本发明专利技术提供一种在不依赖有机溶剂的条件下通过暴露用于组织化学或细胞化学染色过程的生物学标本除去或浸蚀包埋介质的自动方法。此方法包括生物学标本片与热平台接触，加热或不加热，用或不用液体，使从生物学标本上除去或浸蚀包埋介质更容易。本发明专利技术还提供一种用于生物学标本调节细胞状态的自动方法，其中细胞被预处理以使组织化学或细胞化学染色过程中的试剂分子进入。此方法包括生物学标本片与热平台接触，加热或不加热，用或不用液体，使分子易于进入生物学标本内的细胞和细胞组分中。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
涉及的有关申请本项申请要求以下申请的优先权于1998年9月3日提交的美国临时专利申请第60/099,018号，名为自动免疫组化仪器上从组织标本中除去包埋介质并调节细胞及组织的状态(在此引入作为参考)。本项申请还要求以下申请的优先权于1999年2月26日提交的美国专利申请序号第09/259,240号，名为具有独立切片加热器的自动分子病理学器械(在此引入作为参考)。本项申请还要求以下申请的优先权于1999年2月26日提交的PCT专利申请第PCT/US99/04181号，名为具有独立切片加热器的自动分子病理学器械(在此引入作为参考)。
技术介绍
相关领域简述过去几年中根据患病器官上取材的组织或细胞标本的分析结果诊断的疾病急剧增多，除了传统的组织学染色技术和免疫组化鉴定，原位技术如原位杂交和原位聚合酶链式反应现均已用于辅助诊断人类疾病状态。因此，有多种技术不仅可以评定细胞形态，而且可以评定细胞内或组织内特殊大分子的存在。这些技术的每一项都需要制备样品细胞或组织，它可能包括用化学药品，如醛(例如甲醛，戊二醛)，福尔马林代替物，醇类(例如乙醇，甲醇，异丙醇)来固定标本或把标本包埋于惰性物质中例如石蜡，火棉胶，琼脂，聚合物，树脂，致冷介质或各种塑料包埋介质(例如环氧树脂和丙烯酸类树脂)。其他样品组织或细胞制剂需要物理处理例如冷冻(冰冻组织切片)或通过细针头抽吸(细针针吸活检(FNA))。不考虑组织或细胞标本或其制备、保存方法，技术专家的目的是获得准确的清楚的可重复的结果其允许对数据的精确解释。提供准确的、清楚的可重复的数据的一种方法是以一种方式制备组织或细胞，它使不管实验运用何种技术都可以使实验结果尽可能优化。这在免疫组化和原位技术情况下意味着增加了从特异探针(抗体，DNA,RNA)获取的信号数量。在免疫组化染色情况下它意味着增加了染色的强度或增加了染色的对比度。不经防腐，组织标本迅速变质因此它们从主体脱离后不久在诊断学上的应用性即降低。1893年，Ferdinand Blum发现甲醛可用于保存或固定组织以使这种组织可用于组织化学过程。甲醛在固定组织中发挥作用的确切机制未完全确定，但它们参予同一蛋白内和不同蛋白之间的反应位点经亚甲桥的交联(Fox等，组织化学和细胞化学杂志，33:845-853(1985))。最近证据表明钙离子也起了作用(Morgan等，症理学杂志174:301-307(1994))。这些键连接引起蛋白质的四级和三级结构改变，但初级和二级结构看来被保留(Mason等，组织化学和细胞化学杂志，39:225-229(1991))。交联反应发生的程度依赖于多种条件诸如福尔马林的浓度，pH值，温度和固定的长度(Fox等，组织化学和细胞化学杂志33:845-853(1985))。一些抗原，例如胃泌素，生长激素抑制因子，2-1-抗胰蛋白酶，在福尔马林固定后可被检测出，但对于多数抗原，例如中间体丝和白细胞标志，免疫检测在福尔马林处理后失败或明显减少(McNicol和Richmond，组织病理学32:97-103(1998))。抗原免疫反应性的丧失在不连续的抗原决定簇，即形成抗原决定簇依靠的蛋白质序列中非邻近部分交汇点的氨基酸序列最明显。抗原修复TM指使结构变化复原的努力，所述结构变化是用交联剂处理组织诱导的组织内抗原存在部位的结构改变。尽管有几种理论试图描述抗原修复TM的机制，例如解开或破坏由福尔马林固定形成的交联，但已很清楚，由福尔马林引起的蛋白质结构的改变在一些条件下如高温加热时是可逆转的。已清楚有几种因素影响抗原修复TM加热，pH值，溶液的摩尔浓度和溶液中的金属离子(Shi等，组织化学和细胞化学杂志45:327-343(1997))。