一种鉴定哺乳动物前肿瘤和/或肿瘤状态的方法技术

本发明专利技术涉及鉴定哺乳动物前肿瘤和／或肿瘤状态的方法，尤其涉及一种根据嘌呤能受体在这些细胞中的差异表达来鉴定组织和体液中前肿瘤细胞和肿瘤细胞的方法。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及鉴定哺乳动物前肿瘤和/或肿瘤状态的方法，具体涉及一种根据前肿瘤细胞和肿瘤细胞中嘌呤能受体的差异表达来鉴定组织和体液中的这些细胞的方法。背景在诊断癌症时，对活检样品中的细胞特征加以考虑，这些特征例如癌细胞大小和形状的差异程度、分裂活跃的细胞的比例以及侵入毗邻结构。通常采用的组织学染色剂是苏木精(初染)和伊红(复染)，它们可对亚细胞成分作不同的标记。其它诊断方法采用针对细胞或组织中(通过胞内表位)或细胞表面上(通过胞外表位)的特定诊断性分子的抗体，这些抗体可用显微镜分析来显示，例如癌胚抗原(CEA)。下面讨论一些具体例子。前列腺癌在西方国家，前列腺癌的发病率正以令人担忧的速度增加，在过去五年中增加了1倍以上。它是肿瘤中发病率最高的，仅次于全球男性癌症死亡最常见病因肺癌，是澳大利亚主要的死亡病因。良性前列腺增生(BPH)在50岁以上男性中常见，它可能是前列腺上皮内肿瘤(PIN)的先兆，而后者是前列腺癌的先兆。死后研究表明，70％的男性在活到80岁时前列腺中有恶性细胞。该疾病的特征是有惊人的种间差异，其在非洲人-美洲人中最盛行，其次是高加索人，拉丁美洲人稍低一些，亚洲人中最不盛行。然而，在亚洲人群中，它是增长最迅速的肿瘤形式。直到最近，还不清楚这些差异是由于种间遗传差异还是饮食引起的。现在的研究显示饮食是主要的影响因素。目前前列腺癌的诊断和治疗尽管这一情况很严重，但是诊断方法却很少，而且不精确。目前评价预后的方法，如数字式直肠检查(DRE)、超声、前列腺酸(prostatic acid)磷酸酶水平、雄激素减少、前列腺特异性抗原(PSA)密度、PSA周转率、PSA年龄特异性参考范围和Gleason组织病理学等级评分，不能提供有关前列腺癌临床结果的可靠的预测信息。例如，研究已经表明，DRE产生36.9％的假阴性率。PSA是一种33-kDa的丝氨酸蛋白酶，它与前列腺以外的许多组织有关，它受到雄激素、糖皮质激素和孕激素的上调。据信它参与了生长因子的调控。不幸的是，血清PSA水平有23％的假阴性和36.7％的假阳性诊断。甚至有人提出，新筛选检测出的病例有半数以上实际上是假阳性。通过引入其它测试(如PSA密度、周转率、年龄特异性参考范围)以试图改进筛选方法，结果仍不明确。一个研究表明，采用将正常PSA上限升高至4.5毫微克/毫升的年龄特异性PSA参考范围导致不能检测出大量临床表现明显的癌症病例。由于该不确定性，通常要进行前列腺活检来确认恶性肿瘤，但是该测试的假阴性诊断也高得不能令人满意(23％)。治疗的选择很大程度上取决于基于组织切片显微镜分析的临床分期(staging)。该技术依靠判断和大量实验将组织学外观与临床结果关联。不幸的是，众所周知前列腺癌组织是非均质的，在检查的切片中很容易漏掉重要的诊断特征。病情进一步严重时，还没有随机的和控制的实验来检验外科和放疗的结果。治疗选择包括根治性前列腺切除术、放射治疗、去除雄激素和“警戒等待”。对于根治性前列腺切除术的“警戒等待”问题的明确答案是等待前列腺癌干扰对观察试验的结论。这些决定的后果对患者的影响很严重。例如，根治性前列腺切除术通常导致尿失禁、阳痿、膀胱颈狭窄和机能衰退。显然，迫切需要能可靠区分良性前列腺增生(BPH)、前列腺上皮内肿瘤(PIN)、非典型性腺瘤性增生(AAH)和前列腺癌的改进的标记。P2X受体在癌中的作用神经传递介质(如去甲肾上腺素和乙酰胆碱)不仅在突触和神经肌肉接头中起作用，而且还作用于各种组织和器官中的神经传递介质特异性细胞受体。这些受体是将离子引入细胞内的孔样跨膜通道。腺苷三磷酸(ATP)(众所周知是胞内储能的分子流通物)首先被认为是外周神经传递介质，因为它能使平滑肌收缩。