收集和稳定生物样品的装置、抑制体外基因诱导的方法和制备全血样品的方法制造方法及图纸

一种收集容器和一种收集预定体积的生物样品特别是全血样品的方法，包括其量可有效稳定和抑制基因诱导的至少一种基因诱导封闭剂。在收集时，这种基因诱导封闭剂能稳定生物样品中的核酸以封闭储存在室温时发生的样品中体外基因诱导。稳定剂包括阳离子化合物、去垢剂、特别是阳离子去垢剂、离液盐、核糖核酸酶抑制剂、螯合剂、有机溶剂、有机还原剂以及它们的混合物。生物样品是直接从动物身上收集到的并且立即与基因诱导封闭剂混合，而不经任何中间加工或处理。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及收集、储存、运输和稳定生物样品尤其是一个直接从病人那里得到的全血样品的方法和装置。更具体地，本专利技术涉及抽真空的液体样品的容器，其中含有一种起稳定作用的添加剂，以在收集生物样品的过程中立即稳定核酸并抑制在储存过程中发生体外基因诱导和降解。
技术介绍
样品收集容器已被普遍使用多年，用于收集和储存血样和其它体液或样品。典型的收集容器是玻璃或塑料试管并有一个弹性塞。这些玻璃或塑料试管通常被用于收集血样。在试管抽真空时可利用血样收集管吸入一定体积的血样。试管可含有各种添加剂，如乙二胺四乙酸(EDTA)，它可制备血样供特定的测试。一种普通添加剂是抗凝剂。典型的抗凝添加剂是一种柠檬酸盐或肝素缓冲水溶液。柠檬酸盐水溶液与血样以规定量混合可决定在进行一些试验时所需的抗凝剂的量。这些装置仅被用于血清学测试因为添加剂并不能稳定样品中的核酸。在运送过程中，不稳定RNA分子被酶降解以致后续的RNA分离和分析变得困难。而且，机械剌激或是物理环境的变化如，举例来讲，温度的影响或采血和运送时细胞的破坏会诱导基因转录而使某些mRNA种类产生过量或不足。常用的添加剂包括抗凝剂以使血样品保持一种抗凝状态，使其可被用于进行不同的处理步骤中。例如，抗凝剂典型地用于血样，然后离心而把血分离成细胞层。含有一种抗凝剂的这种类型样品管的一个实例公开在Smith等的美国专利5,667,963号。近年，在生物、医学和药学领域中有越来越多的兴趣研究基因活性和生物样品中所得到的核酸。特别是，核糖核酸能提供广泛的遗传起源的信息和细胞功能活性的信息。这些信息可用于临床诊断传染病，检测表达癌基因的细胞是否存在，检测遗传疾病，监测宿主防御机制的状态，研究和诊断代谢疾病，研究药物在病人体内对基因表达的影响，研究药物的副作用和毒性，以及确定HLA类型或其他特殊的标记。在把细胞破坏、把RNA释放入溶液后有很多方法用于分离RNA。另一些方法用于保护RNA以防被内源性RNA酶所降解。然后，RNA能从DNA和蛋白中分离出来，后者和RNA一起被增溶。溶解细胞、溶解RNA和抑制RNA酶的过程通常是逐步进行的而不是同时进行的。已知一些溶解细胞和抑制RNA酶活性的方法是使用胍的离液盐(chaotropic salt)。一个常用的分离RNA的方法包括在异硫氰酸胍盐中搅匀细胞，然后依次加入乙酸钠和酚，以及氯仿/异戊醇。离心之后，在加入乙醇后RNA从上层沉淀下来。另外的方法包括在细胞悬液中加入热的酚，然后用酒精沉淀。阴离子和阳离子表面活性剂可用于溶解细胞和释放细胞质RNA。这种溶解细胞并同时把溶液中的DNA和RNA沉淀下来的方法的一个实例在美国Macfarlane的专利5010183中得到揭示。在此过程中，使RNA不能溶解。在细胞悬液中加入2％的表面活性剂氯化苄基二甲基正十六烷基铵溶液和40％的尿素以及其它添加剂。然后，将悬液离心，回收不溶物粒状沉淀。把沉淀再悬浮在乙醇中并加入盐使RNA和DNA沉淀下来。一种分析从血液分离的RNA的方法是使用扩增的方法，包括聚合酶链反应，以检测微量RNA的序列。分析RNA的一个困难是在RNA被核酸酶降解之前把RNA从细胞中的蛋白和DNA分离出来。血液中存在足够量的RNA酶和其他核酸酶以破坏未受保护的RNA。因此，这就需要使用一种能从细胞中分离出RNA而又不让核酸酶水解RNA的方法。当今，常规使用的血液收集方法能够收集和保留血液在一段时间之后用于分析。这个收集装置包括一种抗凝剂以防止在储存过程中发生凝结。然而，当有机械剌激或物理环境的变化如温度或血液采集时细胞破裂会导致一些RNA的种类被诱导，血液中的核酸酶在储存和运输时会水解一些RNA的种类。