无氰化物溶血素制造技术

一种无氰化物溶血素，为包含表面活性剂物质的水溶液，其特征在于该表面活性剂为由下列物质组成的组：１）可以和血色素配合的阴离子表面活性剂，选自烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐以及烷基硫酸盐，２）能溶解红细胞的阳离子表面活性剂，选自季铵盐、吡啶鎓盐、氧化胺型季铵盐，３）起到增溶作用的非离子表面活性剂。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于测定血样中总血红蛋白浓度(人工或自动)及用于同时进行白细胞计数或白细胞亚群的分类计数的溶血素组合物以及使用方法。
技术介绍
总血红蛋白的测定是血液携氧量的重要指标。迄今为止已经在正常人和血液病患者中发现了300种以上的血红蛋白，这些异常导致血红蛋白浓度的改变或者血红蛋白携氧能力的改变，从而出现镰状细胞性贫血、地中海贫血和血红蛋白异常等疾病。测定血样中血红蛋白的浓度是相关疾病诊断的十分重要的依据，对监控血红蛋白疾病的治疗以及其他可能影响血红蛋白水平改变的疾病的治疗也是十分重要的。在用人工或自动测定血样中总血红蛋白浓度及用于同时进行白细胞计数或白细胞亚群的分类计数的分析实验中，尽管通过标准的氰化正铁血红蛋白方法及其改良的自动方法形成的色原稳定可靠，然而，由于使用氰化钾，试剂废物会引起很大的环境污染。在过去十年中，人们付出了巨大的努力以开发不使用氰化物的自动血红蛋白分析方法。Oshiro等说明了用于血红蛋白分析所使用的试剂，该试剂包含十二烷基硫酸钠(SLS)和Triton X-100(非离子型表面活性剂)。SLS用于溶解红细胞，并被认为进一步产生SLS-血红蛋白复合物，它在539nm处具有最大吸光度并在572nm处有肩峰。SLS法现为世界公认的一种比较稳妥可靠的无氰化物的测定方法，然而使用oshiro方法不可能在进行血红蛋白测定的同时分析白细胞。因为高浓度的十二烷基硫酸钠将白细胞破坏程度过深。美国专利号5,242,832(属Sakata)公开了用于对血样白细胞计数并测定血红蛋白浓度的无氰化物溶血素。该溶血素包含至少一种表面活性剂包括阳离子表面活性剂和两性表面活性剂以及至少一种选自下列化合物的血红蛋白稳定剂Tiron、8-羟奎啉、联吡啶、1，10-临菲咯啉、酚类化合物、双酚等等。Sakata说明了白细胞分级分离或三个组(包括淋巴细胞，单核细胞、嗜酸细胞和嗜碱细胞的聚集体以及中性白细胞的聚集体)只有通过使用至少两种适合的表面活性剂和严格控制表面活性剂浓度才能完成。Sakata也说明了溶血素优选的PH值是5.0-8.0。如果PH值是3.0或更小，对白细胞的破坏增加，这样使白细胞的测定困难，如果PH值是9.0或更大，血红蛋白的稳定性随时间变坏。PCT/US95/02897(Kim)公开了用于测定全血样中的血红蛋白的无氰化物方法与试剂。该试剂包括配体(选自下列化合物咪唑及其衍生物、N-羟乙酰胺、H-羟胺、吡啶、恶唑，噻唑、吡唑、嘧啶、嘌呤、喹啉和异喹啉)以及一种强红细胞溶解能力的表面活性剂(选自十二烷基二甲基胺氧化物和辛基苯氧基聚乙氧基乙醇)。该分析方法快速，不到10秒。然而，该试剂仅在极端碱性pH值11-14条件下操作。此外，Kim没有说明计数白细胞或分别白细胞亚群的能力。上述的无氰化物血红蛋白测定方法中，没有一种可以在血红蛋白测定的同时提供单核细胞和整个粒细胞的数量；然而，这两个参数都是用于各种疾病临床诊断的有价值的工具。这就需要更多用途的无氰化物血红蛋白测定方法和多功能试剂以在单个自动步骤中可以完成若干诊断分析。中国专利申请号98801947属于库而特公司，公开了一种无氰化物试剂组合物，其中含有选自下列化合物的血红蛋白配体三唑及其衍生物、四唑及其衍生物、4，6-二羟基-1，3，5三嗪-2-羧酸的碱金属盐、蜜胺、苯胺-2-磺酸、喹那啶酸、2-氨基-1，3，4-噻二唑、三嗪及其衍生物、尿唑、DL-2-哌啶酸、异烟酰胺、邻氨基苯甲晴、6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶、腺嘌呤、3-(2-噻吩基)丙烯酸、苯甲酸和苯甲酸的碱金属和铵盐、吡嗪及其衍生物的有机配体的水溶液。