多肽测序的方法和试剂盒技术

本公开提供了用于多肽测序的方法和试剂盒。该方法涉及多肽或其产生的肽的Ｎ－末端的衍生化。一种或多种产生的衍生分析物的质谱分析提供了本领域普通技术人员能用所熟知的技术进行翻译的质谱。本文还公开还描述了能提高该增强方法方便实施的试剂盒。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用质谱技术对多肽进行测序的方法和试剂盒。本方法和试剂盒对鉴定高分子量多肽，用于生物学、药物学、个人清洁和织物清洁领域特别有用。
技术介绍
近来，对于高灵敏度肽和多肽测序用途已开发了基质辅助激光解吸离子化(MALDI)质谱分析和电子喷雾离子化。见例如Spengler等，“通过基质辅助激光解吸离子质谱分析进行肽测序(Peptide Sequncing by Matrix-assistedLaser-desorption Mass Spectrometry)”，Rapid Communication in MassSpectrometry，Vol.6，pp.105-108(1992)；Spengler等，“基质辅助激光解吸离子质谱分析中源后衰变的基本形式(Fundamental Aspects of PostsourceDecay in Matrix-Assisted Laser Desorption Mass Spectrometry)”，Journalof Physical Chemistry，Vol.96，pp.9678-9684(1992)；Kaufman等，“通过采用基质辅助激光解吸离子化在反射飞行时间中的产物离子分析进行线性肽的质谱分析测序(Mass Spectrometry Sequncing of Linear Peptides byProduct-ion Analysis in a Reflection Time-of-flight Mass SpectrometerUsing Matrix-assisted Laser Desorption Ionization)”，RapidCommunication in Mass Spectrometry，Vol.7，pp.902-910(1993)；Kaufmann等“在飞行时间质谱仪中的肽测序基质辅助激光解吸离子化(MALDI)后源后衰变的评估(Sequencing of Peptides in a Time-of-flight Mass Spectrometer；Evaluation of Postsource Decay Following Matrix-assisted LaserDesorption Ionisation(MALDI))，International Journal of MassSpectrometry and Ion Process，Vol.l31，pp.355-385(1994)Kaufmann等，“基质辅助激光解吸/离子化-反射飞行时间质谱分析中的源后衰变和迟发提取(Post-source Decay and Delayed Extraction in Matrix-assisted LaserDesorption/Ionisation-Reflection Time-of-flight Mass Spectrometry)”，Rapid Communications in Mass Spectrometry，Vol.10，pp.1199-1208(1996)；和Spengler，“生物分子的基质辅助激光解吸/离子化质谱分析中的源后衰变分析(Post-source Decay Analysis in Matrix-assisted LaserDesorption/Ionizat ion Mass Spectrometry of Biomolecules)”，Journal ofMass Spectrometry，Vol.32，pp.1019-1036(1997)；Carr等，“分析生物技术中质谱分析的集合(Integration of Mass Spectrometry in AnalyticalBiotechnology)”，Analytical Chemistry，Vol.68，pp.2802-2824(1991)；YatesIII等，“用MS探索基因组(Mining Genomes With MS)”，AnalyticalChemistry，Vol.68，pp.534A-540A，(1996)；Morris等，“新颖四极/直角加速飞行时间质谱仪上的高灵敏度碰撞激活的分解串联质谱分析(HighSensitivity Collisionally Activated Decompostion Tandem MassSpectrometry on a Novel Quadrupole/Orthagonal Acceleration Time-of-flight Mass Spectrometer)”，Rapid Communications in Mass Spectrometry，Vol.10，889-896(1996)。MALDI在质谱分析领域提供了几个进步。例如，MALDI比常规电喷三重四极设备灵敏度高。当与飞行时间质谱分析仪联用时，MALDI还能用于比用三重四极设备分析的肽质量更大的肽。MALDI还可用于分析样品纯化最低的复杂混合物。另一方面，电喷离子化易于和强效分离技术(包括液相层析(LC)和各种形式的毛细电泳(CE))接合。当使用LC和CE作为样品纯化和引入装置时，可以实现高度自动化分析。然而，目前MALDI和在较低的程度上电喷离子化质谱法，不能充分提供可预测的串联质谱片段化图式。例如，通常观察到多个离子系列(包括a-离子、b-离子和y-离子)，导致MALDI发送后衰变谱太复杂，不能有效翻译和测序。电喷离子化产生的带多个电荷的前体离子形成了多种离子系列(b-和y-离子)，加上中间片段以及带单个或多个电荷的离子，得到的串联质谱也常常难于从头翻译。因此，片段化的问题已限制了用质谱分析快速测序多肽的能力。结果，质谱分析特别是MALDI质谱分析在该领域中价值有限。几个研究小组已尝试通过使用化学衍生技术，改进质谱分析在多肽测序领域中的实用性。已利用这些技术在肽的MSMS谱中促进和指导片段化，目标是提高灵敏度和降低得到的质谱的复杂性。这些已知技术大多提供了阳离子衍生物。见例如Kidwell等，“用二级离子质谱分析进行肽测序(Sequencing ofPeptides by Secondary Ion Mass Spectrometry)”Journal of the AmericanChemical Society，Vol.106，pp.2219-2220(1984)(用季铵基团衍生，用静态SIMS离子化法分析(在MALDI和电喷离子化开发之前))。使用MALDI和电喷离子化与低能碰撞活化这些技术证明一般无效。最近，研究人员已利用其它衍生技术，尝试用质谱分析法改进肽/多肽测序。例如，已显示氧化存在于胰蛋白酶肽(用胰蛋白酶消化产生的肽)中的半胱氨酸残基可改进电喷串联质谱的片段化。见例如Gaskell等，“气相肽离子的低能量分解中质子化位点的作用(Role of the Site of Protonation in theLow-Energy Decompositions of Gas-Phase peptide Ions)”，Journal of theAmerican Societ本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定多肽的氨基酸序列的方法，其特征在于，该方法包括：（ａ）用一种或多种当与多肽或肽偶联时，ｐＫａ小于约２，优选小于０，更优选小于－２的酸性基团试剂衍生该多肽的Ｎ－末端或该多肽产生的一条或多条肽的Ｎ－末端，以提供一种或多种衍生分析物；（ｂ）用质谱分析技术分析一种或多种衍生的分析物，以提供一种片段化模式，优选该片段化模式基本上没有ａ－离子和ｂ－离子；和（ｃ）翻译该片段化模式。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：TW基奥，RS杨古斯特，
申请(专利权)人：宝洁公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]