这些分析样品之前的操作因素会导致mRNA过低或过量表达以及最终可用分子诊断检测方法测定的总RNA发生降解。而且，基因诱导能导致样品中RNA水平的上升，这就会引起错误的结果。因此，在工业中就有持续的要求希望有一种改进的方法和收集血液和其他生物样品的装置以便在基于核酸的测试中维持体内的转录状况。专利技术概要本专利技术涉及收集生物样品的方法和装置。更为特别的是，本专利技术涉及一种收集容器和一种收集生物样品的方法以及立即使样品与一种稳定剂接触以封闭样品中基因的体外诱导，因而维持了体内转录的情况。因此，本专利技术的首要方面是提供一种收集生物样品特别是在稳定剂存在时直接从患者中得到的全血样品的方法和装置，以在储存过程中通过抑制或阻抑样品中的基因诱导而稳定和保存RNA。这种稳定剂存在的量能有效的稳定核酸，尤其是RNA，并能抑制和封闭基因诱导。本专利技术的一个方面是制备一个能在室温下长时间保持稳定的生物样品而很少或者是不发生基因诱导。因此，提供了一种方法可以获得在储存过程中在室温稳定而很少发生或不发生基因诱导的生物样品。本专利技术的另一方面是提供一种抑制生物样品中的核酸基因诱导的方法和装置，并溶解细胞、细菌、病毒和网织红细胞。本专利技术的另一方面是提供一种用于接受和收集生物样品的收集容器，此容器预先装有定量的基因诱导封闭剂。本专利技术的又一方面是提供一种稳定生物样品特别是直接从患者身上收集的全血样品以抑制或防止当样品在室温下储存时引起的基因诱导。本专利技术的再一方面是提供一种稳定生物样品特别是直接从患者身上收集的全血样品的方法，该法能抑制或防止当样品在低于室温，典型的在2℃到约8℃，或在适于将样品存档的温度例如在-20℃到-80℃时发生的基因诱导或核酸降解。冻结的样品可以在室温融化以分离核酸。本专利技术的还有一方面是提供一种在收集生物样品时立即封闭体外基因诱导的方法。本专利技术的又一方面是提供一种已预先加入有效量的基因诱导封闭剂的抽真空的收集容器。本专利技术的又一方面是提供一种血液收集容器，该容器的内压足够低，而能将预定体积的生物样品抽吸入容器。以收集一定量的血液，并在收集时将血样和基因诱导封闭剂混合而通过防止基因诱导使之在室温下稳定，以便于以后对能样品进行核酸分析。本专利技术的另一方面是提供一种在含有基因诱导封闭剂和缓冲液的容器中收集血样从而稳定血样的方法。此种基因诱导剂可以是一种去垢剂、离液盐、RNA酶抑制剂、螯合剂、或它们的混合物。混合物的pH调整后可抑制或封闭核酸降解或基因诱导并便于有效地回收分析物。本专利技术的还有一方面是提供一种在从约pH2到约pH5并至少存在一种基因诱导封闭剂的收集装置中稳定血液样品的方法。本专利技术的各方面基本是通过提供一种收集生物样品的装置而获得的。这个装置包括一个容器，它包含有一个侧壁，一个底壁以及一个确定内室界限的开口端和一个关闭开口端的盖子。这个容器包括至少一种基因诱导封闭剂其量能有效地保护生物样品和封闭或抑制体外基因诱导。这种容器预先装有稳定剂。本专利技术的各方面更进一步是通过提供一种制备一种在室温下稳定存在的生物样品的方法而达到，它所包括的步骤有提供一个含有一个侧壁，一个底壁和一个确定内室界限的开口端的样品收集容器，容器至少包含一定量和一定浓度的某种基因诱导封闭剂能有效地封闭体外基因诱导以保护生物样品。生物样品获得后立即引入容器中并与基因诱导封闭剂混合而形成稳定的生物样品。本专利技术的各方面也是通过提供一种收集和稳定全血样品或其他生物样品的方法而达到的。此方法包括提供一个样品收集容器，此容器包括一个侧壁，一个底壁以及形成内室的一个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种收集和稳定生物样品的装置，其特征在于，所述装置包括：内室被加工成规定尺寸以接受所述生物样品的容器，所述容器有开口和用于关闭所述开口的盖子，和含在所述容器内的基因诱导封闭剂，其含量可有效封闭所述生物样品的体外基因诱导并稳定 所述生物样品以防止核酸酶解。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：F奥吉洛，H巴斯蒂恩，U厄尔米勒，L雷能，M瓦伦切克，R怀里奇，
申请(专利权)人：贝克顿迪肯森公司，恰根有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]