用于血红蛋白测量和白细胞区分的不含氰化物的试剂及其方法技术

一种不含氰化物离子的试剂组合物和一种用于测量血液样品中的血红蛋白浓度的方法。此外，根据试剂组合物和血液样品的同一反应产物，试剂组合物可以用于测量血红蛋白的浓度和区分至少两种白细胞种类。试剂组合物包括至少一种选自季铵盐、吡啶＊盐和其混合物的、含量足够溶解红细胞并洗提血红蛋白的溶胞剂，和一种其有效含量能够把释放的血红蛋白转化成血色原的防氧化剂。可用一种ｐＨ值调节剂调节ｐＨ值，从而提供范围在５～１１．５的ｐＨ值。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
该专利技术关于一种用于测量血液中总的血红蛋白的试剂及其方法，其中该试剂不含氰化物和铁氰化物离子。此外，该试剂及其方法能够利用适当的电子设备在一个血样中对全部白细胞进行计数并确定至少两种白细胞。血液样品中白细胞和血红蛋白的测量对诸如白血病和贫血症等疾病的临床诊断极为重要。为理解和解释该专利技术起见，定义下列术语。1、血红蛋白----含在红细胞中，在血液中作为氧的载体。它是一种有色蛋白质，由四个血红素基团组成两个α和两个β珠蛋白链。2、血红素基团----与氧相结合的能力依赖于血红素基团的存在。它也使血红蛋白具有特殊的颜色。血红素由一个称之为原卟啉的有机部分和一个铁原子组成。血红素中的铁原子在原卟啉环的中心与四个氮原子相结合。铁原子可以是亚铁状态，二价或是氧化铁状态，三价。3、高铁血红蛋白(符号为Hi)----铁原子被氧化成三价铁的血红蛋白。替代术语为正铁血红蛋白和高价铁血红蛋白。4、高铁血红蛋白氰化物----铁原子被氧化为三价铁并且已与氰化物离子相络合的高铁血红蛋白。替代术语为氰化正铁血红蛋白，氰化高铁血红蛋白和正铁血红蛋白氰化物。5、血红蛋白类型----所有通常在循环血液中存在的铁血红蛋白衍生物。包括脱氧血红蛋白(Hb)、氧合血红蛋白(HbO2)、血红蛋白S和血红蛋白A2、碳氧血红蛋白(HbCO)、高铁血红蛋白(Hi)。6、确定血液中的血红蛋白的NCCLS(临床试验标准国家委员会)参考步骤(H15-A Vol.4 No.3)。一个适用于通过高铁血红蛋白氰化物的方法测量血红蛋白浓度的所有临床试验人员和仪器、试剂和材料的生产者的标准过程。7、血红蛋白测量----可根据血液的某些诸如比重和折射率等物理特性、血红蛋白分子的化学组成、血红蛋白结合氧、一氧化碳、硫等的能力以及血红蛋白的衍生物的波谱特性来测量全部血红蛋白浓度。8、血红蛋白稳定剂----在血红蛋白测量期间，用于保持血红蛋白衍生物或所形成的色原稳定的物理化学特性(化学结构、光学密度等)的化学化合物。通常用自动血液分析仪来对血液样本中的白细胞进行记数和区分，利用自动血液分析仪来对白细胞进行记数时，首先用一种等渗稀释剂将整个血液样品稀释，并加入一种红细胞溶解剂将样品中的红细胞溶解，得到含有白细胞的样品。然后，样品通过分析仪检测部分的一个细小的通道或一个精细的小孔。根据响应所通过的单个白细胞而产生的检测信号对白细胞进行记数，并对其进行区分。等渗透稀释剂的进一步说明包含在美国专利3,962,125、4,346,018和4,521,518中。红细胞溶胞剂的进一步说明包含在美国专利3,874,852、4,528,274、3,874,852、4,346,018和4,485,175中。例如，美国专利4,346,018讲授一种等渗透多用途血液稀释剂和利用该溶胞剂系统区分两类白细胞的方法。美国专利4,485,175讲授了一种用季铵盐作为稀释剂和COULTERCOUNTER Model S-plus自动血液记数仪(佛罗里达迈阿密的考尔特(COULTER)公司的注册商标)对淋巴细胞、单核白细胞和粒性白细胞三类白细胞的区分的方法和试剂系统。美国专利4,485,175也讲授到，为形成一种用于测量血红蛋白的合适色原，也可用一种碱金属氰化物，例如氰化钾。已经用氰化高铁血红蛋白的方法进行血红蛋白浓度的测量。根据这种方法，在血液样品中加入一种含有非离子表面活性剂的红细胞溶解剂，以降低红细胞的细胞膜引起的混浊度。被释放的血红蛋白被一种氧化剂的作用所氧化，诸如铁氰化钾氧化剂，以产生高铁血红蛋白。接着，氰化物离子与高铁血红蛋白相结合形成氰化高铁血红蛋白(HiCN)，可产生一种稳定的血红蛋白测量样品。