对福尔马林固定所掩盖的抗原的恢复，微波加热呈现为最重要的因素。微波加热(100°±5℃)在抗原修复TM免疫组化(AR-IHC)中通常产生较好结果。用于在IHC中抗原修复的不同加热方法已有报道例如高压蒸汽法(Pons等，应用免疫组织化学，3:265-267(1995)；Bankfalvi等，病理学杂志，174:223-228(1994))，加压蒸气速煮(Miller和Estran，应用免疫组织化学，3:190-193(1995)；Norton等，病理学杂志，173:371-379(1994))；水浴(Kawai等，Path.Int.44:759-764(1994))，微波加塑性加压蒸气速煮(美国专利号；Taylor等(1995)；Pertschuk等，细胞生物化学杂志，19(增刊)134-137(1994))，和蒸汽加热(Pasha等，实验研究(Lab.Invest.)72:167A(1995)；Taylor等，CAP Today 9:16-22(1995))。尽管在蒸馏水中进行微波加热时一些抗原产生满意的结果，但多数抗原在加热过程中需要应用缓冲液。某些抗原具有特殊的pH值要求例如仅在很小的pH值范围内才能得到满足要求的结果。目前，多数抗原修复TM溶液在pH值大约6-8时使用，但某些指征表明略微偏碱的溶液可以提供一定程度上略好的结果(Shi等，组织化学和细胞化学杂志，45:327-343,(1997))。尽管包括金属离子在内的抗原修复TM溶液的化学成分可能在微波过程中作为可能的辅助因子起作用，至今，尚未鉴定出对抗原修复TM既是必需的又是最好的一种化学药品。许多溶液和方法常规用于增强染色。它们可能包括但不局限于以下这些蒸馏水，EDTA，尿素，Tris，甘氨酸，生理盐水和柠檬酸盐缓冲液。包含各种去污剂(离子的或非离子表面活性剂)的溶液可能也能在很宽的温度范围(从室温到超过100℃)内促进染色增强。除了可能存在于细胞外部的细胞表面分子，可在IHC,ISH和其他组织化学和细胞化学操作中检测的其他分子位于胞内，经常位于核膜上。这些分子中的一些在暴露于象福尔马林等固定液(促凝固的或促沉淀的)时会发生分子变形。因此就这些分子而言，不仅需要克服固定作用的影响而且需要增加细胞通透性以促进有机和无机化合物与细胞的相互作用。其他组织标本在实验前可能未经受交联剂处理，但就这些组织而言改善结果也是重要的。有种种非福尔马林方法用于保存和制备细胞学和组织学标本。这些方法的实例包括但不局限于以下a)血液学涂片，CytospinsTM,ThinPrepsTM,touch preps，细胞系，淋巴细胞的Ficoll分离物和棕黄层等用许多方式常规保存，这些方式包括但不局限于风干，酒精固定，喷雾固定液和贮存于蔗糖/甘油等贮存基质中。b)将组织和细胞(固定的和未固定的)冷冻，随后进行各种稳定技术例如防腐，固定和干燥。c)组织和细胞可以稳定在非交联醛类固定剂，包含非醛类的固定剂，醇类固定剂，氧化剂，重金属固定剂，有机酸和转移介质中。改善实验结果的一种方式是增强从指定标本上获得的信号。一般说来，增强的信号可通过使指定分子更易进入其靶目标而获得。对胞内发现的抗原而言，通过增加细胞通透性可以使胞内的靶目标变得更易接近，增加细胞通透性因而允许更多分子进入细胞，也因而增加分子发现它的靶目标的可能性。这种增强的通透性对诸如ISH，原位PCR,IHC，组织化学和细胞化学等技术尤其重要。组织和细胞也要被包埋于多种惰性介质中(石本文档来自技高网...
【技术保护点】
在生物学染色过程中从生物学标本上除去包埋介质的自动方法，此方法包括以下步骤：在生物学标本上应用暴露试剂；对生物学标本进行加热；和使用流质除去暴露试剂。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：金伯利克里斯坦森，埃塞尔麦克雷，诺埃米塞巴斯蒂奥，
申请(专利权)人：文塔纳医疗系统公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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