多肽SE37突变体在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于多肽药物领域，公开了多肽SE37突变体在制备抗肿瘤药物中的应用，所述多肽SE37突变体的氨基酸序列为：SETRLVLNRLFDKIRQVIRKFEKGIKEKSKRFFDGLL。所述抗肿瘤药物为促肿瘤细胞凋亡药物。本发明专利技术所述多肽SE37突变体对正常细胞的毒性小，安全性高；且对包括肺癌、结直肠癌、卵巢癌和乳腺癌在内的多种肿瘤细胞具备良好的抑制和杀伤效果。

【技术实现步骤摘要】
多肽SE37突变体在制备抗肿瘤药物中的应用
本专利技术属于多肽药物领域，尤其涉及多肽SE37突变体在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
抗癌肽(ACPs)是由10-60个氨基酸组成的一系列肽链，其两亲的结构通常由阳离子面和疏水面组成，这对于促进肽与靶细胞的相互作用是必需的。ACPs可抑制肿瘤细胞的增殖或迁移，或抑制肿瘤血栓的形成，同时不容易引起肿瘤细胞的耐药性，上述优点使得ACPs成为最有前途的抗癌候选药物。与一般抗癌药物相比，ACPs不仅具有更为高效的抗肿瘤活性，且对正常细胞的毒副作用较低，也不易产生耐药性。当然，并不是所有的ACPs都能作为抗癌药物进行研究，大多数的ACPs会存在以下缺点，例如半衰期短、易被蛋白酶水解、毒性较强，靶向性较差等，不能满足对理想抗癌肽的需求。因此，还需要针对不同类型的肿瘤，继续研发新的抗肿瘤效果好，且对正常细胞毒性低的抗癌肽。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出多肽SE37突变体在制备抗肿瘤药物中的应用，所述多肽SE37突变体对正常细胞的毒性较小，但对肺癌、结直肠癌、卵巢癌和乳腺癌等肿瘤细胞具有良好的杀伤效果。多肽SE37突变体及其在药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用，所述多肽SE37突变体的氨基酸序列为：SETRLVLNRLFDKIRQVIRKFEKGIKEKSKRFFDGLL。所述多肽SE37突变体含有37个氨基酸残基，相对分子量大小为4509.41，疏水性为-0.33，亲水性为0.57，净电荷为66。所述多肽SE37突变体为申请人自主研发和设计的多肽链，可通过常规的化学合成法进行合成，具有合成方便，迅速的特点。所述多肽SE37突变体是以抗菌肽SE37(其氨基酸序列为：SETRPVLNRLFDKIRQVIRKFEKGIKEKSKRFFDGLL)为模板，通过氨基酸替换所得到的突变体。申请人为提高所述抗菌肽SE37的性能，对该肽链进行了一个至多个氨基酸的替换，从而得到了一系列的改造肽。最初的试验仅发现该一系列的改造肽具有一定的抗菌效果。但进一步的研究发现，其中部分肽段还能产生一定的抗肿瘤效应。试验结果表明在众多肽链中，SE37对多种肿瘤和正常细胞的毒性均较大，因此安全性和成药性有待进一步提高；而所述多肽SE37突变体对正常细胞的毒性轻微，同时对多种肿瘤细胞产生良好的杀伤效果，其综合性能尤为突出，可作为药物活性成分以制备抗肿瘤药物，使得多肽SE37突变体能获得更具价值的应用。优选的，所述多肽SE37突变体在药学上可接受的盐包括乙酸盐或柠檬酸盐。为了提高多肽药物的稳定性或溶解性，因此可将多肽SE37突变体制为乙酸盐或柠檬酸盐的形式。优选的，所述抗肿瘤药物为促肿瘤细胞凋亡药物。实验表明，多肽SE37突变体可通过促进肿瘤细胞的凋亡，尤其是通过线粒体凋亡途径以实现抑制肿瘤细胞生长的作用。优选的，所述肿瘤为肺癌、结直肠癌、卵巢癌或乳腺癌中的至少一种。更优选的，所述肿瘤为肺癌。一种抗肿瘤药物，包括多肽SE37突变体和/或其在药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。优选的，所述药学上可接受的辅料为溶剂、润湿剂、乳化剂、增稠剂、赋形剂、悬浮剂、崩解剂、填充剂、润滑剂或稀释剂中的至少一种。优选的，其剂型为片剂、注射剂、喷雾剂、冻干粉针剂、胶囊或包衣药丸。更优选的，所述药物组合物为注射剂时，所述注射剂中多肽SE37突变体的质量浓度为1-20mg/mL。由于所述多肽SE37突变体属于多肽药物，易被降解和较难穿越肠黏膜，口服可能会降低其药效，因而将多肽SE37突变体制备为注射剂的形式，更有助于药物成分的吸收利用。相对于现有技术，本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术所述多肽SE37突变体对正常细胞的毒性小，安全性高。