氧化还原酶同工酶诊断试剂盒的制备制造技术

本发明专利技术公开了一种氧化还原酶同工酶诊断试剂盒的制备，属于酶学领域。其是将试剂分装于安瓿内，便于保存，性能稳定，重复性好，减轻了劳动强度，改变了传统的人工配制试剂的繁琐。并由此而引起的操作过程中个体间存在的差异，从而使操作规范化，使酶的检测及质量控制达到统一的标准，同时使用试剂盒简化了操作过程，省时、快速、便于推广。尤其是当做大量样品检测时试剂盒更方便适用，为临床疾病的诊断和鉴别诊断提供依据。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种氧化还原酶同工酶诊断试剂盒的制备，属于酶学领域。近年来，酶学在临床诊断与治疗中的应用发展非常迅速，现已分别发展为医学中的两个新领域，即诊断酶学和治疗酶学。目前已有上百种酶试验可用于临床诊断。临床酶学的这一发展，部分是由于测定技术的发展，使许多酶的测定已日益精确和简便，可用于常规测定。部分是由于认识到某些疾病发展过程中酶活力必然发生改变这一客观事实，特别是在疾病的早期，用X光片、CT还未能发现病灶时，而体内的酶活性已开始发生变化。如果能定期查体，可做到对疾病的早期发现。值得一提的是，目前临床上诊断酶学的应用多数是对酶的总活性的测定，并且市场上已有相应试剂盒销售，其缺点是缺乏器官特异性。目前有关酶活性测定的试剂盒约有20～30种，同工酶检测试剂盒约有3～5种，但多数用的是化学抑制法或免疫抑制法。而同工酶是指酶蛋白结构不同而具有相同的催化特性的一类酶，不同的同工酶来自不同的组织和细胞。当某一组织或器官发生病变时，由于组织受损或细胞膜通透性的变化，引起细胞内酶大量释入血液而引起血清酶活性的改变。通过同工酶的检测可确定患病部位，从而提高酶学诊断的特异性和敏感性，还可判断预后。目前由于自行配制酶显示液，因所用试剂品种繁多，规格不一，致使酶显示结果不稳定，结果判定不统一，且同工酶检测操作较繁琐，费时等等，特别是大型生化分析仪的应用，使临床生化检测的操作更简便，省时、省力，但其是对总酶活性的测定，缺乏组织特异性，相比较，同工酶的检测使病变早期定性和定位就精确的多了。本专利技术的目的在于提供一种质量优良、性能稳定、重复性能好，同时大大简化了检测的操作过程且使用该试剂盒可使同工酶的检测操作规范化，从而使酶活性的检测及质量控制达到统一标准的氧化还原酶诊断试剂盒的制备。本专利技术的目的由如下技术方案实施做醋酸纤维素薄膜电泳时的试剂配制，其包括有(1)、配制0.04～0.1mol/L电极液，PH为7.5-9.0；(2)、配制0.04～0.2mol/L泡显色膜缓冲液；(3)、冰乙酸做为固定液，用时加水稀释；其中如(2)所述的泡显色膜缓冲液分装安瓿B；如(3)所述固定液分装安瓿F；(4)、配制泡电泳膜缓冲液分装安瓿A按重量百分比，其是取三羟甲基氨基甲烷7.4～83.3％、乙二氨四乙酸8.3～78.4％、氯化钠4.2～68.6％加水溶解，加盐酸调pH 7.0～9.0，加水100～1000ml，用时加水稀释5～25倍；(5)配制显色液(a)、将0.5～1.5mol/L底物和0.05～0.5mol/L缓冲液，底物与缓冲液混合分装安瓿C，按其体积比分别为2.0％～50％∶50.0％～98.0％；若显示乳酸脱氢酶同工酶，底物可以是乳酸或多种乳酸盐类物质，如乳酸钠、乳酸锂等；若显示苹果酸脱氢酶同工酶，底物可用苹果酸或苹果酸盐类物质，如苹果酸钠等；若显示乙醇脱氢酶同工酶，底物可用乙醇、丙醇、n-丁醇或n-戊醇；若显示异柠檬酸脱氢酶同工酶，底物可用异柠檬酸或其盐类，如异柠檬酸钠等；若显示葡萄糖-6-磷酸脱氢酶同工酶，底物可用葡萄糖-6-磷酸或其盐类，如葡萄糖-6-磷酸钠等；若显示谷氨酸脱氢酶同工酶，底物可用谷氨酸或其盐类，如谷氨酸钠等；(b)、将辅酶I的固体粉末和硝基兰四氮唑的固体粉末分装安瓿D，(c)、将吩嗪甲酯偏硫酸固体粉末分装安瓿E，所述辅酶I的固体粉末、硝基兰四氮唑的固体粉末、吩嗪甲酯偏硫酸的固体粉末，按重量百分比，其比例分别为5.8％～93.7％，6.2％～94.0％，0.5％～9.0％，用时安瓿C的内容物、安瓿D的内容物、安瓿E的内容物混合即为显色液。