一种新的多肽——含WD重复域的G-beta蛋白14.08和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－含ＷＤ重复域的Ｇ－ｂｅｔａ蛋白１４．０８，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如胚胎发育畸形、肿瘤、糖尿病、月经失调、消化性溃疡、心律失常、贫血、癫痫等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的含ＷＤ重复域的Ｇ－ｂｅｔａ蛋白１４．０８的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--含WD重复域的G-beta蛋白14.08，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。Beta-转导素(G-beta)是鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(G蛋白)的三种亚基(alpha，beta及gamma)之一，G蛋白在由跨膜受体生成的转导信号中作为媒介物作用(Gilman A.G.Annu.Rev.Biochem.56615-649(1987))。Alpha亚基与GTP结合并使之水解；beta及gamma亚基对于GTP替换成GDP是必需的，此外膜锚定以及受体识别也需要beta及gamma亚基。G-beta亚基把许多受体与它们的胞内调节蛋白效应子连接。较高等的真核G-beta作为一个小的约有340个氨基酸残基的高度保守蛋白的多基因家族存在。G-beta在结构上由约40个氨基酸残基的八个串连重复序列构成，每一个含有一个色氨酸-天冬氨酸特征序列模板(这种形式的重复有时被称为WD-40重复)。WD蛋白由高度保守的重复单元构成，这些重复单元通常以色氨酸-天冬氨酸(WD)结束。它们调控细胞功能例如细胞分裂，细胞命运决定，基因转录，跨膜信号，mRNA修饰以及泡融合(Neer EJ，Schmidt CJ，Nature1994；371297-300)。人体中含有这类重复片段的蛋白包括人体蛋白12.3.，功能为信号转导；人LIS1蛋白，一种涉及I型无脑回的神经蛋白；外被体beta亚基(beta’-COP)，一种与高尔基体膜形成囊泡以介导蛋白转运生物合成而可逆相关的胞质蛋白复合物的组分。在这些蛋白中，重复的数目在5-8之间不等。在G-beta及类似G-beta的蛋白中，重复扩展了整个序列长度，而在其他蛋白中，它们构成N-端，C-端部分的中心。其保守的特征序列为----x(2)--x(2)--x-W--。G-beta中的WD重复的核心部分结构包括两个转角及三个beta片层，不同生物的G-beta蛋白WD重复域的非核心部分高度同源。G蛋白βγ亚基增进Gα亚基与激素受体，其他胞外信号的结合，并有助于Gαβγ以及受体三元复合物的装配。Gα亚基可交联于G-beta的重复WD域C端，以形成Gα-Gβγ结合位点的一部分。Gβγ亚基还把β肾上腺素能受体激酶(β-ARK)与受体结合。本专利技术的新的含重复WD域的G-beta蛋白与Caenorhabditis elegans中的含WD域，G-beta重复蛋白在蛋白水平上有47％的同一性和65％的相似性，且具有各种共同的特征序列片段及相似的生物学功能，故而命名为含WD重复域的G-beta蛋白14.08。由于如上所述含WD重复域的G-beta蛋白14.08蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的含WD重复域的G-beta蛋白14.08蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新含WD重复域的G-beta蛋白14.08蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--含WD重复域的G-beta蛋白14.08以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码含WD重复域的G-beta蛋白14.08的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码含WD重复域的G-beta蛋白14.08的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产含WD重复域的G-beta蛋白14.08的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--含WD重复域的G-beta蛋白14.08的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--含WD重复域的G-beta蛋白14.08的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与含WD重复域的G-beta蛋白14.08异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中36-422位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1962位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制含WD重复域的G-beta蛋白14.08蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与含WD重复域的G-beta蛋白14.08蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于含WD重复域的G-beta蛋白14.08表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－含ＷＤ重复域的Ｇ－ｂｅｔａ蛋白１４．０８，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]