(2)本专利技术所述多肽SE37突变体对包括肺癌、结直肠癌、卵巢癌和乳腺癌在内的多种肿瘤细胞具备良好的抑制和杀伤效果，可用于制备相应的抗肿瘤药物。附图说明图1表示SE37对A549细胞凋亡的影响；图2表示SE37突变体对A549细胞凋亡的影响；图3表示SE37对A549细胞线粒体膜电位的影响；图4表示SE37突变体对A549细胞线粒体膜电位的影响；图5表示SE37对A549细胞内ROS的影响；图6表示SE37突变体对A549细胞内ROS的影响；图7表示SE37和SE37突变体对A549细胞凋亡途径相关基因表达量变化的影响；图8表示SE37和SE37突变体对A549细胞线粒体凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达量的影响具体实施方式为了让本领域技术人员更加清楚明白本专利技术所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例对本专利技术要求的保护范围不构成限制作用。以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。主要材料和仪器多肽的合成：实验中所用多肽SE37突变体和多肽SE37由上海淘普生物科技有限公司合成，合成方法为化学固相合成法，纯度均在95％以上。A549(人肺癌细胞)、HCT-8(人结直肠腺癌细胞)、SKVO3(卵巢癌细胞)、MCF-7(乳腺癌细胞)和HK2(人肾小管上皮细胞)细胞株均从中科院上海细胞库中购买，所需实验材料为：RPMI-1640基础培养基；DMEM基础培养基；F12培养基；胎牛血清；氨苄青霉素和链霉菌素；DMSO；Annexinv-FITC双染试剂盒；低分子量蛋白Maker；胰蛋白酶；PBS；MTT；高效RIPA组织/细胞裂解液；阳性多肽药物LL37；PMSF；蛋白定量(BCA)测试试剂盒；活性氧检测试剂盒；线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)；DEPC水；Trizol；丙三醇；氯仿。实施例1一种多肽SE37突变体，其氨基酸序列为：SETRLVLNRLFDKIRQVIRKFEKGIKEKSKRFFDGLL，可应用于制备抗肿瘤药物。实施例2：MTT法检测SE37突变体对肿瘤细胞和正常细胞增殖的影响细胞复苏：将A549、HCT-8、SKVO3、MCF-7和HK2细胞株冻存管于液氮罐中取出，并放置于37℃水浴锅摇晃至融解。将融化后的细胞株于无菌超净台中分别吸出至15mL规格的无菌离心管中，1000r/min离心5min，去上清；在HCT-8和MCF-7中分别加入5mL新鲜的RPMI-1640完全培养基；在A549中加入DMEM完全培养基；在HK2中加入DMEM/F12(1:1)完全培养基。最后分别转移至规格为25cm2的无菌培养瓶，于5％CO2、37℃条件下培养。细胞传代：用显微镜观察细胞，细胞形态正常，且生长密度达到90％左右时进行细胞传代。首先把含细胞的培养瓶取出放入超净台中，吸出原培养基，用PBS缓冲液洗涤细胞2次，吸净PBS后加入600μL胰酶，使其能完全覆盖培养瓶瓶底，拧紧瓶盖后置于37本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多肽SE37突变体及其在药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述多肽SE37突变体的氨基酸序列为：SETRLVLNRLFDKIRQVIRKFEKGIKEKSKRFFDGLL。/n

【技术特征摘要】
1.多肽SE37突变体及其在药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述多肽SE37突变体的氨基酸序列为：SETRLVLNRLFDKIRQVIRKFEKGIKEKSKRFFDGLL。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述多肽SE37突变体在药学上可接受的盐包括乙酸盐或柠檬酸盐。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为促肿瘤细胞凋亡药物。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的应用，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨愈丰，谢明峰，刘迪嘉，夏前英，
申请(专利权)人：遵义医科大学珠海校区，
类型：发明
国别省市：广东;44