间充质干细胞低温保存液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种间充质干细胞低温保存液及其制备方法，所述间充质干细胞低温保存液包括体积配比为1:50～1:5的人血白蛋白注射液和0.9％氯化钠注射液混合液；其中，每500mL所述0.9％氯化钠注射液混合液包括0.13～0.2g氯化钾和0.12～0.2g氯化钙。本发明专利技术技术方案，通过优化间充质干细胞低温保存液结构解决了传统间充质干细胞低温保存液因使用冻存保护剂而严重损害人体健康的技术问题。

【技术实现步骤摘要】
间充质干细胞低温保存液及其制备方法
本专利技术涉及细胞保存
，特别涉及一种间充质干细胞低温保存液及其制备方法。
技术介绍
间充质干细胞(MSC，mesenchymalstemcells)来源于发育早期的中胚层，是一种多功能干细胞，具有多向分化潜能、造血支持和促进细胞植入、免疫调控和自我复制等特点。在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带。神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复、自身免疫性疾病等方向，具有长远的医学发展前景。间充质干细胞需要在GMP环境下大规模制备，之后运输到医院用于临床治疗。间充质干细胞在GMP环境下处理后，并不能即时输注，过渡期间必须使用可被临床输注的保存液进行运输。目前常用的方法为冻存运输，此方法需要使用冻存保护剂，如二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇、甲醇、聚合物羟乙基淀粉等。但是，常用的冻存保护剂对人体有或多或少的不良影响，诸如，DMSO具有毒性，注射入人体后会引起恶心、呕吐、皮疹、腹痛、血压过低、严重神经系统疾病、肾衰竭、心血管疾病等不良反应。因此，寻找一种不含冻存保护剂的方式保护运输间充质干细胞，对于间充质干细胞的临床应用具有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提出一种间充质干细胞低温保存液及其制备方法，旨在解决传统间充质干细胞低温保存液使用冻存保护剂对人体健康损害较大的技术问题。为实现上述目的，本专利技术提出一种间充质干细胞低温保存液，所述间充质干细胞低温保存液包括体积配比为1:50～1:5的人血白蛋白注射液和0.9％氯化钠注射液混合液；其中，每500mL所述0.9％氯化钠注射液混合液包括0.13～0.2g氯化钾和0.12～0.2g氯化钙。可选地，所述氯化钙为分析纯试剂或优级纯试剂。本专利技术提供了一种如上所述的间充质干细胞低温保存液的制备方法，其特征在于：将氯化钾和氯化钙溶解于0.9％氯化钠注射液中，混匀，得0.9％氯化钠注射液混合液；取人血白蛋白注射液加入所述0.9％氯化钠注射液混合液，混匀，得目的间充质干细胞低温保存液。本专利技术还提供了一种如上所述的间充质干细胞低温保存液在间充质干细胞保存中的应用。本专利技术还提供了一种如上所述的间充质干细胞低温保存液制备的间充质干细胞注射液，所述间充质干细胞注射液中的间充质干细胞浓度为2*105～1*106个/mL。可选地，所述间充质干细胞为人的间充质干细胞。本专利技术还提供了一种如上所述的间充质干细胞低温保存液制备的间充质干细胞注射液的制备方法，向所述间充质干细胞低温保存液中加入间充质干细胞，至细胞浓度为2*105～1*106个/mL，制成单细胞悬液，得间充质干细胞注射液。相较于现有技术，本专利技术取得了以下有益效果：本专利技术技术方案中，通过使用人血白蛋白注射液和0.9％氯化钠注射液混合液制得的低温保存液保存人的间充质干细胞，避免使用具有毒副作用和对细胞造成损伤的冻存保护剂，且避免了冻存解冻步骤，极大地提高了临床安全性和简便性；同时延长了干细胞活性维持时间，保证36小时运输后细胞活性保持在85％以上，其仍能满足临床使用要求；该低温保存液具有安全性高、便于运输、细胞活性高、成本低廉、制剂可直接回输等优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。