一种临床检验小儿骨碱性磷酸酶体外诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种临床检验小儿骨碱性磷酸酶体外诊断试剂盒，它是由全血干化学免疫浓缩反应装置（试条）。样品稀释液，显色剂等组成，其优点是：简便－用３０μｌ全血做样品，不必分离血清；快速－取血后在１０分钟内即可查出小儿是否患有佝偻病；特异－肝，胆碱性磷酸酶的交叉反应小于５％；稳定－试条及配套试剂在４℃下保存期一年以上；微量－只用３０μｌ全血；用本发明专利技术药盒对小儿佝偻病诊断的准确率为８６. ９％，高于其它方法测试该病的准确度，是目前诊断小儿佝偻病最简便可靠的血液生化指标。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种临床检验小儿佝偻病体外诊断试剂盒。小儿佝偻病是我国重点防治的小儿四大疾病之一。以往诊断此病常用X线摄像和血液生化检查。早期病人用X线摄像检查不易被发现;采用血液生化检查，不仅其可靠性较差，而且需从静脉取血，不易被家长和患儿接受。在一些条件较差的医院只能凭藉临床医生的经验诊断，容易造成误诊和漏诊。八十年代初，Rosalki等建立了凝集素亲和电泳，亲和沉淀检测骨碱性磷酸酶的方法，从而改善了其特异性。但因价格昂贵，不利于临床上推广普及。本专利技术旨在为临床诊断小儿佝偻病提供一种简便、快速、特异和敏感的试剂药盒。本专利技术的设计是由全血干化学免疫浓缩反应装置(试条)，样品稀释液，显色剂A液，显色剂B液以及一次性定量取样管，标准比色板，使用说明书组成。一.全血干化学免疫浓缩反应装置(试条)是由血浆分离转运膜，样品处理垫，反应膜，吸附垫，保护膜，塑料基托和平衡垫组成。附图说明图1全血干化学免疫浓缩反应装置(试条)平面俯视2试条A-A′面的剖面3附图2的部分放大4试条中血浆分离转运膜的俯视中1加样孔 2样品处理垫 3反应膜 4吸附垫 5血浆分离转运膜 6保护膜 7塑料基托 8平衡垫图5全血干化学免疫浓缩反应装置(试条)制备工艺图试条的基本构成材料及试条制备工艺如下(见图5)反应膜将硝酸纤维膜(NC)经平衡处理后，印渍上含有5-7mg/mlUA-Ⅰ(圆豆凝集素同工凝集素Ⅱ)的印渍液，在4℃干燥，再经4-5%牛血清白蛋白第五部分(BSA.V)的100mmol MES缓冲液封闭4小时，PH值6.0-6.5，在18℃条件下封闭4小时，再用洗涤剂含0.9%的NaCl100mmol MES缓冲液洗涤，PH值6.0-6.5，然后在保护液中浸泡，在4℃下干燥，即成为反应膜(图3-3)。塑料基托 由PCV硬片制成，并在其上打孔10个(图3-8)。平衡垫 由PCV软片，单面不干胶，双面不干胶制成，并在其上打孔100个(图3-9)。样品处理垫将K49-2滤膜浸透样品处理液，在4℃下干燥，用冲裁模具压模制成圆片(图3-2)。样品处理液的组成成分为50-100mmolMES缓冲液，1-5mmol的Mg2+，PH值6.0-6.5。吸附垫膜材料AP20，AP15滤膜，经专用冲裁模具加工成圆片，即成为吸附垫(图3-4)。血浆分离转运膜 由膜材料K6902号滤膜制成。设计的形状和规格可实现血浆快速分离并定向转移至处理垫(图3.4中5，6)。保护膜锡泊包装纸，用冲裁模具打一排10个孔(图3-7)。将上述试条的各部分按图5的顺序用市售压膜双面不干胶粘贴为一体并切割成形。二.样品稀释液的组成10mmol MES缓冲液，Mg2+1-5mmol，PH值6.0-6.5。三.显色剂A液。显色剂B液A液含二乙醇胺(DEA)800mmol，Mg2+5mmol，溴氯吲哚磷酸盐(BCIP)1.0mmol。pH10.1，B液含二乙醇胺(DEA)800mmol，Mg2+5mmol，硝基氯化四氮唑兰(NBT)1.0mmol，临用前将A液，B液等量混合。其操作步骤是将30μl的全血滴加在试条的加样孔中，从图1至图4可以看出，血浆和血球在分离转动膜上分离，血浆定向转运至样品处理垫上，与预先固定在垫内的处理剂发生反应，达到反应所需的条件并与反应膜接触，通过吸附垫的毛细作用，使样品分次通过反应膜。样品中的骨碱性磷酸酶和固相在反应膜上凝集素UA-Ⅰ在流动过程中发生反应。洗去其他血浆成份，加入药盒中的显色剂显色，再与标准比色板对比，半定量读出血中骨碱性磷酸酶催化浓度。