ATP以和其它神经传递介质相同的方式起作用，并能激活G蛋白偶联的组织受体(P2Y)(较慢)、最近鉴定出的配体门控嘌呤能(P2X1-7)离子通道(快)，还能起辅助传递介质的作用。尽管它是最近发现的，但嘌呤能传递介质系统可能在进化中很早发展。目前有7个遗传上不同的P2X受体亚型。它们和胆碱能以及肾上腺素能系统的受体一样广泛分布，且发现存在于大多数哺乳动物细胞中。这些受体构成了一类新的快速反应的、结合膜的、配体门控的、钙渗透的、阳离子选择性通道，该类通道由神经末端或局部组织来源的胞外ATP激活。它们主要使钙离子透过，但是也让其它阳离子(如钾和钠)透过，从而介导了去极化。例如，在肺上皮中，P2X通道刺激Cl-通道上调、K+分泌并抑制Na+吸收。ATP能通过上调P2X受体来刺激DNA合成和细胞增殖。该功能与刺激肌醇磷酸敏感型胞内储存物以及其它信号转导通道释放离子性钙和磷脂酶C有关。这些作用可因多肽生长因子和ATP的协同作用而加强。钙通过P2X受体的流入也触发了其它神经传递介质的分泌，起激活钙依赖性钾通道信号的作用，使其它类型的钙通道失活，调节突触囊泡膜的胞吞收回作用，增强神经传递介质的合成，调节分泌可利用的突触囊泡的合并，并触发几种形式的突触可塑性。对P2X受体单一刺激的反应的多样性提示有许多钙激活通道。通过嘌呤能受体起作用的胞外ATP对人乳房癌细胞、前列腺癌细胞、人腺癌细胞和成纤维细胞系也有直接的抗癌作用。细胞毒性T淋巴细胞和天然杀伤(NK)细胞在攻击肿瘤细胞时释放ATP。可通过诱导S期阻断、凋亡，增强对核苷酸、糖磷酸、离子的渗透性以及与其它抗癌药协同可抑制转化的细胞生长。这些作用均未提到未转化的细胞。令人好奇的是，已知肿瘤细胞含有格外高水平的ATP。腺苷和ATP均通过刺激内皮的氮氧化物合成来提高肿瘤内血流量，从而诱导有效的血管舒张。在这种情况下，ATP通过P2Y受体来起作用。氮氧化物的释放也与P2X受体功能关联。例如，非孕羊子宫肌层中发现的90％氮氧化物合成酶活性是钙离子通道依赖型的。上皮粘附蛋白也在癌扩散中起主要作用。在伤口愈合中，细胞受损信号通过胞外P2X受体和胞内缝隙连接点而扩大，刺激钙离子诱导的波扩增。通过P2X进入的胞内钙离子触发膜结合细胞器沿微管输送，重新塑造ECM和上调粘附分子E钙粘着蛋白。前列腺上皮腺泡中发现的肌上皮细胞在原位和体外对癌细胞均有重要的旁泌性作用。癌细胞也受高表达的ECM分子、蛋白酶抑制剂和血管生成抑制剂的影响。在转移性侵入期间，胞外钙流量激活膜结合的金属蛋白酶，该酶有利于组织被侵入细胞穿透。尿激酶纤溶酶原激活剂也与几种恶性肿瘤(包括乳房和前列腺癌)的进展密切相关。为了用较简单的技术来提供更可靠的结果，需要对目前的癌症分期和诊断技术加以改进。适合自动化的诊断方法也是有利的。本专利技术的一个目的是提供一种鉴定前肿瘤细胞和/或肿瘤细胞的方法，该方法克服或基本上改善了现有技术中的至少某些缺陷，或将提供有用的备选方案。专利技术概述嘌呤能神经系统与较为熟知的但作用较慢的肾上腺素能和胆碱能神经系统并行作用。和它们一样，嘌呤能神经系统作用于脑、突触、神经肌肉接点、外周神经系统和平滑肌。激活这些快速作用的配体门控的阳离子受体通道的传递介质是ATP，它通过触发组织中的嘌呤能受体来起作用，从而产生各种代谢反应(包括离子流入细胞)。一套独特的能区分各P2X嘌呤能受体亚型胞外结构域的高特异性抗体已被开发出来。这些受体易用免疫细胞化学方法来显示，以各种表达方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对哺乳动物前肿瘤和／或肿瘤状态进行分期和／或诊断的方法，该方法包括检测所述哺乳动物细胞和／或组织的Ｐ２Ｘ嘌呤能受体表达分布情况，并与预先测定的正常细胞和／或组织的表达分布情况比较。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M斯莱特，J巴登，
申请(专利权)人：生物权威控股有限公司，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]