图1为本专利技术一实施例中不同间充质干细胞低温保存液下的细胞活率统计图；图2为本专利技术一实施例中A保存液低温保存运输间充质干细胞24小时后的贴壁图；图3为本专利技术一实施例中B保存液低温保存运输间充质干细胞24小时后的贴壁图；图4位本专利技术一实施例中C保存液低温保存运输间充质干细胞24小时后的贴壁图。本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。需要说明，若本专利技术实施例中有涉及方向性指示(诸如上、下、左、右、前、后……)，则该方向性指示仅用于解释在某一特定姿态下各部件之间的相对位置关系、运动情况等，如果该特定姿态发生改变时，则该方向性指示也相应地随之改变。另外，若本专利技术实施例中有涉及“第一”、“第二”等的描述，则该“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。参见图1至图4，本专利技术提出一种间充质干细胞低温保存液，所述间充质干细胞低温保存液包括体积配比为1:50～1:5的人血白蛋白注射液和0.9％氯化钠注射液混合液；其中，每500mL所述0.9％氯化钠注射液混合液包括0.13～0.2g氯化钾和0.12～0.2g氯化钙。可选地，所述氯化钙为分析纯试剂或优级纯试剂。本专利技术提供了一种如上所述的间充质干细胞低温保存液的制备方法，其特征在于：将氯化钾和氯化钙溶解于0.9％氯化钠注射液中，混匀，得0.9％氯化钠注射液混合液；取人血白蛋白注射液加入所述0.9％氯化钠注射液混合液，混匀，得目的间充质干细胞低温保存液。本专利技术还提供了一种如上所述的间充质干细胞低温保存液在间充质干细胞保存中的应用。本专利技术还提供了一种如上所述的间充质干细胞低温保存液制备的间充质干细胞注射液，所述间充质干细胞注射液中的间充质干细胞浓度为2*105～1*106个/mL。可选地，所述间充质干细胞为人的间充质干细胞。本专利技术还提供了一种如上所述的间充质干细胞低温保存液制备的间充质干细胞注射液的制备方法，向所述间充质干细胞低温保存液中加入间充质干细胞，至细胞浓度为2*105～1*106个/mL，制成单细胞悬液，得间充质干细胞注射液。为进一步阐述说明本专利技术提供的间充质干细胞低温保存液的效果，选用以下实施例组进行详细阐述。应当理解，下列实施例组仅用于说明本专利技术中低温保存液的效果，并不限制本专利技术。实施例1不同间充质干细胞低温保存液的制备按表1中各成分和比例配置A、B、C三种间充质干细胞保存液，各配制500mL，备本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种间充质干细胞低温保存液，其特征在于：所述间充质干细胞低温保存液包括体积配比为1:50～1:5的人血白蛋白注射液和0.9％氯化钠注射液混合液；/n其中，每500mL所述0.9％氯化钠注射液混合液包括0.13～0.2g氯化钾和0.12～0.2g氯化钙。/n

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞低温保存液，其特征在于：所述间充质干细胞低温保存液包括体积配比为1:50～1:5的人血白蛋白注射液和0.9％氯化钠注射液混合液；
其中，每500mL所述0.9％氯化钠注射液混合液包括0.13～0.2g氯化钾和0.12～0.2g氯化钙。


2.如权利要求1所述的间充质干细胞低温保存液，其特征在于，所述氯化钙为分析纯试剂或优级纯试剂。


3.一种如权利要求1或2所述的间充质干细胞低温保存液的制备方法，其特征在于：
将氯化钾和氯化钙溶解于0.9％氯化钠注射液中，混匀，得0.9％氯化钠注射液混合液；
取人血白蛋白注射液加入所述0.9％氯化钠注射液混合液，混匀，得目的间充质干细胞低温保存液。...

【专利技术属性】
技术研发人员：张珊，宋宗培，包朝乐萌，何嵘，罗燕平，刘丽美，
申请(专利权)人：深圳普瑞金生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44