正常小儿的血浆无呈色反应，佝偻病患儿依其患病程度呈不同程度的紫色反应。本专利技术的优点和积极效果是简便-用30μl全血做样品，不必分离血清，不用其他特殊仪器，快速-取血后在10分钟内即可查出小儿是否患有佝偻病，特异-肝，胆碱性磷酸酶的交叉反应小于5%。稳定-试条及配套试剂在4℃下保存期一年以上。微量-只用30μl全血，克服了婴幼儿取血不易的困难。用本专利技术药盒对小儿佝偻病诊断的准确率为86.9%，高于用碱性磷酸酶总活性，25羟维生素D3(75.0%)，血钙(48.4%)，血磷(46.9%)等方法测试该病的准确度;用本专利技术药盒对早期患病人的检出率达到50.3%，低于25羟维生素D3(53.1%)，但高于用碱性磷酸酶总活性(42.7%)。X线摄像(25.1%)。血磷(9.1%)。血钙(6.9%)的检出率，是目前诊断小儿佝偻病最简便可靠的血液生化指标。权利要求1.一种临床检验小儿骨碱性磷酸酶体外诊断试剂盒，其特征在于它是由全血干化学免疫浓缩反应装置(试条)、样品稀释液、显色剂所组成。2.按照权利要求1所说的试剂盒，其特征是试条系由血浆分离膜、血浆转运膜、样品处理垫、反应膜、吸附垫、保护膜、塑料基托和平衡垫组成。3.按照权利要求2所说的试剂盒，其特征是试条的反应膜是将硝酸纤维膜(NC)经平衡处理后，印渍上含有5～7mg/mlUA-Ⅰ的印渍液，在4℃干燥，再经4～5%牛血清白蛋白第五部分(BSA·V)的100mmol MES缓冲液封闭，PH值6.0～6.5，在4℃下干燥。4.按照权利要求2所说的试剂盒，其特征是试条的塑料基托由PCV硬片制成，并在其上打10个孔。5.按照权利要求2所说的试剂盒，其特征是试条的平衡垫由PCV软片、单面不干胶、双面不干胶制成，并在其上打孔100个。6.按照权利要求2所说的试剂盒，其特征是试条的样品处理垫是将K49-2滤膜浸透样品处理液，在4℃下干燥，用冲裁模具压模制成圆片，样品处理液的组成成分为50～100mmol MES缓冲液，1～5mmol的Mg2+下配制而成，PH值6.0～6.5。7.按照权利要求2所说的试剂盒，其特征是试条的吸附垫膜材料是用AP20、AP15滤膜经专用冲裁模具加工制成圆片。8.按照权利要求2所说的试剂盒，其特征是试条的血浆分离转运膜由膜材料K6902号滤膜制成，设计的形状和规格可实现血浆快速分离并定向转移至处理垫。9.按照权利要求2所说的试剂盒，其特征是试条的保护膜是锡泊包装纸，用冲裁模具打一排10个孔。10.按照权利要求2所说的试剂盒，其特征是试条的按全血干化学免疫浓缩反应装置(试条)制备工艺图，将试条的各部分顺序粘贴为一体，并切割成形。11.按照权利要求1所说的试剂盒，其特征是样品稀释液的组成为10mmol MES缓冲液、1～5mmol的Mg2+，PH值6.0～6.5。12.按照权利要求1所说的试剂盒，其特征是显色剂是由A液和B液组成，其中A液含二乙醇胺(DEA)800mmol，Mg2+5mmol，溴氯吲哚磷酸盐(BCIP)1.0mmol.pH10.1，B液含二乙醇胺(DEA)800mmol，Mg2+5mmol，硝酸氯化唑兰(NBT)1.0mmol，临用前将A液、B液等量混合。全文摘要本专利技术涉及一种临床检验小儿骨碱性磷酸酶体外诊断试剂盒，它是由全血干化学免疫浓缩反应装置(试条)。样品稀释液，显色剂等组成，其优点是简便—用30μl全血做样品，不必分离血清；快速—取血后在10分钟内即可查出小儿是否患有佝偻病；特异—肝，胆碱性磷酸酶的交叉反应小于5％；稳定—试条及配套试剂在4℃下保存期一年以上；微量—只用30μl全血；用本专利技术药盒对小儿佝偻本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种临床检验小儿骨碱性磷酸酶体外诊断试剂盒，其特征在于它是由全血干化学免疫浓缩反应装置（试条）、样品稀释液、显色剂所组成。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：王加义，文庆成，
申请(专利权)人：北京协和医药科技开发总公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]