经修饰的蛋白制造技术

本发明专利技术公开了一组唾液酸结合分子，其包含一个或更多个经修饰的碳水化合物结合模块(CBM)。所述经修饰的CBM降低了与宿主免疫应答和/或抗药物抗体(ADA)产生有关的不良事件的风险。所述经修饰的CBM可以用于治疗或用作药物，并且发现可以作为调节免疫应答和/或细胞生长的分子而具有特定的应用。所述经修饰的CBM还可以用作佐剂，例如粘膜佐剂，并用于治疗和/或预防由结合细胞表面的含有唾液酸的受体的病原体引起或起作用的癌症、脓毒症和/或疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的蛋白
本专利技术提供了新的唾液酸结合分子及其用途(包括医学用途)。
技术介绍
结合唾液酸的碳水化合物结合模块(CBM)(包括源自霍乱弧菌(Vibriocholerae)和肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)的模块及其多价形式)已被证明是有效的抗菌剂，其中一些被显示保护小鼠免受H7N9流感病毒的致命攻击。生物制剂，Sp2CBMTD，包含两个拷贝的肺炎链球菌(S.pneumoniae)神经氨酸酶A(SpCBM)的CBM家族40结构域，其与来自铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)假氨酸酶(pseudaminidase)(PaTD)的三聚结构域遗传融合。该蛋白质通过三聚结构域组装以形成含有六个拷贝的SpCBM的寡聚体。然而，对于任何基于蛋白质的治疗剂，都有与患者对生物制剂的免疫应答相关的不良作用的风险。在某些情况下，该生物制剂可能会诱导产生抗药物抗体(ADA)，其能够导致ADA与药物之间形成免疫复合物(IC)。此类复合物的存在可能会降低疗效或改变治疗剂的半衰期，或可能引起不良作用，例如超敏反应。有许多因素会影响蛋白质的免疫原性。一个关键的决定因素是内在表位的存在，它们可以触发导致抗体产生的T细胞依赖性事件。T细胞识别源自抗原呈递细胞(APC)中发生的蛋白质抗原加工的短肽片段。这些片段中的一些将与人白细胞抗原(HLA)/主要组织相容性复合物(MHC)II类分子形成复合物，并且如果足够稳定地结合，将被携带到APC的表面并呈递给T细胞。T细胞受体对非自身肽的识别会触发随后的免疫应答。
技术实现思路
本公开提供了一组新的唾液酸结合分子。本文所述的唾液酸结合分子可包含一个或更多个经修饰的碳水化合物结合模块(CBM)。如上所述，对于任何基于蛋白质的治疗剂，都存在与患者对生物制剂的免疫应答相关的不良作用的风险。该生物制剂可以引起抗药物抗体(ADA)的产生，其能够导致ADA与药物之间形成免疫复合物(IC)。此类复合物的存在可能会降低疗效，改变治疗剂的半衰期或可能引起不良作用，例如超敏反应。所公开的CBM已经经受过修改，以减少这些不良作用的风险。碳水化合物结合模块被分类为多个家族，并且被分类为家族40CBM(CBM40)的成员的CBM可用于制造本文所述的经修饰的分子。Family40CBM包含大约200个残基的分子，通常在GH33唾液酸酶的N端发现。还可以发现它们插入到GH33唾液酸酶的β-螺旋(propeller)中。这样，本文所述的唾液酸结合分子可包含一个或更多个经修饰的家族40碳水化合物结合模块(CBM40)。在整个说明书中，术语“包含”用于表示实施方案“包含”所提到的特征，像这样，还可以包含其他特征。然而，术语“包含”还可涵盖“基本上由相关特征组成”或“由相关特征组成”的实施方案。鉴于以上内容，本公开可以包括包含唾液酸结合组分的分子，例如较大的分子。如上所述，唾液酸结合组分(即唾液酸结合分子)本身可包括经修饰的CBM，例如，经修饰的CBM40(由其组成或基本上由其组成)。通过(非限制性)实施例，本公开的分子不仅可以表现出结合唾液酸的能力，而且可以具有一种或更多种其他功能。例如，该分子可以具有酶活性。例如，有用的分子可以包含经修饰的CBM(如本文所述)并表现出一些唾液酸酶活性。在一个实施方案中，CBM可以不作为具有酶促(例如唾液酸酶)活性的分子的一部分或包含在其中。有用的唾液酸结合分子可以是包含酶促部分和唾液酸结合部分的融合蛋白-其中所述唾液酸结合部分包含本文所述的经修饰的CBM。在这种情况下，酶促部分可以与所述唾液酸结合部分融合。如上所述，任何有用的融合蛋白的酶促部分可包含(或具有或表现出)唾液酸酶活性。术语“经修饰的”包括含有相对于参考序列的一个或更多个突变的分子。“参考序列”可以是任何野生型CBM序列。例如，参考序列可以包含野生型家族40CBM序列(例如，来自霍乱弧菌NanH唾液酸酶或肺炎链球菌NanA唾液酸酶的野生型CBM序列)，或基本上由其组成或由其组成(应理解，其他生物中存在的相似或同源CBM(包括CBM40)也包括在术语“CBM”的范围内和/或作为CBM参考序列)。因此，经修饰的CBM序列可以源自具体的或特定的野生型CBM。经修饰的CBM序列可包含野生型CBM序列，其包括一个或更多个突变。一个或更多个突变可以是功能性的-也就是说，它们可以单独地(和/或独立地)或共同地(例如协同地)调节(改变、改善或阻抑/抑制)野生型CBM(例如衍生出经修饰的CBM的野生型CBM)的一个或更多个生理学、生物学、免疫学和药理学特征。特别地，一个或更多个突变可以：(i)改变CBM的免疫原性(或抗原性)；和/或(ii)改变(例如改善)(CBM或包含经修饰的CBM的任何多聚分子的)功效；和/或(iii)它们可以调节(例如改善)CBM的热稳定性；和/或(iv)它们可以调节(例如改善)CBM的溶解度；和/或(v)它们可以调节(例如改善)该分子的体内半衰期。“突变”可以包括对野生型CBM分子的任何改变。例如，术语“突变”可以包括，例如：(i)一个或更多个氨基酸置换(其中一个或更多个野生型氨基酸被另一个(不同)氨基酸交换或改变，术语“置换”将包括保守氨基酸置换)；和/或(ii)一个或更多个氨基酸缺失(其中一个或更多个野生型氨基酸残基被去除)；和/或(iii)一个或更多个氨基酸添加/插入(其中其他氨基酸残基被添加到野生型(或参考)一级序列)；和/或(iv)一个或更多个氨基酸/序列倒位(其中通常是一级序列中两个或更多个连续氨基酸被倒位)；和/或(v)一个或更多个氨基酸/序列重复(其中一级氨基酸序列的氨基酸或一部分(例如一段5-10个氨基酸)被重复)。如上所述，根据本专利技术的经修饰的CBM可包含本文所述的一个或更多个突变。一种示例性的野生型CBM(换句话说，可以从其获得有用的经修饰的CBM的参考序列)是肺炎链球菌NanA唾液酸酶-其氨基酸序列已经以登录号P62575登记并在下面以SEQIDNO：1(1035个氨基酸)再现。SEQIDNO：1SEQIDNO：1的CBM区是从氨基酸残基121到305-该序列被指定为SEQIDNO：2(该序列为：).因此，本公开提供了包含SEQIDNO：2(和/或SEQIDNO：1)的修饰形式的唾液酸结合分子。SEQIDNO：2的修饰形式可包含一个或更多个突变残基，所述突变是例如相对于SEQIDNO：2的序列进行的氨基酸置换、添加/插入、重复、缺失和/或倒位。示例性霍乱弧菌NanH唾液酸酶氨基酸序列在登录号A5F7A4下登记，并在下文以SEQIDNO：3(781个氨基酸)再现。SEQIDNO：3SEQIDNO：3的CBM区是从氨基酸残基25到216-该序列可以是SEQIDNO：4(该序列是：)因此，本公开提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.唾液酸结合分子，其包含一个或更多个经修饰的家族40碳水化合物结合模块(CBM40)。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180109 GB 1800334.31.唾液酸结合分子，其包含一个或更多个经修饰的家族40碳水化合物结合模块(CBM40)。