做琼脂糖凝胶电泳试剂配制如下其包括有(1)、配制0.04～0.1mol/L电极液，PH为7.5-9.0；(2)、冰乙酸做为固定液分装安瓿F，用时加水稀释；(3)、配制泡电泳膜缓冲液分装安瓿A按重量百分比，其是取三羟甲基氨基甲烷7.4～83.3％、乙二胺四乙酸8.3～78.4％、氯化钠4.2～68.6％加水溶解，加盐酸调pH 7.0～9.0，加水100～1000ml，用时加水稀释5～25倍；(4)、配制琼脂凝胶内装琼脂糖也可以为琼脂、如(3)所述的安瓿A内的泡电泳膜缓冲液、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮分装安瓿B，按重量百分比，琼脂、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮分别为7.0％～36.4％、52.6％～91.0％、1.4％～19.4％，然后再加入80～120ml的泡电泳膜缓冲液，加热溶解，趁热分装，制备安瓿B；(4)所述的琼脂凝胶的配制，也可以是内装琼脂糖也可以为琼脂、如(3)所述的安瓿A内的泡电泳膜缓冲液、琼脂为0.5g～1g，加入80～120ml的缓冲液，加热溶解，趁热分装，制备分装安瓿B；(5)配制显色液(a)、将0.5～1.5mol/L底物和0.05～0.5mol/L缓冲液，底物与缓冲液混合分装安瓿C，按其体积比分别为2.0％～50％∶50.0％～98.0％；此处若显示乳酸脱氢酶同工酶，底物可以是乳酸或多种乳酸盐类物质，如乳酸钠、乳酸锂等；若显示苹果酸脱氢酶同工酶，底物可用苹果酸或苹果酸盐类物质，如苹果酸钠等；若显示乙醇脱氢酶同工酶，底物可用乙醇、丙醇、n-丁醇或n-戊醇；若显示异柠檬酸脱氢酶同工酶，底物可用异柠檬酸或其盐类，如异柠檬酸钠等；若显示葡萄糖-6-磷酸脱氢酶同工酶，底物可用葡萄糖-6-磷酸或其的盐类，如葡萄糖-6-磷酸钠等；若显示谷氨酸脱氢酶同工酶，底物可用谷氨酸或其盐类，如谷氨酸钠等；(b)、将辅酶I的固体粉末和硝基兰四氮唑的固体粉末分装安瓿D，(c)、将吩嗪甲酯偏硫酸固体粉末分装安瓿E。此处辅酶I的固体粉末、硝基兰四氮唑的固体粉末、吩嗪甲酯偏硫酸的固体粉末，按重量百分比分别为5.8％～93.7％，6.2％～94.0％，0.5％～9.0％，用时安瓿C、安瓿D、安瓿E的内容物混合即为显色液。所述安瓿C中的缓冲液可以是磷酸盐缓冲液，也可以用Tris-HCL或Tris-顺丁烯二酸缓冲液。所述安瓿D中的辅酶I可用辅酶II代替，硝基兰四氮唑可有噻唑兰、碘代硝基四唑代替。所述安瓿D也可混合溶解后制备为冻干试剂，所述冻干试剂的制备将辅酶I和硝基兰四氮唑按重量百分比，为5.8％～93.7％、6.2％～94.0％，加水溶解后分装于安瓿内，进行冷冻干燥后再加入0.5％～9.0％吩嗪甲酯偏硫酸，制备为安瓿F。本专利技术的优点是将试剂分装于安瓿内，便于保存，性能稳定，重复性好，减轻了劳动强度，改变了传统的人工配制试剂的繁琐。并由此而引起的操作过程中个体间存在的差异，从而使操作规范化，使酶的检测及质量控制达到统一的标准，同时使用试剂盒简化了操作过程，省时、快速、便于推广。尤其是当做大量样品检测时试剂盒更方便适用，为临床疾病的诊断和鉴别诊断提供依据。实施例实施例1、做醋酸纤维素薄膜电泳时的试剂配制，其包括有(1)、配制0.1mol/L巴比妥-HCL缓冲液为电极液，PH为8.0；(2)、配制0.06mol/L泡显色膜缓冲液分装安瓿B；(3)、冰乙酸做为固定液，取2ml分装安瓿F，用时加水稀释；(4)、配制泡电泳膜缓冲液分装安瓿A取三羟甲基氨基甲烷3g、乙二胺四乙酸1.2g、Nacl7g，加水溶解，用盐酸调PH8.5。然后加水至1000ml，用时稀释5倍。(5)配制显色液(以乳酸脱氢酶(LDH本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氧化还原酶同工酶诊断试剂盒的制备，做醋酸纤维素薄膜电泳，其包括有：（１）、配制０．０４～０．１ｍｏｌ／Ｌ电极液，ＰＨ为７．５－９．０；（２）、配制０．０４～０．２ｍｏｌ／Ｌ泡显色膜缓冲液；（３）、冰乙酸做为固定液，用时加水稀 释；其特征在于：如（２）所述的泡显色膜缓冲液分装安瓿Ｂ；如（３）所述的固定液分装安瓿Ｆ；（４）、配制泡电泳膜缓冲液分装安瓿Ａ：按重量百分比，其是取三羟甲基氨基甲烷７．４％～８３．３％、乙二胺四乙酸８．３％～７８．４％、氯化钠４．２％～６ ８．６％加水溶解，加盐酸调ｐＨ７．０～９．０，加水１００～１０００ｍｌ，用时加水稀释５～２５倍；（５）配制显色液（ａ）、将０．５～１．５ｍｏｌ／Ｌ底物和０．０５～０．５ｍｏｌ／Ｌ缓冲液，底物与缓冲液混合分装安瓿Ｃ，按其体积比为２．０ ％～５０％∶５０．０％～９８．０％；（ｂ）、将辅酶Ⅰ的固体粉末和硝基兰四氮唑的固体粉末分装安瓿Ｄ；（ｃ）、将吩嗪甲酯偏硫酸固体粉末分装安瓿Ｅ；其中所述辅酶Ⅰ的固体粉末、硝基兰四氮唑的固体粉末和吩嗪甲酯偏硫酸固体粉末，按重量百分比，其 比例分别为５．８％～９３．７％，６．２％～９４．０％，０．５％～９．０％，用时将安瓿Ｃ、Ｄ、Ｅ混合即为显色液。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：舍英，陈必珍，闫美容，侯金凤，
申请(专利权)人：呼和浩特同日试剂有限公司，
类型：发明
国别省市：15[中国|内蒙]