗透压的恒定，并且供给营养。具体的，维生素C促进抗体及胶原形成，促进组织修补，同时维生素C还具备有抗氧化，抗自由基，抑制酪氨酸酶的形成的作用，可减少细胞氧化损伤，并且可以快速缓解细胞内过氧化物的累积。本专利技术技术方案通过在NK细胞低温保存回输液中添加葡萄糖氯化钠注射液，作为稀释液/缓冲液，起到保持pH值、离子渗透压、胶体渗透压和为细胞提供能量葡萄糖的作用；添加人血白蛋白能维持血浆胶体渗透压的恒定，供给营养；添加的维生素C促进抗体及胶原形成，组织修补，同时维生素C还具备有抗氧化，抗自由基，抑制酪氨酸酶的形成，可减少细胞氧化损伤，并且可以快速缓解细胞内过氧化物的累积。该NK细胞低温保存回输液可以使NK细胞，在4℃中保存48h后活率保持在80％以上，且制剂可直接回输。可选地，所述维生素C注射液中还包括碳酸氢钠、盐酸半胱氨酸、焦亚硫酸钠和依地酸二钠。可选地，所述维生素C注射液中维生素C的含量为25％。可选地，所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的体积浓度为20％。可选地，所述葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的质量浓度为5％。下面将结合具体实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1设计不同的NK细胞低温保存回输液根据本专利技术技术方案中低温保存回输液配方中各成分的主要作用和所需含量，制定A、B、C、D四种低温保存回输液配方，各配制200ml，各配方中，人血白蛋白注射液中人血白蛋白的体积浓度为20％，维生素C注射液中维生素C的含量为25％，葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的质量浓度为5％，人血白蛋白注射液、维生素C注射液和葡萄糖氯化钠注射液的使用比例和用量如表1所示，根据表1的配方分别配置得到A、B、C、D四种NK细胞低温保存回输液。表1.不同NK细胞低温保存回输液配方实施例2实施例1得到的四种NK细胞低温保存回输液性能研究2.1实验操作抽取志愿者外周血50ml，800×g，20℃，离心15分钟，血液层加0.9％氯化钠注射液至40ml，用Ficoll淋巴分离液进行密度梯度离心(1000g，20℃，30m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NK细胞低温保存回输液，其特征在于，包括：/n维生素C注射液，所述维生素C注射液中维生素C的含量为15～35％；/n人血白蛋白注射液，所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的体积浓度为10％～30％；/n葡萄糖氯化钠注射液，所述葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的质量浓度为2％～8％，氯化钠的质量浓度为0.9％；/n其中，200ml所述NK细胞低温保存回输液中，/n所述维生素C注射液、人血白蛋白注射液以及葡萄糖氯化钠注射液的体积比为5:10:85。/n

【技术特征摘要】
1.一种NK细胞低温保存回输液，其特征在于，包括：
维生素C注射液，所述维生素C注射液中维生素C的含量为15～35％；
人血白蛋白注射液，所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的体积浓度为10％～30％；
葡萄糖氯化钠注射液，所述葡萄糖氯化钠注射液中葡萄糖的质量浓度为2％～8％，氯化钠的质量浓度为0.9％；
其中，200ml所述NK细胞低温保存回输液中，
所述维生素C注射液、人血白蛋白注射液以及葡萄糖氯化钠注射液的体积比为5:10:85。


2.如权利要求1所述的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋宗培，张珊，罗燕平，包朝乐萌，何嵘，刘丽美，
申请(专利权)人：深圳普瑞金生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44