一种新的多肽--人亮氨酸拉链蛋白 10.01 和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人亮氨酸拉链蛋白１０．０１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如胚胎发育畸形、蛋白质代谢紊乱性疾病和肿瘤疾病等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人亮氨酸拉链蛋白１０．０１的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人亮氨酸拉链蛋白10.01，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。在体内的转录与表达受多种蛋白的共同调控，这些蛋白在生物体内构成了一很大的蛋白家族，即转录因子蛋白家族。该蛋白家族的成员与特定的DNA序列结合，以调控基因的转录与表达。研究发现，这些蛋白的氨基酸序列中均含有多个保守的DNA结合结构域，这些结构域分子在脱离整个蛋白独立存在时，对特异的DNA序列亦具有相当的结合能力。这些DNA结合结构域大致有四种花式结构α螺旋-转角-α螺旋、Cys-His锌指、Cys-Cys锌指及Leu拉链。这些结构花式对维持整个结构域的结构及蛋白在体内的作用活性是十分重要的。Leu拉链类蛋白的主要代表是酵母的转录激活因子GCN4，癌蛋白Jun、Fos、及Myc，增强子结合蛋白C/EBP等。所有这些蛋白均含有4或5个亮氨酸残基，精确地相距7个氨基酸残基。在α螺旋地某一侧面每两圈就出现一个Leu，这些Leu排成一排。这样，两个蛋白质分子的两个α螺旋之间依赖亮氨酸残基之间的疏水作用力形成一条拉链。Leu拉链区可能在多种需要二聚体形式的DNA结合蛋白中充当独立的二聚体形成区域，以促进蛋白与相关DNA的结合及发挥其正常的生物学活性。1998年，Meng等人又从人中克隆得到了一新的亮氨酸拉链蛋白，并对该蛋白的结构及功能进行了详细的研究。该蛋白与已知的各种亮氨酸拉链蛋白相似，其蛋白序列中亦含有高度保守的Leu拉链花式结构。该蛋白在体内与多种相关的DNA结合，以调控相关基因在体内的转录与表达。其突变或表达异常将导致体内相关基因的转录与表达异常，进而引发各种相关的疾病。该蛋白在生物体内通常与Williams综合症及多种发育缺陷型疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。由上可知，Leu拉链在生物体内作为一种转录调控因子调节着体内多种基因的转录与表达。该蛋白通过其蛋白序列中保守的DNA结合结构域与相应的DNA分子结合，并参与调控基因的转录与表达。其突变或表达异常将导致体内相关基因的表达异常，进而引发各种相关的疾病。该蛋白在体内通常与多种发育代谢缺陷型疾病、Williams综合症等疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。通过基因芯片的分析发现，在正常脑、肝癌、肌肉、胎脑、胎肾，胎肺、胎肝、甲状腺、胸腺、成人肝、肺、胶质瘤中，本专利技术的多肽的表达谱与人亮氨酸拉链蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人亮氨酸拉链蛋白10.01。由于如上所述人亮氨酸拉链蛋白10.01蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人亮氨酸拉链蛋白10.01蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人亮氨酸拉链蛋白10.01蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人亮氨酸拉链蛋白10.01以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人亮氨酸拉链蛋白10.01的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人亮氨酸拉链蛋白10.01的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人亮氨酸拉链蛋白10.01的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人亮氨酸拉链蛋白10.01的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人亮氨酸拉链蛋白10.01的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人亮氨酸拉链蛋白10.01异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中1577-1852位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2328位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人亮氨酸拉链蛋白10.01蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人亮氨酸拉链蛋白10.01蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人亮氨酸拉链蛋白10.01表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与人亮氨酸拉链蛋白10.01结合时，一种可引起该蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人亮氨酸拉链蛋白１０．０１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]