2.权利要求1所述的唾液酸结合分子，其中所述一个或更多个经修饰的CBM40含有相对于参考序列的一个或更多个突变。


3.权利要求1或2所述的唾液酸结合分子，其中所述参考序列选自由以下组成的组：
(i)野生型家族40CBM序列；
(ii)来自霍乱弧菌(Vibriocholera)的野生型CBM40序列；
(iii)霍乱弧菌的NanH唾液酸酶序列；
(iv)来自肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)的野生型CBM40序列；
(v)肺炎链球菌的NanA唾液酸酶序列；
(vi)SEQIDNO：1的序列；
(vii)SEQIDNO：2的序列；
(viii)SEQIDNO：3的序列；和
(ix)SEQIDNO：4的序列。


4.前述权利要求中任一项所述的唾液酸结合分子，其中所述突变选自由以下各项组成的组：
(i)一个或更多个氨基酸置换；
(ii)一个或更多个氨基酸缺失；
(iii)一种或更多种氨基酸添加/插入；
(iv)一个或更多个氨基酸/序列倒位；和
(v)一个或更多个氨基酸/序列重复。


5.前述权利要求中任一项所述的唾液酸结合分子，其中所述唾液酸结合分子包含经修饰的寡聚结构域。


6.权利要求5所述的唾液酸结合分子，其中所述经修饰的寡聚结构域含有相对于参考序列的一个或更多个突变。


7.权利要求5或6所述的唾液酸结合分子，其中所述参考序列选自由以下各项组成的组：
(i)野生型铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)假氨酸酶序列；
(ii)以登录号Q9L6G4登记的铜绿假单胞菌假氨酸酶氨基酸序列；
(iii)SEQIDNO：13的序列；和
(iv)...

【专利技术属性】
技术研发人员：海伦·加那利斯，简·亚历山德拉·波特，
申请(专利权)人：普纽玛根有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB