一种窖泥己酸菌液的制作方法技术

本发明专利技术具体涉及一种窖泥己酸菌液的制作方法，以老窖泥为样品，利用RCM培养基对窖泥中产己酸功能菌进行优选，得到己酸高产菌种，具体包括以下步骤：选取窖泥、窖泥水浴热处理、筛选己酸菌、菌种低温厌氧保存、菌种生长规律研究、菌种扩大培养和灌窖养护。该窖泥己酸菌具有相对较强的产己酸能力以及较强的繁殖力，在扩大培养过程中，通过分析菌种生长曲线，确定最佳接种时间，从而保证了最大的菌体数量与活力；同时扩培过程主要利用酿造生产原料制备微生物培养基，即大曲粉、窖泥粉、黄浆水、酒头等，增强了己酸菌适应能力；应用于窖池可提高窖泥中己酸菌数量，改善窖泥品质。

【技术实现步骤摘要】
一种窖泥己酸菌液的制作方法
本专利技术属于白酒酿造领域，具体涉及一种窖泥己酸菌液的制作方法。
技术介绍
白酒酿造是中华民族的传统行业。在浓香型白酒的生产中，窖池越老，产酒质量越好。此外，靠近窖池窖底或窖壁的酒醅产酒，酯含量高(尤其是己酸乙酯、丁酸乙酯)，酒质好；就同一窖池而言，一般底层产酒比中层好，中层产酒比上层好，由此可见，浓香型白酒酒质与窖池窖泥有着密切关系。研究发现，老窖泥中含有多种厌氧功能菌，主要为厌氧芽孢杆菌，它们参与着白酒发酵生香的作用。由于己酸乙酯是构成浓香型白酒主体香的物质，因此己酸菌就成为窖泥的主要功能菌。窖泥作为浓香型大曲白酒生产过程中的重要条件之一，对酒中微量香味成分的形成及其量比关系起着重要的作用。浓香型白酒“窖香浓郁”是酒中主体香己酸乙酯所体现出来的风格，它主要靠窖泥中产己酸功能菌代谢生成己酸，再与乙醇酯化而形成的。现有窖泥中己酸菌的含量非常有限，而己酸菌含量的多少会直接影响浓香型白酒质量。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的窖泥中己酸菌含量较少的问题，本专利技术提供了一种窖泥己酸菌液的制作方法，能够在窖泥中获得己酸高产菌种，提高己酸菌养护液单位体积内所含有益菌数量，应用于窖池可提高窖泥中己酸菌数量，改善窖泥品质。本专利技术要解决的技术问题通过以下技术方案实现：一种窖泥己酸菌液的制作方法，以老窖泥为样品，利用RCM培养基对窖泥中产己酸功能菌进行优选，得到己酸高产菌种，具体包括以下步骤：步骤一：选取窖泥；步骤二：窖泥水浴热处理；<br>步骤三：筛选己酸菌；步骤四：菌种低温厌氧保存；步骤五：菌种生长规律研究；步骤六：菌种扩大培养；步骤七：灌窖养护。优选地，上述选取窖泥具体为：对优质窖池黄水线下窖壁泥取样，位于窖壁距离窖底15-20cm处进行多点取样，取样后将窖泥揉和均匀，2-6℃真空密封保存。优选地，上述窖泥水浴热处理具体为：称取一定量的老窖泥，加入装有玻璃珠的无菌水中，连续振荡至样品分散均匀，形成窖泥悬液；吸取窖泥悬液于试管中，75-85℃水浴热处理淘汰非芽孢营养体，水浴过程间歇晃动避免局部受热。优选地，上述筛选己酸菌具体为：取窖泥悬液于装有RCM培养基的三角瓶中，利用液体石蜡封住培养基液面，35℃恒温培养11d，观察培养液产气情况；选择产气量大的培养液进行转接培养，观察细菌产气情况以及对其进行己酸定性定量分析，优选己酸产量高的复合己酸菌。优选地，上述转接培养具体为：吸取培养液接种至RCM培养基试管中，用液体石蜡封盖液面，35℃深层恒温培养11d。优选地，上述菌种低温厌氧保存具体为：利用液体石蜡隔绝空气将菌种进行试管深层培养，然后置于2-6℃冰箱冷藏保存。优选地，上述菌种生长规律研究具体为：采用无菌操作以5％的接种量将菌种转接至RCM培养基中，35℃恒温培养12d；利用空白培养基作对照，每天检测菌体产气情况、OD600nm值以及菌体数量，以培养时间为横坐标，菌体数量、OD600nm值为纵坐标绘制菌种生长曲线；根据微生物生长曲线确定最佳接种时间，保证最大的菌体数量与活力，为扩大培养提供依据。优选地，上述菌种扩大培养具体为：以酿造原料为主的天然培养基对菌种进行逐级扩培，先对培养基在121-126℃进行30-40min高温湿热灭菌处理，待冷却至室温后添加酒头搅拌均匀，以10％接种量进行高液面逐级扩大培养，并用少量酒头封培养基液面，将窖泥己酸菌液扩培，35℃恒温培养5-6d后，菌体数量至9.6×108-10.0×108个/mL。优选地，上述天然培养基包括5％曲粉，4％酒头，4％豆粕粉，1％窖泥粉，0.5％黄浆水，其余为水。优选地，上述灌窖养护具体为：酿造车间窖池残糟清理完毕后，利用竹签对窖池四壁成30度角打孔，孔径6-10mm，孔深5cm，孔距6-8cm；将窖泥己酸菌液搅拌均匀，沿窖壁自上而下灌淋，灌淋一遍后稍停片刻，待菌液渗透后再灌淋；用木质抹板将窖壁抹平，匀撒1.0-1.5kg优质大曲细粉，即可将固体酒醅进行入窖。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：1.本专利技术公开了一种窖泥己酸菌液的制作方法，以微生物实验技术为基础，利用优质窖泥为试验样品，通过富集、分离、优选获得产己酸功能菌，制作出了高菌数培养液，将菌液应用于窖池养护、人工窖泥的制作等，可提高窖泥质量，改善劣质窖池；2.本专利技术在菌种扩大培养过程中，通过分析生长曲线，确定最佳接种时间，从而保证最大的菌体数量与活力；菌种扩培过程主要利用酿造生产原料制备微生物培养基，即大曲粉、窖泥粉、黄浆水、酒头等，用以增强己酸菌适应能力；己酸菌扩培所用天然培养基按比例配制完成后均进行了高温湿热灭菌处理，这样有助于淘汰原料中所含杂菌，使己酸菌在培养过程中建立起优势菌群，更好的保证了菌液质量；3.本专利技术通过天然培养基不同营养物配比研究，探索得到最佳培养方案，从而提高了培养液有益菌数量。附图说明图1是本实施例窖泥己酸菌液的制作方法流程图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。本实施例提供了一种窖泥己酸菌液的制作方法，以老窖泥为样品，利用RCM培养基对窖泥中产己酸功能菌进行优选，得到生长速度快，繁殖力强的己酸高产菌种。在菌种的扩繁过程，选用以酿造原料为主的天然培养基进行逐级扩培，使菌数浓度最高(9.6×108-10.0×108个/mL)。该窖泥己酸菌液应用于窖池养护，可提高窖池窖泥己酸菌数量，改善窖泥质量。该窖泥己酸菌液的制作方法流程图参照图1。本实施例选择优质窖池黄水线下窖壁泥取样，位于窖壁距离窖底15-20cm处进行取样并将窖泥揉和均匀，以待下步操作。如需要保存，最好于2-6℃真空密封保存。用电子天平称取老窖泥10g，加入装有少量玻璃珠的100mL无菌水中(无菌水需进行121℃、20min湿热灭菌处理)，以180r/min连续振荡30min，使样品分散均匀。无菌操作吸取10mL窖泥悬液于试管中，75-85℃水浴热处理10min淘汰非芽孢营养体，水浴过程间歇晃动避免局部受热。无菌操作吸取10mL窖泥悬液于120mL无菌RCM培养基中(100mL小三角瓶装液120mL)，利用3mL液体石蜡封住培养基液面，35℃恒温培养11d，观察培养液产气情况。选择产气量大的培养液进行转接培养，即吸取2mL培养液接种至含20mL无菌RCM培养基试管中，500μL液体石蜡封盖液面，35℃深层恒温培养11d。观察细菌产气情况以及对其进行己酸定性定量分析，优选己酸产量高的复合己酸菌。利用液体石蜡隔绝空气将菌种进行试管深层培养，然后置于2-6℃冰箱冷藏保存。①己酸定性分析将己酸菌培养液充分混匀后准确吸取4mL菌液，然后加入1mL5％醋酸铜溶液，再加入1mL正丁醇充分振荡1min，静置使溶液分层，观察正丁醇层颜色。如果呈现蓝绿色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，以老窖泥为样品，利用RCM培养基对窖泥中产己酸功能菌进行优选，得到己酸高产菌种，具体包括以下步骤：/n步骤一：选取窖泥；/n步骤二：窖泥水浴热处理；/n步骤三：筛选己酸菌；/n步骤四：菌种低温厌氧保存；/n步骤五：菌种生长规律研究；/n步骤六：菌种扩大培养；/n步骤七：灌窖养护。/n

【技术特征摘要】
1.一种窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，以老窖泥为样品，利用RCM培养基对窖泥中产己酸功能菌进行优选，得到己酸高产菌种，具体包括以下步骤：
步骤一：选取窖泥；
步骤二：窖泥水浴热处理；
步骤三：筛选己酸菌；
步骤四：菌种低温厌氧保存；
步骤五：菌种生长规律研究；
步骤六：菌种扩大培养；
步骤七：灌窖养护。


2.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述选取窖泥具体为：对优质窖池黄水线下窖壁泥取样，位于窖壁距离窖底15-20cm处进行多点取样，取样后将窖泥揉和均匀，2-6℃真空密封保存。


3.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述窖泥水浴热处理具体为：
称取一定量的老窖泥，加入装有玻璃珠的无菌水中，连续振荡至样品分散均匀，形成窖泥悬液；吸取窖泥悬液于试管中，75-85℃水浴热处理淘汰非芽孢营养体，水浴过程间歇晃动避免局部受热。


4.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述筛选己酸菌具体为：
取窖泥悬液于装有RCM培养基的三角瓶中，利用液体石蜡封住培养基液面，35℃恒温培养11d，历经11d后培养液产气过程已经停止，观察该培养阶段的产气情况；
选择产气量大的培养液进行转接培养，观察细菌产气情况以及对其进行己酸定性定量分析，优选己酸产量高的复合己酸菌。


5.根据权利要求4所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述转接培养具体为：吸取培养液接种至RCM培养基试管中，用液体石蜡封盖液面，35℃深层恒温培养11d。


6.根据权利要求1所述的窖泥己酸菌液的制作方法，其特征在于，所述菌种...

【专利技术属性】
技术研发人员：李若任，苗子健，
申请(专利权)人：保定五合窖酒业有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13