还有选自季铵盐、吡啶盐、有机磷酸酯和烷基磺酸的溶血性表面活性剂以溶解红细胞释放血红蛋白。然而该方法仍然采用了具有一定毒性或者致癌的化合物，对环境依然有一定的污染。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服以上所述溶血素的缺陷，提供一种不含有氰化物、没有毒性的、能够采用可靠方法测定血红蛋白的溶血素，并且同时白细胞能被分成至少两个亚群用于分别记数。本专利技术的另一目的是提供使用该溶血素的方法。本专利技术的技术方案是所述的无氰化物溶血素含有可以和血色素配合的阴离子表面活性剂，选自烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐以及烷基硫酸盐，以及能溶解红细胞的阳离子表面活性剂，选自季铵盐、吡啶盐、氧化胺型季胺盐，还有起到增溶作用的非离子表面活性剂。此组合物在很宽的pH范围内可以使用。本专利技术无氰化物溶血素的技术方案进一步形式为至少一种足以溶解红细胞并释放量血红蛋白的量的表面活性剂，该表面活性剂选自由下列物质组成的组1)至少一种阳离子表面活性剂，该表面活性剂在合适的浓度范围内用特定的仪器能够将人类的红细胞全部溶解并且将白细胞分成两个亚群。包括季铵盐、吡啶盐、氧化胺型季铵盐。 其中式中的R1、R5是碳原子数是8-18的长链烷基、烯基或炔基，R2、R3、R4都是碳原子数1-5的短链烷基、烯基、炔基或者氢原子，x-是任何一种阴离子。2)至少一种阴离子表面活性剂，能在合适的浓度下和血红蛋白结合形成一种色原，从而测定其浓度，该阴离子表面活性剂具有以下结构R1-SO4-X+式中R1是碳原子数是8-18的长链烷基、烯基或炔基，x+是任何碱金属的阳离子或者铵离子。3)至少一种非离子表面活性剂，具有以下结构 其中R1是碳原子数是6-8的长链烷基、烯基或炔基，n为4-40的整数。在优选的方式中，该组合可以用于同时提供总血红蛋白浓度的测定、白细胞的计数和血样中白细胞亚群的分别计数，其中所说的白细胞被区分成包括淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的三个亚群。在溶解红细胞的阳离子表面活性剂中，季铵盐是优选的。在溶血素组合物中的表面活性剂的浓度需要足以溶解红细胞并释放血红蛋白、而同时保存白细胞核。为了对白细胞计数，不需要使白细胞膜保持完整。一般来说，使用上述的本专利技术溶血素组合物中的溶血性表面活性剂时，当红细胞完全溶解和破坏时，白细胞膜部分溶解。白细胞留下的核使得可以使用直流阻抗方法计数白细胞并将白细胞亚群分别成淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。在上述溶血素组合物中的阳离子表面活性剂浓度是大约2g/L至大约100g/L，优选地是大约15g/L至大约60g/L。在溶血素中阴离子表面活性剂的浓度要足以使所有的血红蛋白都形成阴离子表面活性剂-血红蛋白复合物。如果阴离子表面活性剂的量不足，使形成的复合物色原不稳定。本专利技术无氰化物溶血素中阴离子表面活性剂的浓度在0.1-10g/L范围，优选0.5-3g/L，最为合适。本专利技术无氰化物溶血素，非离子表面活性剂的浓度范围可以在0.5-5g/L范围内。本专利技术无氰化物溶血素，所述阳离子表面活性剂浓度可以是25g/L，阴离子表面活性剂的浓度可以为1.5g/L，非离子表面活性剂的浓度可以为0.58g/L。本专利技术无氰化物溶血素，所述阳离子表面活性剂为十二烷基三甲基溴化铵其浓度是25g/L，阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SLS)其浓度为1.5g/L，非离子表面活性剂为乳化剂OP其浓度为0.58g/L。本专利技术的另一个目的是，提供一种使用该溶血素的方法，和适当的血液稀释剂配合用于测定血液中的血红蛋白浓度或同时与白细胞计数或白细胞亚群的分别计数。该方法包括用适合的血液稀释剂稀释血样、将足量的溶血素组合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐祖越，
申请(专利权)人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：