用一个预定波长来测量氰化高铁血红蛋白样品的吸收。这种方法作为确定血红蛋白浓度的标准方法而被广泛采用。虽然用氰化高铁血红蛋白的方法形成的化合物一旦形成后是一种极稳定的物质，但使用一种氧化剂对红细胞的氧化要用10多分钟的时间来完成使用Drabkins试剂的氧化。此外，红细胞的溶解、血红蛋白的稀释和红细胞及血小板膜的溶解比自动仪器所要求的慢一些。为满足自动血液分析仪的时间要求，以往的方法是使用含有氰化物离子的红细胞溶解剂，它可以形成稳定的血色原，并具有一个类似于氰化高铁血红蛋白的吸收频谱。红细胞溶解剂也减少了细胞溶解、血红蛋白洗提和细胞膜溶解的时间需要。此外，必须用一种适当的方法，如次氯酸钠，对无用的液体进行去毒和处理，这是极其费力的工作。由于这个原因，也利用另外一种所熟知的氧合血红蛋白方法。在氧合血红蛋白方法中，红细胞被用于溶解红细胞并释放血红蛋白的非离子表面活性物质所溶解。血红蛋白被释放，并以氧合血红蛋白的形式(HbO2)对其进行测量。用预定波长来测量氧合血红蛋白的吸收。因为氧合血红蛋白法不用氰化物，所以在处理试剂时不存在危险，也不需要进行麻烦的废液的处理操作。然而，传统的氧合血红蛋白方法具有一个溶解剂不仅溶解红细胞，而且也使白细胞变得很小的缺陷。这对于吸收测量是有利的，因为它减小了白细胞引起的光散射，但在另一方面，它使得用溶胞剂对多于两种白细胞的测量变得非常困难。为避免这个问题，使用氧合血红蛋白方法的自动血液样品分析仪，通过将一个样品送到两个检测部分为红细胞和白细胞的测定单独准备样本，一个用于红细胞的测量，一个用于白细胞的测量。然而，由于不仅需要两个单独的检测部分，而且也需要两套流水线来准备测量用的样本，所以这种方法有需要昂贵而复杂设备的缺点。另外，使用氧合血红蛋白方法，不能精确地测量高铁血红蛋白含量高的血液样本，这是因为高铁血红蛋白并不是很容易地可以转化为氧合血红蛋白的。当使用对照血液时，高铁血红蛋白含量非常重要。对照血液通常用于控制自动血液分析仪的分析精度。对照血液通常存放在制冷状态，而且长时间具有稳定的血红蛋白浓度。然而在高于室温的储存期间，血液中的血红蛋白慢慢地转化为高铁血红蛋白。因此，当用氧合血红蛋白方法测量高于22℃储存的对照血液时，无法测量已转变为高铁血红蛋白的血红蛋白部分，因此经过几天之后，血红蛋白的测量值会变得慢慢低于初始值。解决该问题的方法是使用一种十二烷基硫酸钠或等量的月桂基硫酸钠(SLS)、一种阴离子表面活性剂和Triton X-100----一种非离子表面活性剂在中性缓冲溶液(pH值为7.2)中的试剂来测量血红蛋白。这种方法由Oshiro等在《临床生物化学》的第15卷83(1982)中讲授。在该方法中，由SLS和Triton X-100的作用将红细胞溶解，而洗提出的血红蛋白被转化成SLS血红蛋白。因此，可以在不受高铁血红蛋白影响情况下进行血液中血红蛋白浓度的测量，而且因为不使用氰化物，没有必要进行对废液处置的特殊工艺。然而，不可能用该方法从同样处理的血液样本中进行白细胞区分和血红蛋白浓度的测量。在一个需要把洗提出的血红蛋白转化成SLS血红蛋白的SLS浓度下白细胞被溶解，使得不能与血红蛋白的测量同时进行。美国专利5,250,437和5,242,832教授了这些问题的其他解决方法。这些公开出版物提到，为了测量血红蛋白的浓度，用合适的红细胞溶解剂通过可洗提红细胞中的血红蛋白的季铵盐的主要作用有选择地溶解红细胞。几乎同时，被洗提的血红蛋白变性，即其空间结构被改变，并且血红蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于测量血液样品中的血红蛋白浓度的不含氰化物离子的试剂组合物，包括： ａ．包括至少一种选自季铵盐、吡啶＊盐和其组合物的溶胞剂，溶胞剂的含量能有效地充分溶解红细胞并释放血红蛋白；和 ｂ．一种含量可有效地将释放的血红蛋白转化成血色原的防氧化剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：M里斯格，C扬，
申请(专利权)人：库特国际公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]